脑脊液流式细胞术在检测中枢神经系统白血病中的应用

目的：探讨流式细胞术（flow cytometry,FCM）对患者脑脊液（cerebrospinal fluid,CSF）细胞免疫表型的检测,在诊断中枢神经系统白血病（central nervous system leukemia,CNS-L）中的价值。方法采用多色流式细胞术 CD45／SSC双参数散点图设门方法,对195例患者CSF细胞免疫表型进行分析,同时行细胞形态学检测,比较两种方法的差异。结果195例患者中有71例为非霍奇金淋巴瘤（Non-Hodgkin’s lymphoma,NHL）患者,FCM检测有24例发现异常表型细胞,阳性率为33.80％。经形态学分析,15例发现异常细胞,其阳性率为19.72％,差异具有统计学意义（P＝0.022）。58例急性淋巴细胞白血病（acute lymphoma leukemia,ALL）患者,FCM检测有13例发现异常表型细胞,阳性率为22.41％。经形态学分析,12例发现异常细胞,其阳性率为18.97％,差异无统计学意义（P＝1.000）。66例急性非淋巴细胞白血病（acute nonlymphocytic leukemia,ANLL）患者,经 FCM和形态学检测均有4例患者检测出异常细胞,其阳性率均为5.97％,差异无统计学意义（P＝1.000）。结论脑脊液 FCM检测敏感性高,淋巴瘤患者行 FCM分析更有助于中枢神经白血病的诊断,是细胞形态学检测方法的重要补充。     

交联纳米SiO_2固定化蜗牛酶的制备表征及转化淫羊藿苷研究

目的制备交联纳米Si O2固定化蜗牛酶,并对其理化性质、酶解淫羊藿苷为宝藿苷I的最适酶解条件及酶学性能进行考察。方法采用共价偶联法将蜗牛酶固定在戊二醛交联纳米Si O2上,以相对酶活力为指标,对固定化条件进行优化;采用透射电镜(TEM)、傅里叶红外光谱(FTIR)和元素分析法对固定化蜗牛酶的理化性质进行表征;并以淫羊藿苷为底物,以游离酶为对照,考察固定化蜗牛酶的最适酶解条件及酶解动力学参数、重复利用性、热稳定性等酶学性能。结果固定化蜗牛酶制备的最佳酶载比为1∶3,固定化时间为6 h;其转化淫羊藿苷的最适酶解条件为pH 5.0,转化温度60℃,酶与底物质量比1∶2,转化时间12 h。固定化蜗牛酶的酶解动力学参数最大反应速率(Vmax)为0.43μg/min,米氏常数(Km)为0.78 mmol/L,重复使用5次后的相对酶活仍能保持在70%以上。结论制备的交联纳米Si O2固定化蜗牛酶机械强度高、稳定性好,不但可重复使用,还可定向水解淫羊藿苷为活性更强的宝藿苷I,工艺简单易行,转化效率高,适宜于工业化生产。     

~(60)Co-γ辐照前后姜黄HPLC指纹图谱和姜黄素含量变化研究

目的测定姜黄饮片中姜黄素的含量,并建立姜黄的HPLC指纹图谱,评价~(60)Co-γ辐照对姜黄化学成分的影响。方法对~(60)Co-γ辐照前后13批次姜黄饮片粉末中姜黄素含量进行测定;建立姜黄饮片HPLC指纹图谱并对其方法学进行考察。采用配对样本t检验和中药色谱指纹图谱相似度评价软件对辐照前后姜黄化学成分变化进行分析,结合聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA)对辐照前、后样品进行综合评价,并对3批次姜黄样品辐照后3、6个月的稳定性进行了考察。结果 13批次姜黄粉末辐照前后姜黄素含量无统计学差异(P0.05);姜黄HPLC指纹图谱确定了16个共有峰,各批次姜黄辐照前后指纹图谱的相似度均大于0.998;同批次辐照前与辐照后样品聚类一致性较好,3批次辐照前后姜黄样品放置3、6个月后与0个月相比姜黄素含量变化RSD5%,指纹图谱相似度均大于0.95。结论 ~(60)Co-γ辐照对姜黄中姜黄素含量和整体化学成分一致性基本无影响,且不影响其稳定性,通过指纹图谱结合指标成分含量分析可以更好地评价~(60)Co-γ辐照对姜黄化学成分的影响,为姜黄辐照灭菌方式的选择提供了实验依据。     

雷公藤红素-薏苡仁组分微乳的制备及其体内抗肺癌药效研究

目的：以薏苡仁油和薏苡仁多糖作为双功能辅料包埋雷公藤红素,制备雷公藤红素-薏苡仁组分微乳（Tripterine-Coix seed Components Microemulsions,TCC-MEs）,评价其体内抗肺癌疗效。方法: 采用超临界萃取法获取薏苡仁油,残渣热水浸提、分级醇沉法制备薏苡仁多糖;以薏苡仁油作为油相,薏苡仁多糖水溶液作为水相,RH40为表面活性剂,PEG400为助表面活性剂,包埋雷公藤红素,一步滴定法制备TCC-MEs;借助动态光散射纳米激光粒度仪和高效液相分别测定其粒径、多分散指数（Polydispersity Index,PDI）、zeta电位、包封率和载药量;皮下注射肿瘤细胞法构建小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,采用TCC-MEs灌胃方式考察其体内抗肺癌活性,并通过组织HE染色及生化指标评价其肝肾毒性。结果：TCC-MEs最佳处方为薏苡仁油400 mg,RH40 300mg,PEG400 100 mg,薏苡仁多糖50 mg,雷公藤红素10 mg;雷公藤红素包封率为（90.72±0.28）%,载药量为（1.08±0.17）%,微乳平均粒径为（43.86 ± 0.22）nm,PDI为0.10 ± 0.01,Zeta 电位为（-13.14±1.35）mV,TCC-MEs体内抗肺癌活性显著优于各对照组,且治疗后未见明显肝肾毒性。结论: 所得TCC-MEs常规辅料用量少,粒径小,且稳定性高,雷公藤红素与薏苡仁组分整合至微乳体系后具有协同减毒增效作用。     

地榆-纳米银复合物的制备与表征

目的 以地榆为还原剂及分散剂还原硝酸银溶液制备地榆-纳米银复合物,并对其进行表征。方法 以地榆-纳米银复合物的吸光度为指标,考察地榆粉末提取时间、地榆提取液加入量、AgNO₃溶液浓度、合成温度等对地榆-纳米银复合物形成的影响,并筛选最佳合成条件。采用透射电子显微镜（TEM）、X射线粉末衍射（XRD）、傅里叶变换红外光谱（FT-IR）、动态激光散射（DLS）对地榆-纳米银复合物的理化性质进行表征。结果 地榆粉末煮沸15 min,地榆提取液（0.1 g/mL）与1 mmol/L AgNO₃溶液体积比为1∶10,25 ℃反应1 h制备地榆-纳米银复合物条件最佳,所得地榆-纳米银复合物形状近似球形,平均粒径约为21 nm,分布均匀、性质稳定。结论 地榆-纳米银复合物制备方法稳定、可行。     

蟾皮活性组分的分离与体外抗肿瘤活性考察

目的： 分离蟾皮活性组分并考察大孔树脂不同洗脱部位对肺癌细胞A549生长的抑制作用。方法： 采用静态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号,单因素试验优选蟾皮活性组分的大孔树脂纯化工艺。建立乙醇洗脱液中总生物碱和4种蟾毒二烯内酯类成分的含量测定方法,通过MTT试验测定不同洗脱部位对肺癌细胞A549的抑制率。结果： AB-8型大孔树脂对蟾皮总生物碱和4种二烯内酯类成分均具有较好的吸附分离性能,4个不同乙醇洗脱部位对肺癌细胞A549均表现出抑制作用,30%乙醇和70%乙醇洗脱液的细胞抑制率较高,IC₅₀分别为1.83,2.23 mg·L^-1。结论： 大孔树脂可用于分离纯化蟾皮中活性组分,不同洗脱部位对肺癌细胞A549的抑制率呈现一定的浓度依赖性,30%乙醇和70%乙醇洗脱部位可作为蟾皮抗肿瘤制剂的重点有效组分。     

87例骨髓增生异常综合征多参数流式细胞术免疫表型分析

目的：了解骨髓增生异常综合征（MDS）的免疫表型特征。方法：利用CD45／SSC参数散点图设门方法,对87例MDS患者的骨髓幼稚细胞群、成熟粒细胞群和成熟单核细胞群细胞表面分化抗原进行分析。结果：MDS的异常免疫表型可以分为抗原跨系列表达、抗原跨阶段表达、成熟粒细胞抗原分化异常、抗原表达缺失或表达增强、成熟粒细胞或幼稚细胞群CD45／SSC表达异常。78例（90．0％）MDS患者可以检测到明确的异常抗原表达,74例（85．1％）存在≥2个免疫表型异常,异常免疫表型不仅存在于幼稚细胞群（70．0％）,也存在于成熟粒细胞群（81．6％）和单核细胞群（39．1％）．常见的异常免疫表型包括：成熟粒细胞群CD13／CD16分化异常（41．3％）;幼稚细胞群CD45表达异常（34．5％）;成熟粒细胞群跨系列表达CD38（29．9％）;幼稚细胞群CD34＋CD11b＋跨阶段表达异常（24．1％）;成熟粒细胞群SSC减低（11．5％）;成熟粒细胞群跨系列表达CD56（8％）;单核细胞群跨系列表达CD56（8％）。随着患者骨髓幼稚细胞比例增高,异常免疫表型数量也逐渐增多。结论：在大多数MDS患者骨髓细胞中可以检测到明确的异常免疫表型,在此基础上应用多参数流式细胞仪可以有助于MDS的诊断和预后判断。     

人骨髓间充质干细胞与脐血CD34+细胞体外扩增

为了研究骨髓间充质干细胞(MSC)及细胞因子对脐血CD34 造血祖细胞体外扩增的作用,及其扩增作用 对细胞黏附分子的影响,用免疫磁珠富集脐血CD34 细胞,然后接种到含有或不含有MSC和细胞因子的24孔培 养板,体外培养1周,观察不同指标并进行组间比较。结果表明:①SDF-1α SCF TPO FL因子组合与SCF TPO FL因子组合对脐血CD34 细胞的扩增作用无显著性差异(无论有无MSC细胞层存在)(P>0.05);②MSC 与上述细胞因子共存的培养体系优于相应的单纯细胞因子培养体系(P<0.05);③扩增前与扩增后脐血造血祖 细胞黏附分子CD44的表达没有明显变化。结论:趋化因子SDF-1α对SCF TPO FL因子组合的扩增作用无显 著影响;MSC增加细胞因子的脐血细胞体外扩增的作用;体外扩增不影响跻血细胞黏附分子CD44的表达。     

微乳化-凝胶法制备微球固定化蜗牛酶并生物转化淫羊藿苷研究

目的制备微球固定化蜗牛酶,优化微球固定化蜗牛酶的制备方法及其生物转化淫羊藿苷的工艺条件。方法利用微乳化-凝胶法将蜗牛酶包埋固定于海藻酸钡中,单因素优化蜗牛酶的固定条件。考察微球固定化蜗牛酶生物转化淫羊藿苷的最适反应温度、p H值、底物比、底物质量浓度,并与游离蜗牛酶比较,同时考察微球固定化蜗牛酶的酶学性质。结果利用1.0%海藻酸钠、1.0%Ba Cl2及适量乳化剂(质量分数为2.5%司盘-20和1.5%聚山梨酯80),通过微乳化凝胶的方法制备微球固定化蜗牛酶。与游离蜗牛酶相比,微球固定化蜗牛酶的热稳定性、p H值稳定性均增强。微球固定化蜗牛酶转化淫羊藿苷的最适条件:转化温度50℃,p H值5,微球固定化蜗牛酶与淫羊藿苷质量比3∶1,淫羊藿苷质量浓度为0.4 mg/m L,转化时间为2.0 h,经3次转化,转化率仍可保持(53.84±3.41)%。结论微球固定化蜗牛酶转化淫羊藿苷工艺简单,酶学性质稳定,可重复使用,为淫羊藿苷生物转化的工业生产奠定基础。     

RGD肽修饰重组高密度脂蛋白载药纳米粒的制备和表征以及肿瘤细胞对其摄取作用

目的：制备和表征RGD肽修饰的重组高密度脂蛋白（RGD—rHDL）载药纳米粒,考察肿瘤细胞对其摄取作用。方法：合成RGD与载脂蛋白AI（ApoAI）的偶联物（RGD—ApoAI）,并以藤黄酸（GA）作为模型药物,采用薄膜分散法制得GA脂质体（LP—GA）,再将RGD—ApoAI与LP—GA共孵育,制备载有GA的RGD—rHDL纳米粒（RGD—rHDL—GA）;随后,对RGD—rHDL—GA进行表征,且采用荧光标记示踪法,通过RGD—rHDL-香豆素-6来考察人肝癌细胞HepG2对载药RGD—rHDL纳米粒的摄取作用。结果：制备的RGD—rHDL—GA呈现规则圆整的类球形,粒径分布均一[（110,70±3．25）nm],Zeta电位为（-39．21±0．10）mV,包封率为（92．20±0．28）％,载药量为（9．03±0．75）％,且其体外释药缓慢,稳定性良好;RGD—rHDL-香豆素-6的肿瘤细胞摄取率明显高于rHDL-香豆素-6。结论：rHDL经RGD修饰后可有效促进所载药物进入肿瘤细胞,提高其肿瘤靶向性。