高寒藏药──川西獐牙菜组织培养研究──Ⅱ.愈伤组织的生长和培养条件的影响

报道川西獐牙菜愈伤组织的生长动态以及培养基、激素、接种时期、培养温度对其生长的影响。     

高寒藏药──川西獐牙菜组织培养研究Ⅰ.愈伤组织的诱导及初步培养

从川西獐牙菜的胚轴、未成熟种子及幼叶诱导出愈伤组织；试验选用MS、B5和N63种培养基，其中以加有2，4－D3mg／L＋KT0.6mg／L的MS培养基诱导率最高。结果表明,不同培养基及不同激素组合对愈伤组织诱导率有较明显的影响。初步证明了用植物组织培养的方法进行川西獐牙菜的无性快速繁殖是有可能的。     

高寒藏药──川西獐牙菜组织培养研究──Ⅱ.愈伤组织的生长和培养条件的影响

报道川西獐牙菜愈伤组织的生长动态以及培养基，激素，接种时期培养温度对其生长的影响。     

胡萝卜与柴胡的体细胞杂交及其再生愈伤组织的同工酶鉴别

目的:用体细胞杂交技术将中药柴胡的药效成分基因转入胡萝卜,为中药材的种质资源开发、优化和良种选育提供理论与实验数据。方法:取狭叶柴胡的原生质体经300μW·(cm²)^-1照射O,1,2min后分别与胡萝卜原生质体用PEG(聚乙二醇)法进行体细胞杂交,对获得的再生愈伤组织进行形态学、同工酶分析。结果:初步确正9个克隆为狭叶柴胡与胡萝卜的体细胞杂种。结论:为进一步分析杂种中柴胡药效成分的含量及筛选出高药效成分含量的细胞系奠定基础。     

胡萝卜与狭叶柴胡不对称体细胞杂种的分子鉴定

目的 对经同工酶初步确认的4个胡萝卜与狭叶柴胡体细胞杂种进一步从分子水平上证实他们的杂种性质。方法 随机扩增多态性DNA(RAPD)分析和5S rDNA间隔序列差异。结果 4个克隆均含有双亲特征谱带及新带。结论 从分子水平上证实了他们的杂种性质。为进一步分析杂种中柴胡药效成分的含量及筛选出高药效成分含量的细胞系奠定基础。     

南方红豆杉愈伤组织培养条件的优化及紫杉醇积累的基因表达效应分析

目的 优化南方红豆杉愈伤组织诱导与继代培养条件,获得含紫杉醇量高的红豆杉愈伤组织,明确紫杉醇合成相关基因的表达模式与紫杉醇量的关系。方法 探讨了适合南方红豆杉的愈伤组织诱导及继代培养的激素组成及浓度。比较了南方红豆杉 (种胚、幼茎、幼芽)、曼地亚红豆杉 (种胚) 和太平洋红豆杉 (种胚) 不同外植体来源的愈伤组织的生长特点和紫杉醇的量,分析了不同愈伤组织紫杉醇合成相关基因的表达差异。结果 添加 3.0 mg/L 2,4-D 的 Murashige & Skoog (MS) 培养基有利于南方红豆杉的诱导,诱导率高于 92%。添加 2.0 mg/L 2,4-D 与 1.0 mg/L 6-苄基腺嘌呤 (6-BA) 的继代培养基有利于南方红豆杉的紫杉醇积累。同一培养条件下,南方红豆杉种胚来源的愈伤组织紫杉醇量最高,达到干质量的 0.027%。含紫杉醇量高的愈伤组织,其紫杉醇合成途径中的牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶 (GGPPS)、紫杉二烯合成酶 (TASY)、紫杉烷-10β-羟化酶 (T10βH)、10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-β-O-乙酰转移酶 (DBAT)、苯丙氨酸氨基变位酶基因 (PAM)、去苯甲酰紫杉-N-苯甲酰转移酶 (DBTNBT) 等酶基因的表达水平高。结论 从南方红豆杉的种胚为外植体源获得了含紫杉醇量高的愈伤组织,提高 GGPPS、TASY、T10βH、DBAT、PAM、DBTNBT 的表达水平将促进紫杉醇的合成。     

胡萝卜与狭叶柴胡不对称体细胞杂种的分子鉴定

目的 对经同工酶初步确认的4个胡萝卜与狭叶柴胡体细胞杂种进一步从分子水平上证实他们的杂种性质。方法 随机扩增多态性DNA(RAPD)分析和5S rDNA间隔序列差异。结果 4个克隆均含有双亲特征谱带及新带。结论 从分子水平上证实了他们的杂种性质。为进一步分析杂种中柴胡药效成分的含量及筛选出高药效成分含量的细胞系奠定基础。     

西洋参和胡萝卜体细胞融合培养杂种鉴定及愈伤组织中人参皂苷Rb1含量分析

目的：通过采用体细胞融合技术将西洋参基因转人胡萝卜中，为贵重中药、生长受地理环境等限制的中药扩大药源，利用杂种优势为培养适于大面积栽培且有效成分人参皂苷含量较高的优良杂交品种提供理论与实验依据。方法：用PEG法对五加科植物西洋参与伞形科植物胡萝卜进行体细胞融合，通过同工酶进行初步杂种鉴定并用HPLC法测定西洋参和胡萝卜体细胞融合培养愈伤组织中人参皂苷Rbl含量。结果：体细胞融合技术成功地获得了西洋参和胡萝卜体细胞杂交愈伤组织；同工酶分析是鉴定杂种的有效手段之一；在10个杂交体愈伤组织中有6个杂交体愈伤组织人参皂苷Rbl含量比未融合前西洋参愈伤组织中的含量高。     

高寒藏药——川西獐牙菜组织培养研究：II.愈伤组织的生长和培养条件的 …

报道川西獐牙菜愈伤组织的生长动态以及培养基，激素，接种时期培养温度对其生长的影响。     

南方红豆杉愈伤组织培养条件的优化及紫杉醇积累的基因表达效应分析

目的 优化南方红豆杉愈伤组织诱导与继代培养条件,获得含紫杉醇量高的红豆杉愈伤组织,明确紫杉醇合成相关基因的表达模式与紫杉醇量的关系.方法 探讨了适合南方红豆杉的愈伤组织诱导及继代培养的激索组成及浓度.比较了南方红豆杉(种胚、幼茎、幼芽)、曼地亚红豆杉(种胚)和太平洋红豆杉(种胚)不同外植体来源的愈伤组织的生长特点和紫杉醇的量,分析了不同愈伤组织紫杉醇合成相关基因的表达差异.结果 添加3.0 mg/L 2,4-D的Murashige & Skoog(MS)培养基有利于南方红豆杉的诱导,诱导率高于92%.添加2.0 mg/L 2,4-D与1.0 mg/L 6-苄基腺嘌呤(6-BA)的继代培养基有利于南方红豆杉的紫杉醇积累.同一培养条件下,南方红豆杉种胚来源的愈伤组织紫杉醇量最高,达到干质量的0.027%.含紫杉醇量高的愈伤组织,其紫杉醇合成途径中的牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶(GGPPS)、紫杉二烯合成酶(TASY)、紫杉烷-10β-羟化酶(T10βH)、10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-β-O-乙酰转移酶(DBAT)、苯丙氨酸氨基变位酶基因(PAM)、去苯甲酰紫杉-N-苯甲酰转移酶(DBTNBT)等酶基因的表达水平高.结论 从南方红豆杉的种胚为外植体源获得了含紫杉醇量高的愈伤组织,提高GGPPS、TASY、T10βH、DBAT、PAM、DBTNBT的表达水平将促进紫杉醇的合成.