基于正交试验优选益母草配方颗粒提取工艺

目的:运用正交试验优化益母草配方颗粒工艺提取,为益母草配方颗粒的生产工艺提供理论依据。方法:以料液比、提取次数和提取时间3个因素设计L9(34)正交试验,以水苏碱含量、益母草碱含量与浸膏得率三者的综合考察指标作为评价指标,优选益母草配方颗粒提取工艺。结果:优选工艺为料液比1∶12,提取2次,每次1.5 h,优化后的提取工艺经3个产地每个产地进3次平行验证试验,水苏碱的提取含量在34.29~35.93 mg·g^-1,益母草碱的提取含量在2.88~3.01 mg·g^-1,浸膏得率在25.11%~26.42%,3个评价指标的RSD均小于2.0%,以及三者的综合考察值在0.93~0.97。结论:优选的提取工艺方法稳定可靠,水苏碱、益母草碱及浸膏的提取率较高,为规范和标准化益母草配方颗粒生产研究工艺提供一定的参考依据。     

益母草碱油包油微乳在小鼠体内组织分布研究

目的 探讨益母草碱油包油微乳剂和益母草碱混悬剂在动物体内药物代谢动力学特征和组织靶向性。方法 采用高效液相色谱法测定小鼠血浆与组织中益母草碱浓度,计算药物代谢动力学参数。结果 与混悬剂比较,益母草碱微乳剂在体内平均滞留时间提高了7 h,其相对生物利用度为550.684%;益母草碱微乳剂AUC(0→∞)在小鼠各组织的分布整体提高到混悬组的3.626~26.265倍;益母草碱微乳剂在心、肺和脑组织的靶向指标分别为1.044、1.335和4.772。结论 益母草碱油包油微乳提高了生物利用度,对脑组织具有较好的趋向性分布。     

Leonurine: From Gynecologic Medicine to Pleiotropic Agent

Leonurus japonicus Houtt, a Chinese traditional herbal medicine, has been widely used to cure gynecological diseases, such as incomplete abortion and menoxenia. Leonurine, a major active alkaloid compound only be found in Leonurus japonicus Houtt, has been successfully extracted and purified. Recent evidence has shown that leonurine can regulate a variety of pathologic processes including oxidative stress, inflammation, fibrosis, apoptosis, and multiple metabolic disorders. Here, we have reviewed the pharmacological actions and biological functions of leonurine, with a focus on the role of leonurine in the amelioration of various pathological processes. Insights into the related signaling pathways and molecular mechanisms have strengthened our understanding on the function of leonurine in the alleviation of multiple pathological states. Our summary of the existing researches should help direct future research into the basic science and clinical applications in related diseases.     

益母草碱对胚胎-胎仔发育毒性和遗传毒性的评价

目的 检测益母草碱的发育毒性和遗传毒性。方法 在SD孕鼠妊娠第6~15天经口灌胃给予500、1 000和2 000 mg/kg体重的益母草碱,同时设溶媒对照组,经口灌胃0.5% CMC-Na溶液。妊娠第20天剖杀孕鼠,分析其生殖毒性。分别采用反映基因突变的鼠伤寒沙门菌回复突变试验（Ames试验）、反映染色体畸变的细胞染色体畸变试验（体外培养CHO）和ICR小鼠骨髓微核试验（体内）检测益母草碱的遗传毒性。结果 在500、1 000和2 000 mg/kg剂量益母草碱的作用下孕鼠的增重与对照组相比,差异均无统计学意义;各受试剂量组孕鼠各项指标与对照组相比,差异均无统计学意义;各剂量组胎鼠各类指标与溶媒对照组相比,无明显差异。Ames试验结果提示：在0.5、5、50、500、5 000 μg/皿受试剂量下,在有或无代谢活化S9系统时,与溶媒对照组相比,受试物对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门菌（TA97、TA98、TA100、TA102及TA1535）所诱发的回复突变菌落数均相近。染色体畸变试验结果显示：250、500和1 000 μg/ml 3个剂量的受试物,对有或无代谢活化系统S9培养的CHO细胞的染色体畸变率无明显影响。微核试验显示100、500和2 000 mg/kg各个剂量组对ICR小鼠的微核诱发率与溶媒对照组比较均无显著差异（P>0.05）。结论 益母草碱在500、1 000和2 000 mg/kg剂量下未观察到明显的母体毒性、胚胎毒性、胎儿毒性和致畸作用。益母草碱对鼠伤寒沙门菌无致突变性,对哺乳动物培养细胞的染色体无致畸变作用,对ICR小鼠无诱发骨髓嗜多染红细胞微核的效应。上述结果表明在本试验条件下,益母草碱无发育和遗传毒性。     

HPLC-MS同时测定益母草制剂中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量

建立益母草制剂中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量测定方法。采用LC-MS同时测定盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量。使用Waters XBridge Amide色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸为流动相,流速1.0 m L·min-1,分流比为1∶4。质谱条件为ESI离子源,正离子模式,选择性离子扫描(SIM)下对盐酸水苏碱(m/z 144.0)和盐酸益母草碱(m/z312.0)进行测定。盐酸水苏碱浓度在0.562 8~281.4μg·L-1线性关系良好(r=0.999 8)。盐酸益母草碱浓度在0.521 2~260.6μg·L-1性关系良好(r=0.999 8)。该方法准确、简便、可靠,可作为益母草制剂的含量测定方法。     

益母草碱对急性心肌梗死大鼠的影响

目的:观察益母草碱对急性心肌梗死造成的心肌缺血和心肌细胞损害的影响并探讨其作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组,模型组,益母草碱高、低剂量组(30,15 mg·kg-1·d-1)和卡托普利阳性药组(4 mg·kg-1·d-1),除假手术组外其余各组采用结扎冠状动脉左前降支的方法制备大鼠急性心肌梗死模型,所有动物冠脉结扎前1周按相应剂量ip药物,第8天造模,术后继续ip给药2 d后,处死动物,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测并计算心肌梗死面积,酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒测定大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK)的水平,超氧化歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积明显增大,血清中LDH,CK,MDA含量水平明显升高,总超氧化物歧化酶(T-SOD)水平明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,益母草碱能明显减小心梗大鼠左心室梗死面积,并能明显降低心梗大鼠血清中LDH,CK及MDA的水平,明显升高血清中T-SOD的活性(P0.05,P0.01)。结论:益母草碱对急性心肌缺血造成的心肌损伤有良好的预防性保护作用,其作用机制可能与提高心肌组织抗氧化能力有关。     

Identification of UDP-glucuronosyltransferase isoforms responsible for leonurine glucuronidation in human liver and intestinal microsomes

Abstract

1.?Leonurine is a potent component of herbal medicine Herba leonuri. The detail information on leonurine metabolism in human has not been revealed so far.

2.?Two primary metabolites, leonurine O-glucuronide and demethylated leonurine, were observed and identified in pooled human liver microsomes (HLMs) and O-glucuronide is the predominant one.

3.?Among 12 recombinant human UDP-glucuronosyltransferases (UGTs), UGT1A1, UGT1A8, UGT1A9, and UGT1A10 showed catalyzing activity toward leonurine glucuronidation. The intrinsic clearance (CL_int) of UGT1A1 was approximately 15-to 20-fold higher than that of UGT1A8, UGT1A9, and UGT1A10, respectively. Both chemical inhibition study and correlation study demonstrated that leonurine glucuronidation activities in HLMs had significant relationship with UGT1A1 activities.

4.?Leonurine glucuronide was the major metabolite in human liver microsomes. UGT1A1 was principal enzyme that responsible for leonurine glucuronidation in human liver and intestine microsomes.     

益母草碱对大鼠急性心肌缺血损伤血管舒缩功能及抗氧化作用的影响

目的:观察益母草碱对大鼠急性心肌缺血损伤血管舒缩功能及抗氧化作用的影响。方法:垂体后叶素腹腔注射诱导大鼠急性心肌缺血,放射免疫法测定血浆及心肌内皮素(ET)含量,硝酸还原酶法测定血清和心肌一氧化氮(NO)含量,黄嘌呤氧化酶法测定血清和心肌超氧化物歧化酶(SOD)活力,硫代巴比妥酸法测定血清和心肌丙二醛(MDA)含量。结果:益母草碱在一定剂量范围内能升高血中和心肌NO水平(P<0.01),降低ET含量(P<0.01),增加SOD活力和降低MDA含量(P<0.01),且存在量效关系。结论:益母草碱具有对抗垂体后叶素性急性心肌缺血损伤的作用,其机制可能与平衡血管舒缩功能、抗脂质过氧化等有关。     

益母草碱、丁香酰胍醇及丁香酸氨基醇酯类化合物抗血小板聚集活性及其与结构的关系

目的：观察和比较益母草碱、丁香酰胍醇及丁香酸氨基醇酯类化合物抗血小板聚集活性及其与结构的关系。方法：以血小板聚集为指标并计算ＩＣ（５０）以比较各样品的作用强度。结果：益母草碱（Ⅰ），化合物Ⅱ，Ⅲ和Ⅳ１，２均能对抗ＡＤＰ诱导大鼠和兔的血小板聚集作用，其ＩＣ（５０）分别为０．９７，４．４，５．２，０．３６和１．１４ｍｇ／ｍｌ。所有化合物在体外均有抑制ＡＤＰ诱导大鼠和兔的血小板聚集的作用，以Ⅳ１，Ⅴ１和Ⅶ１，２的作用最强，ＩＣ（５０）在０．１５～０．３６ｍｇ／ｍｌ，其次为Ⅳ３，５，７，８和Ⅵ１，２．ＩＣ（５０）在０．４３～０．９４ｍｇ／ｍｌ。化合物Ⅰ，Ⅱ，Ⅳ２，４，６和９虽有抑制作用，但无实际意义。结论：益母草碱具有明显的抗血小板聚集活性，完整的益母草碱分子是维持这种活性的基本结构，改变分子结构碱性胍基为氨基，引入双键或碳链加长以及丁香酸氨基醇酯乙烯化或乙氧羰基化，其活性均比母体化合物强。     

益母草碱及其代谢物在大鼠体内的毒代动力学研究

建立了测定大鼠血浆中益母草碱(1)及其葡萄糖醛酸结合物(2)的LC-MS/MS方法.考察了大鼠单次和连续28 d灌胃给予低、中、高剂量1 (200、600和2 000 mg/kg)后1和2在体内的暴露水平,绘制药-时曲线并计算毒代动力学参数.单剂量试验表明,低、中、高剂量组1的AUC分别为(1.946±0.908)、(7.002±2.759)和(26.408±11.491)μmol·L-1·h,1在大鼠体内消除行为符合线性动力学模型.多剂量试验表明,低、中、高剂量组1的AUC分别为(2.987±1.089)、(9.083±3.140)和(20.178±7.484)μmol·L-1.h.长期大剂量灌胃给予1,1和2均未见在大鼠体内明显蓄积,且试验过程中未见大鼠有明显的毒性反应.