五色培元固本膏对维持性血液透析患者细胞免疫功能的影响

目的:探讨五色培元固本膏对维持性血液透析(MHD)患者细胞免疫功能的影响。方法:90例MHD患者随机分为对照组和治疗组,两组血透方法相同。对照组给予一般治疗及血透治疗,治疗组在对照组基础上口服五色培元固本膏,连续治疗3个月; 20例健康志愿者作为正常组,三组观察时间均为3个月。治疗前后用流式细胞技术检测各组T细胞亚群表达水平,酶联免疫吸附法检测各组白介素-2(IL-2)和可溶性白介素-2受体(sIL-2R)蛋白表达水平。结果:治疗前与正常组比较,对照组与治疗组CD₄⁺、CD₄⁺/CD₈⁺和IL-2表达水平均明显下降,CD₈⁺和sIL-2表达水平均上升,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,与对照组相比较,治疗组CD₄⁺、CD₄⁺/CD₈⁺、IL-2表达水平明显升高,CD₈⁺和sIL-2表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组相较正常组CD₄⁺T淋巴细胞、CD₄⁺/CD₈⁺、IL-2表达水平,差异无统计学意义(P>0.05),CD₈⁺、sIL-2表达水平升高。结论:五色培元固本膏调节T淋巴细胞和IL-2表达改善MHD的细胞免疫功能。     

培元消癥方治疗慢性肾脏病5期透析合并CKD-MBD骨痛临床疗效研究

目的 研究培元消癥方对慢性肾脏病5期透析(Chronic Kidney Disease stage 5 Dialysis,CKD 5D)合并慢性肾脏病-矿物质与骨异常(Chronic Kidney Disease-Mineral and Bone Disorder,CKD-MBD)骨痛脾肾两虚兼毒瘀证患者的临床疗效.方法 选取2018年10月—2020年5月就诊于重庆市中医院血液透析中心的CKD5D合并CKD-MBD骨痛脾肾两虚兼毒瘀证患者,共76例,按入组时间顺序编号,随机分为对照组30例和试验组46例.对照组采用对症治疗方案,试验组在对照组基础上加服培元消癥方,共治疗12周.观察2组治疗前后中医证候积分、疼痛视觉模拟量表(VAS)评分的变化情况,检测血中钙(Ca)、磷(P)、全段甲状旁腺激素(iPTH)、血清骨特异性碱性磷酸酶(BAP)含量的变化情况.结果 对照组、试验组总有效率分别为60.71％、90.9％,试验组临床疗效优于对照组(P＜0.01).中医证候积分:与治疗前比较,治疗后试验组各项症状积分均下降(P＜0.05,P＜0.01),对照组仅水肿、食少纳呆、大便稀溏、恶心呕吐、肢体困重、胸痛喘息、皮肤瘙痒积分下降(P＜0.05,P＜0.01);与对照组比较,治疗后试验组除胸痛喘息、皮肤瘙痒外,其余症状积分均下降,差异均具有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).VAS评分:与治疗前比较,试验组治疗8、12周后,VAS评分下降(P＜0.05,P＜0.01);对照组治疗12周后,VAS评分下降(P＜0.05).矿物质骨代谢指标:与治疗前比较,试验组治疗8周后,血清Ca上升(P＜0.01),血清P、BAP、iPTH下降(P＜0.05,P＜0.01);治疗12周后,血清Ca仍上升(P＜0.01),血清P、BAP及iPTH下降(P＜0.01).对照组治疗12周后血清Ca上升(P＜0.05),血清P、BAP及iPTH下降(P＜0.05).结论 培元消癥方能有效改善CKD5D合并CKD-MBD骨痛症状,其机制可能与调节矿物质与骨代谢、改善继发性甲状旁腺功能亢进症引发的骨过度转换有关.     

论戴天章“温疫五辨”

戴天章在继承昊又可《温疫论》舌诊思想的基础上,以伤寒立论,以温疫对比著说,围绕着伤寒和温病的鉴别,首创温疫五辨,开创了温痛系统诊断和鉴别诊断的先河,并将舌诊作为温疫诊断的重要手段。     

三七皂苷改善狼疮肾炎小鼠激素耐药状态及脂代谢紊乱的作用研究

目的探讨三七皂苷改善狼疮肾炎小鼠激素耐药状态及脂代谢紊乱的作用机制。方法36只狼疮肾炎小鼠分成6组（每组6只）：狼疮肾炎小鼠（A组）、激素耐药模型（B组）、尾静脉注射沉默信息调节因子（SIRT）1-siRNA（C组）、尾静脉注射SIRT1-siRNA阴性对照（D组）、腹腔注射低剂量三七皂苷（E组）、腹腔注射高剂量三七皂苷（F组）,后5组先利用甲强龙灌胃法建立激素耐药模型,后4组再予相应药物干预;另取6只正常健康小鼠为G组。分别于实验前、中（第4周）、后（第8周）检测小鼠尿糖水平;实验结束时取小鼠血样本检测生化指标,ELISA法检测小鼠血C反应蛋白（CRP）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）水平,流式细胞术检测腹主动脉内皮细胞凋亡率;采用免疫共沉淀检测过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ与SIRT1的相互作用。结果实验第4、8周B组小鼠尿糖水平较G组明显升高（均P＜0.05）,C、E、F组小鼠尿糖水平也有一定程度的升高（均P＜0.05）。A、B组小鼠血肌酐（Scr）水平较G组明显升高（均P＜0.05）,C、E、F组较A、B组均明显降低（均P＜0.05）。A、B、C、D、F组小鼠血脂水平较G组均明显升高（均P＜0.05）,且以A、B组升高最为明显（均P＜0.05）。G组小鼠CRP水平较其余6组均明显降低（均P＜0.05）,C、E、F组较A、B组均明显降低（均P＜0.05）。G组小鼠腹主动脉内皮细胞不表现为凋亡,而A、B、D组小鼠腹主动脉内皮细胞凋亡率较高（均P＜0.05）。C、E、F组小鼠肝组织PPARγmRNA表达较A、B组均明显升高（均P＜0.05）,SIRT1mRNA表达均明显降低（均P＜0.05）。PPARγ、SIRT1免疫共沉淀结果提示存在PPARγ-SIRT1反馈环路。结论三七皂苷能调控PPARγ-SIRT1反馈环路,从而起到改善狼疮肾炎激素耐药状态和脂代谢紊乱的双重效应。     

三七皂苷通过PPARγ调控SIRT1介导的狼疮肾炎小鼠脾淋巴细胞激素耐药及脂代谢影响的研究

[目的]观察三七皂苷(Panax notoginseng saponin,PNS)对激素耐药狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)小鼠脾淋巴细胞过氧化物酶增殖体活化受体γ(peroxidase proliferator activated receptor gamma,PPARγ)、沉默信息调节因子相关酶1(silent information regulation factor related enzyme 1,SIRT1)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(adenosine triphosphate binding cassette transporter A1,ABCA1)表达的影响,探索PNS改善激素耐药和脂代谢紊乱的双重作用,为运用活血化瘀中药提高难治性LN临床疗效提供科学依据。[方法]采用密度梯度法分离NZB/WF1小鼠的脾淋巴细胞,用小剂量甲基强的松龙诱导细胞产生激素耐药,将诱导后的细胞分为模型组、PPARγ质粒转染组、PPARγsi RNA+PNS组和PNS组,并以未诱导耐药的NZB/WF1小鼠脾淋巴细胞作为对照组,各组细胞培养72h后以Real-time PCR检测各组淋巴细胞PPARγ和SIRT1 m RNA表达,Western blot检测PPARγ和SIRT1蛋白表达,荧光分光光度法检测细胞内胆固醇酯含量,流式细胞术检测ABCA1蛋白表达。[结果](1)上调PPARγ能抑制SIRT1高表达,模型组PPARγm RNA和蛋白表达水平均低于对照组,SIRT1 m RNA和蛋白表达水平均高于对照组(P0.05);通过质粒转染上调PPARγ水平后,PPARγ质粒转染组的SIRT1 m RNA和蛋白表达水平均低于模型组(P0.05);(2)PNS组PPARγ表达高于模型组,SIRT1表达则减低(P0.05)。尽管PNS组PPARγm RNA表达水平低于PPARγ质粒转染组,但两组SIRT1 m RNA表达水平无统计学差异(P0.05);与模型组比较,PPARγsi RNA+PNS组的SIRT1 m RNA和蛋白表达水平均下降(P0.05)。(3)PNS具有调节细胞内脂代谢紊乱作用,模型组细胞内胆固醇酯含量低于对照组(P0.05);PNS组细胞内胆固醇酯含量高于对照组,ABCA1蛋白表达则低于对照组(P0.05)。[结论](1)激素耐药的LN小鼠脾淋巴细胞内存在脂代谢紊乱。(2)PNS具有逆转激素耐药和调节细胞内脂代谢紊乱的双重效应。     

柴胡加龙骨牡蛎汤加减通过p38 MAPK通路改善CKD小鼠PFC突触可塑性及抑郁行为研究

目的  探讨柴胡加龙骨牡蛎汤加减(CLMD)对慢性肾脏病(CKD)小鼠抑郁行为的作用及可能机制。方法  3月龄雄性C57BL/6小鼠60只, 分为对照组、模型组、氟西汀组、CLMD低剂量组、CLMD中剂量组和CLMD高剂量组。除对照组外, 其余5组小鼠先予0.2%腺嘌呤饮食喂养2周。中药干预组分别予2.36、4.725、9.45 g·kg-1·d-1的CLMD灌胃, 氟西汀组予10 mg·kg-1·d-1氟西汀灌胃, 对照组、模型组予生理盐水灌胃, 共计6周。糖水偏好测试、强迫游泳实验检测小鼠抑郁行为表型, Western blot法检测前额叶皮层(PFC) p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、脑源性神经营养因子(BDNF)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(p-CREB)、突触后致密蛋白95(PSD95)、突触素(SYN)、生长相关蛋白43(GAP43)和突触囊泡膜蛋白(SYP)表达; 免疫荧光法检测PFC脑区核内p-CREB的表达; Golgi-Cox染色检测PFC树突棘密度; ELISA法检测外周及PFC炎性因子水平及血清肌酐、尿素氮水平。结果  行为学检测结果显示: 与对照组相比, 模型组不动时间增加,糖水偏好指数下降(P < 0.01);与模型组相比, 给予中、高剂量CLMD干预后小鼠不动时间下降(P < 0.01), 糖水偏好指数增加(P < 0.05, P < 0.01), CLMD中、高剂量组与氟西汀组之间差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果显示: 与对照组相比, 模型组小鼠PFC中p-p38 MAPK/p38 MAPK表达增加(P < 0.01), BDNF、p-CREB/CREB、PSD95、SYN、GAP43、SYP表达下调(P < 0.01);与模型组相比, CLMD中、高剂量组, 氟西汀组小鼠p-p38 MAPK/p38 MAPK表达下调(P < 0.01), BDNF、p-CREB/CREB、PSD95、SYN、GAP43、SYP表达增加(P < 0.01)。免疫荧光结果显示: 与对照组相比, 模型组PFC的p-CREB核内荧光水平明显降低(P < 0.01);与模型组相比, CLMD中、高剂量组, 氟西汀组p-CREB核内荧光强度增加(P < 0.05, P < 0.01)。Golgi-Cox染色结果显示: 与对照组相比, 模型组小鼠PFC树突棘密度降低(P < 0.01);与模型组相比, CLMD中、高剂量组, 氟西汀组小鼠PFC树突棘密度增加(P < 0.01)。ELISA法检测结果显示: 与对照组相比, 模型组PFC及外周血清中炎性因子水平增加(P < 0.01), 血清尿素氮、肌酐水平增加(P < 0.01);与模型组相比, 氟西汀组及CLMD中、高剂量组PFC及外周血清中炎性因子水平下降(P < 0.05, P < 0.01), CLMD中、高剂量组血清尿素氮、肌酐水平下降(P < 0.05, P < 0.01), 氟西汀组尿素氮、肌酐水平无明显变化。结论  CLMD能调节中枢炎症状态, 改善PFC突触可塑性, 减轻CKD小鼠抑郁症状,同时可能通过影响外周炎症状态延缓CKD小鼠肾脏功能恶化。      

血府逐瘀汤对外伤性视神经损伤模型大鼠Nogo-A、GAP-43偶联蛋白组表达的影响

目的:运用血府逐瘀汤干预外伤性视神经损伤(TON)大鼠模型,观测不同时间节点视网膜神经节细胞(RGCs)数量和形态,视网膜轴突生长抑制因子-A(Nogo-A)、生长相关性蛋白-43(GAP-43)偶联蛋白组的表达变化,从而探讨该方治疗TON的作用机制。方法:健康SD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组、中药组、神经营养因子组和中西医结合组,分别治疗4、7、14、21、28d后处死,HE染色观察视网膜神经节细胞(RGCs)变化,免疫组化法观察视网膜Nogo-A和GAP-43蛋白表达情况。结果:治疗7d后,神经营养因子组、中西医结合大鼠视网膜节细胞数量均明显高于模型组(P0.01);治疗7、14、28d,中药组大鼠视网膜节细胞数量明显高于模型组(P0.01)。神经营养因子组、中西医结合组大鼠治疗7d后,中药组大鼠治疗14d后,视网膜Nogo-A表达均较模型组明显降低(P0.01),GAP-43表达均较模型组明显升高(P0.01)。结论:血府逐瘀汤原方对外伤性视神经损伤大鼠有治疗作用,能够增强损伤视网膜组织中GAP-43蛋白的表达,抑制损伤相关因子Nogo-A表达,提高RGCs的存活率。     

国医大师郑新益气补肾方治疗血液透析患者免疫功能低下

目的:观察国医大师郑新益气补肾方治疗血液透析患者免疫功能低下的临床疗效。方法:60例血液透析患者随机分为对照组与治疗组各30例。两组均采用相同血液透析方式,治疗组在血液透析的同时口服中药膏方,3个月为1个疗程。比较两组患者治疗前后T细胞亚群中CD4~+、CD8~+水平,外周血中血红蛋白(hemoglobin,HB)、红细胞计数(red blood cell,RBC)、红细胞比容(hematocrit,HCT)、尿素氮(urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素下降率(urea reduction rate,URR)、尿素动力学模型(kinetic model of single chamber urea,Kt/v)水平以及中医证候积分(倦怠乏力、腰膝酸软、食少腹胀、气短懒言)。结果:治疗后,治疗组CD4~+高于对照组(P0.05),CD8~+低于对照组(P0.05)。治疗组CD4~+和CD8~+水平较治疗前显著改善(P0.05)。治疗后,治疗组HB、RBC、HCT、BUN、Scr水平与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),治疗组URR、Kt/v高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。治疗组治疗后RBC与治疗前比较,差异有统计学意义(P0.05)。治疗后治疗组中医证候积分较治疗前显著降低(P0.05),且显著低于对照组治疗后(P0.05)。结论:益气补肾方能提升血液透析患者的免疫功能,改善临床症状。     

肾衰灵方作用于SHH信号通路对UUO大鼠肾间质纤维化的影响＊

目的 探讨当代名医国医大师郑新经验方——肾衰灵方对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化的抑制作用。方法 1. 50只雄性SD大鼠随机分为五组：假手术组、模型组、肾衰灵方低剂量组、肾衰灵方中剂量组、肾衰灵方高剂量组。除假手术组，其余各组结扎单侧输尿管建立肾间质纤维化动物模型，肾衰灵方低中高剂量组予肾衰灵方（10、20、30 mg·kg^-1）连续灌胃14天。检测各组大鼠血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、谷丙转氨酶（ALT），谷草转氨酶（AST），碱性磷酸酶（ALP），乳酸脱氢酶（LDH）。采用real-time PCR检测结缔生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)核酸水平，采用Masson染色方法检测肾组织观察肾小管和间质病理形态变化。2. 根据结果选择肾衰灵中剂量组为治疗组，再将30只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、肾衰灵方治疗组共3组。用Western blot方法检测音猬因子（Sonic hedgehog，SHH）、神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1（Glioma related cancer gene homologous proteins 1，Gli1）、锌指转录因子（Snail Family Zinc Finger 1，Snail）蛋白的表达。结果 1.与模型组相比，模型组和肾衰灵各剂量组大鼠血清SCr和BUN的表达水平均明显下调，其中肾衰灵中剂量组疗效最佳（P < 0.05）；Masson染色发现相较模型组，肾衰灵方各剂量组肾间质纤维化明显减轻，其中肾衰灵中剂量组疗效最佳（P < 0.05）；real-time PCR结果发现肾衰灵各剂量组CTGF核酸水平均较模型组下调，其中肾衰灵中剂量组核酸水平最低（P < 0.05）。 2. 相较假手术组，模型组与肾衰灵方组SHH、Gli1、Snai1蛋白的表达均升高（P < 0.05）；与模型组相比，肾衰灵方组SHH、Gli1、Snai1蛋白水平明显降低（P < 0.05）。结论 单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型中，肾衰灵方可以通过抑制肾间质纤维化改善大鼠肾功能，其作用可能与其阻断SHH信号通路相关。