木犀草素对人AC16心肌细胞损伤治疗作用的转录组学研究＊

目的 研究木犀草素（Luteolin，Lut）对阿霉素（Doxorubicin，Dox）诱导的人AC16心肌细胞损伤治疗作用转录组学的影响。方法 采用MTT法检测AC16细胞活力，Hoechst33258染色法检测细胞凋亡水平。人AC16心肌细胞设置为正常组、Dox组、Dox加Lut组。正常组加入空白培养基，Dox组加入1 μM的Dox，Dox加Lut组加入1 μM的Dox及20 μM的Lut。药物作用24 h后，提取各组细胞总RNA，进行转录组测序，并对差异表达基因（DEG）进行基因本体（GO）功能和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。结果 Dox促进了AC16细胞的凋亡（P < 0.05），Lut抑制了Dox诱导的AC16细胞凋亡（P < 0.05）。Dox组与正常组进行比较得到3 637个差异基因，其中上调基因1 723个，下调基因1 914个；Lut加Dox组与Dox组进行比较得到212个差异基因，其中上调基因52个，下调基因160个。选取交集基因，通过GO功能和KEGG富集分析，差异基因主要富集于细胞骨架、细胞囊泡、钙离子内流、内质网应激以及细胞衰老、细胞凋亡等信号通路。结论 木犀草素可通过多靶点抑制阿霉素诱导的人AC16心肌细胞凋亡，其中调控心肌细胞骨架及细胞结构损伤可能是抑制细胞凋亡的关键机制。     

南蛇藤提取物对人胃癌SGC-7901裸鼠移植瘤生长及凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨南蛇藤茎醋酸乙酯提取物(COE)对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长及凋亡相关蛋白表达的影响。方法建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,随机分为模型组,COE低、中、高剂量(10、20、40 mg/kg)组和希罗达(267 mg/kg)组,每组7只,各组ig给药,给药3周后检测裸鼠体质量、肿瘤体积、瘤质量等,绘制肿瘤生长曲线,并计算抑瘤率。应用TUNEL法检测COE处理后各组移植瘤组织中的细胞凋亡情况;免疫组织化学法和Western blotting技术分别检测各组移植瘤组织和SGC-7901肿瘤细胞中p53、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 COE能够较好地抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长,能明显缩小肿瘤体积,且呈剂量依赖性。COE低、中、高剂量组的抑瘤率分别为33.3%、46.8%、57.7%。TUNEL法显示COE处理后肿瘤细胞凋亡较模型组明显增多。免疫组化结果显示COE处理后移植瘤组织中p53和Bax蛋白表达有升高的趋势,而Bcl-2蛋白表达有降低的趋势。其中与模型组相比,COE高剂量组中p53和Bax蛋白表达显著升高(P0.001),而Bcl-2蛋白表达显著降低(P0.001)。Western blotting结果显示与免疫组化有大致相同的变化趋势。结论 COE对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤具有明显的抑制作用,其机制可能与上调p53和Bax的表达,下调Bcl-2的表达,诱导胃癌细胞凋亡有关。     

从乳腺癌不同分子分型谈中医药研究策略

乳腺癌的发病率逐年增高，现已位居女性恶性肿瘤发病之首。近年来，中医药治疗乳腺癌的相关研究取得诸多进展，且中医外科辨病与辨证、整体与局部、内治与外治相结合的个体化治疗原则，与现代医学基于不同分子分型的精准治疗理念相符。针对乳腺癌的不同分子分型及治疗现状，从中医药抗三阴性乳腺癌（TNBC）复发转移、改善人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌靶向药物耐药、缓解激素受体（HR）阳性乳腺癌内分泌治疗耐药及其不良反应，归纳总结近年来中医药研究的重要成果，为乳腺癌的中医药治疗提供发展方向。     

南蛇藤茎提取物对人胶质母细胞瘤细胞株U251增殖和凋亡的影响及机制

目的:探讨南蛇藤茎乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extract,COE)抗人胶质母细胞瘤U251细胞株的增殖和凋亡作用,研究COE抗肿瘤的分子机制,为寻找新的治疗胶质母细胞瘤药物提供依据。方法:以人胶质母细胞瘤细胞株U251为研究对象,设空白组和COE组,应用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]比色法观察COE对细胞活力的抑制作用;5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxy uridine,Brd U)标记检测COE对U251细胞增殖的影响;Annexin V/碘化丙啶(PI)双标法检测COE对U251细胞凋亡的作用;透射电镜下观察经COE干预后U251细胞超微结构变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测COE对凋亡标志基因B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,COE能够明显抑制U251细胞的增殖(P0.05);诱导U251细胞的早期凋亡,电镜下可见到凋亡小体,影响并改变U251细胞超微结构;COE能促进Caspase-3,Bax蛋白表达,降低Bcl-2,Bcl-2/Bax蛋白表达(P0.05)。结论:COE能有效抑制胶质母细胞瘤U251细胞株的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,其作用机制与调节Bcl-2和Caspase-3表达有关。     

南蛇藤提取物通过调控基质金属蛋白酶组及其抑制因子抑制人胃癌SGC-7901细胞侵袭转移的研究

目的探讨南蛇藤提取物(COE)对人胃癌SGC-7901细胞的侵袭和转移的影响及其分子机制。方法 MTT法检测COE对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;Transwell小室实验检测COE对SGC-7901细胞侵袭和转移能力的影响。Western blotting检测经COE作用后的SGC-7901细胞中金属基质蛋白酶(MMPs)MMP2、MMP9和金属基质蛋白酶抑制因子(TIMPs)TIMP1、TIMP3的蛋白水平。RT-PCR检测经COE作用后的SGC-7901细胞中MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP3的m RNA表达情况。结果 Transwell实验显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞穿膜数明显减少并呈一定的浓度依赖性。Western blotting结果显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞,MMP2、MMP9蛋白的表达水平明显降低,而TIMP1、TIMP3蛋白表达水平明显上调。RT-PCR结果显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞中MMP2和MMP9的m RNA水平有轻微升高趋势,而TIMP1和TIMP3的m RNA水平明显大幅上调(P0.001)。结论 COE能明显抑制人胃癌SGC-7901细胞的侵袭和迁移,其机制可能与下调MMP2、MMP9蛋白水平直接相关。而其作用的实现,很可能是通过直接上调TIMP1和TIMP3的m RNA转录水平从而提高TIMPs蛋白表达水平实现的。     

南蛇藤提取物对人肝癌细胞HepG2上皮间质转化的影响

目的：结合体内外实验研究南蛇藤提取物对人肝癌细胞HepG2上皮间质转化的作用及分子机制。方法：取对数生长期HepG2细胞,除对照组外,分别给予南蛇藤提取物10、20、40、80、160 μg?mL^-1培养,采用Western Blotting法检测上皮间质转化（EMT）相关蛋白的表达水平;斑马鱼胚胎,于受精后48 h开始给药,正常组给予E3缓冲液,DMSO组为含1%DMSO的E3缓冲液,南蛇藤组各药物浓度分别为10、20、40、80、160 μg?mL^-1;给药24 h后,以Western Blotting法检测mTOR信号通路相关蛋白的表达水平。结果：与对照组相比,南蛇藤提取物各浓度组明显增加E-cadherin的表达量,降低vimentin和mTOR信号通路相关蛋白的表达水平。结论：南蛇藤提取物能在一定程度上逆转人肝癌细胞EMT,其分子机制可能与mTOR 信号通路相关,mTOR可作为临床治疗肝癌的新靶点。     

南蛇藤提取物对过表达mTOR的人肝癌HepG2细胞株的影响

目的：构建过表达雷帕霉素靶蛋白（Mammalian Target of Rapamycin,mTOR）的人肝癌HepG2细胞,并研究中草药南蛇藤Celastrus orbiculatus Thunb.提取物对该细胞的影响。方法：利用分子生物学技术,将GV238-mTOR重组质粒转染人肝癌HepG2细胞,分别用荧光素酶活性检测和Western Blot实验,分析转染后的细胞中mTOR 的表达水平。人肝癌HepG2/mTOR⁺⁺细胞中,加入不同浓度的南蛇藤提取物（20、40、80、160、320μg·mL^-1）作用24h后,分析南蛇藤提取物对mTOR蛋白的作用。结果：经转染的人肝癌HepG2细胞中,mTOR蛋白的表达水平显著增加。南蛇藤提取物明显抑制肝癌细胞的增殖,并明显降低细胞内mTOR蛋白的表达。结论：本实验成功获得能稳定过表达mTOR的人肝癌HepG2细胞株。南蛇藤提取物明显抑制肝癌细胞内mTOR蛋白的表达水平。     

刘延庆治疗食管癌经验辑要

食管癌是我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,刘延庆教授治疗食管癌经验丰富,认为脾胃虚弱,情志抑郁,饮食不节是食管癌主要的病因病机;辨证治疗上常采用健脾益气,清热解毒,疏肝理气,养阴润胃及对兼证及时施治等方法,效果显著。附验案1则以佐证。     

斑马鱼心脏损伤模型的建立及桔梗提取物对其心脏损伤的干预作用研究

目的:建立阿霉素诱导的斑马鱼心脏损伤模型,观察桔梗提取物对其心脏损伤的干预作用。方法:选取受精后48 h心脏特异表达绿色荧光转基因Tg(cmlc2:EGFP)斑马鱼,随机分为正常组和阿霉素低、中、高剂量组。干预24 h后,观察各组斑马鱼生存情况,计算生存率。荧光显微镜下观察各组斑马鱼心脏相关指标,包括心脏形态、心率,测量并记录静脉窦和动脉球(SV-BA)距离。确定建立斑马鱼心脏损伤模型的阿霉素用量。另取斑马鱼随机分为正常组、模型组(阿霉素10 μmol/L)和桔梗提取物低、中、高剂量(阿霉素10 μmol/L联合20、40、80μg/mL桔梗提取物)组,分别干预24 h后,观察各组斑马鱼生存情况,计算生存率。荧光显微镜下观察各组斑马鱼心脏收缩和舒张形态,测量并计算各项心脏功能指标,包括心率、SV-BA距离、每搏输出量、心输出量。结果:阿霉素各剂量组斑马鱼生存率均为100%;与正常组比较,10 μmol/L、20 μmol/L阿霉素诱导后斑马鱼活动能力受到限制,心包出现水肿,心率下降(P0.05),SV-BA距离增加(P0.05)。选取10 μmol/L阿霉素建立斑马鱼心脏损伤模型。与模型组比较,中、高剂量桔梗提取物能够缓解斑马鱼心包水肿,提高心率(P0.05),缩短SV-BA距离(P0.05),提高每搏输出量及心输出量(P0.05)。结论:阿霉素10 μmol/L处理24 h可成功并安全建立斑马鱼心脏损伤模型,桔梗提取物对心脏损伤斑马鱼的心脏功能具有一定的保护作用。