阿霉素肾病小鼠病理机制中白细胞介素-18水平分析

目的探讨白细胞介素-18(IL-18)在阿霉素肾病模型(微小病变型肾病,MCN)小鼠病程中的免疫失调作用。方法采用阿霉素单次尾静脉注射昆明种小鼠,诱导形成微小病变型肾病模型,设置模型组、生理盐水对照组和IL-18mAb抗体中和实验组(mAb)。测定3组小鼠第1、2、4、6周24h尿蛋白(24hUPQ)水平;于第42天时心脏采血法留取血清,检测模型组与对照组血清总蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(Tch)的水平;取单侧肾做病理检测,同时制备脾淋巴细胞悬液、肾组织匀浆液检测3组IL-18、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及IL-4水平。结果模型组小鼠从注射阿霉素第2周起,24hUPQ值均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.01);血清TP、ALB、BUN、Cr、Tch、TG结果和病理诊断结果显示,模型小鼠出现低蛋白血症、高脂血症等类肾病综合征症状。检测显示模型组小鼠血清、肾组织匀浆上清液、脾淋巴细胞培养上清液IL-18、INF-γ、TNF-α水平均高于对照组,而IL-4水平均低于对照组,组间比较差异均有统计学意义(P0.01)。mAb组小鼠24hUPQ及IL-18、IFN-γ、TNF-α水平均低于模型组,组间比较差异有统计学意义(P0.01)。结论模型小鼠病程中,Th1类细胞因子分泌增强,Th2类因子受抑制,且IL-18mAb起到部分中和内源性IL-18的作用,表明IL-18是小鼠MCN病程中重要的免疫失调因子。     

脂质体阿霉素对大鼠三叉神经形态与功能影响的实验研究

目的 :观察脂质体阿霉素对大鼠三叉神经形态与功能的影响。方法 :3 3g/L脂质体阿霉素直接注射于大鼠一侧眶下神经束 ,对侧以生理盐水对照。神经电生理检查给药后大鼠的二腹肌肌电的变化 ,光镜下观察实验侧三叉神经节细胞的形态学变化 ,透射电镜观察三叉神经节细胞的超微形态结构变化。结果 :神经电生理结果显示动物对针刺反应不敏感 ,并显示不同时间左右两侧潜伏期 (ms)及痛阈 (mA)的变化都有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;实验侧光镜下可见大量细胞皱缩 ,形态不规则 ,细胞周围出现空隙 ;电镜下可见胞质中出现不规则的电子致密物质 ,线粒体、高尔基体、粗面内质网、核膜、有髓神经纤维髓鞘和无髓神经纤维病理性改变。结论 :脂质体阿霉素注入神经干后 ,可以选择性破坏相应的节细胞 ,引起神经功能上的变化。     

鞘内注射阿霉素后离断三叉神经治疗带状疱疹后疼痛

目的观察阿霉素对三叉神经分布区带状疱疹后疼痛(PHN)的镇痛效果。方法对24患者用1%阿霉素直接注射至PHN相应分支的神经干,观察皮肤症状和异常性疼痛,于术后3d、7d、3个月进行评价。结果术后取得了95.8%的疗效,术后3d有效17例,缓解5例,无改善1例;术后7d有效23例,无效1例;术后3月有效23例,无效病例失访。有效病例在3～24个月内均无复发。结论阿霉素神经鞘内注射后,能有效的消除三叉神经分布区PHN,近期疗效较好。     

阿霉素-甘草酸分子复合物的制备及体外抗肿瘤活性

目的 以中药组份甘草酸为载体,按照阿霉素与甘草酸的不同比例制备阿霉素-甘草酸分子复合物（ADR-GL复合物）,探究其在pH=7.4下的溶解度差异并初步评价其抗肿瘤效果。方法 按照阿霉素与甘草酸摩尔比2∶1,1∶1,1∶2的量（ADR∶GL=2∶1,1∶1,1∶2）投料,采用旋蒸法制备ADR-GL分子复合物并经红外光谱（FT-IR）和差式扫描量热（DSC）分析鉴定所得固体复合物。将ADR-GL复合物溶解于pH=7.4的磷酸盐缓冲液中,过夜超声后3000 r/min离心5 min得ADR-GL复合物饱和溶液,采用高效液相色谱法测定其中的阿霉素溶解度。最后,MTT法测定ADR-GL对肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用,及经流式细胞仪测定CD44+ MDA-MB-231干细胞所占总MDA-MB-231细胞的比例以初步探究其抗肿瘤活性。结果 ADR-GL复合物中阿霉素1525 cm-1红外光谱吸收峰消失,且DSC分析显示ADR-GL在86 ℃处出现一个明显的新的吸收峰,表明阿霉素可能被甘草酸所包裹而以新的形式存在,称之为“ADR-GL分子复合物”。对照组盐酸阿霉素组在pH=7.4的磷酸盐缓冲液中溶解度为0.844±0.011 mmol/L,ADR-GL复合物组与对照组相比溶解度均有显著性差异（P<0.05）,其中阿霉素与甘草酸摩尔比为1∶2组溶解度最高,为5.562±0.049 mmol/L,是对照组的6.3倍。此外,与阿霉素对照组相比,ADR-GL分子复合物组对HepG2细胞活力的直接影响及对MDA-MB-231肿瘤干细胞群比负作用二者无显著差异。结论 ADR-GL不降低阿霉素抗肿瘤活性,其可能是一种潜在的安全的具有开发价值的新颖递药系统。     

大鼠眶下孔注射高渗盐水阿霉素后三叉神经节的病理变化

目的：本实验旨在研究大鼠眶下孔注射高渗盐水阿霉素后,三叉神经功能和三叉神经节细胞病理形态的变化。方法：48只SD大鼠,随机分为A、B两组,每组24只,每组又分四个时间点：1周组,2周组,1月组,3月组取材,每时间点6只大鼠。将A、B组分别给予10%NaCl和1%阿霉素的混合溶液10μl眶下孔注射,生理盐水10μl眶下孔注射（B组）每组给药后于1周、2周、1月及3月时测试各组剩余大鼠的触须垫感觉功能,后处死取三叉神经节标本,制作H E染色切片,分别观察神经节细胞的形态学变化,用等距随机抽样法记录节细胞总数及异常节细胞率。结果：各组动物感觉功能测试,A、B组同时间点有统计学差异（P〈0.01）,眶下孔内神经周围注射高渗盐水阿霉素溶液后A 1-A 4组节细胞总数呈递减趋势（同组各时间点分别比较,P〈0.01）,显著低于B组同时间点（P〈0.01）,而与B组各时间点相比,无统计学差异（P〉0.05）;异常节细胞率A 1-A 4组呈递增趋势（A组各时间点相比（P〈0.01）,显著高于B组同时间点（P〈0.01）。结论：大鼠眶下孔内神经周围注射高渗盐水阿霉素后,阿霉素可在高渗盐水的作用下被神经纤维大量吸收并进一步逆行运输到三叉神经节,随着时间的延续引起三叉神经节细胞的渐进性退变。     

蒸馏水与其化疗药物溶液对胃癌MGC-803细胞作用1分钟的灭活效果比较

目的：观察常温蒸馏水、温热蒸馏水和常温蒸馏水加不同化疗药的溶液短时间（1分钟）作用于胃癌细胞MGC-803的结果，从中筛选出能杀灭癌细胞的最低冲洗浓度，为临床胃癌术野的蒸馏水化疗药物冲洗提供实验依据。方法：选取常见胃癌细胞MGC-803为实验对象，以蒸馏水（DW）、43℃温热蒸馏水（HDW）和常用化疗药阿霉素（ADM）、顺铂（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-FU）与蒸馏水混合溶液作为干预方法，分别以不同浓度（DW＋ADM/DDP/5-FU：10/10/50μg/ml、20/20/100μg/ml、40/40/200μg/ml、80/80/400μg/ml、160/160/800μg/ml、320/320/1600μg/ml、640/640/3200μg/ml）的水溶液作用细胞1分钟并用培养液继续培养72小时后进行细胞形态学及MTT实验。结果：蒸馏水化疗药溶液相对于单纯蒸馏水和温热蒸馏水对胃癌细胞具有更强的杀伤作用，结果具有统计学意义（P＜0．01）；筛选出3种化疗药物的最低完全抑制浓度（抑制率＞90％），分别为：ADM 160μg/ml、DDP 320μg/ml、5-FU 1600μg/ml。结论：蒸馏水化疗药溶液相比于单纯蒸馏水及温热蒸馏水可明显增加对胃癌细胞的杀伤作用，筛选出的蒸馏水化疗药溶液最低浓度可对临床胃癌手术以及其他癌症手术术野冲洗液的选择提供一定的实验依据。     

食管癌耐阿霉素EC9706中干细胞富集及上皮间质化

目的:建立耐阿霉素(ADM)食管癌细胞株,命名为EC9706/ADM,探讨该细胞株的上皮间质化(EMT)及肿瘤干细胞富集现象.方法:用中等浓度间歇法建立食管癌耐阿霉素细胞株,MTT法测定细胞株对ADM、5-FU、顺铂、环磷酰胺的耐药指数.流式细胞仪检测EC9706/ADM及EC9706中CD44+CD24-细胞比例,MTT法、Transwell、平板克隆形成和球囊培养实验分别检测耐药对细胞增殖、迁移与转移、体外成瘤和克隆形成能力的影响;荧光定量PCR检测EC9706/ADM干细胞标志ALDH1、CD133及Oct4及EMT相关分子标志物E-钙黏蛋白及间质细胞分子标记N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维连接蛋白的表达.结果:EC9706/ADM的耐药指数为17.8,对5-FU、顺铂、环磷酰胺产生了交叉耐药性.与EC9706细胞相比,EC9706/ADM耐药细胞转移能力明显增强,表现出更高的微球体形成能力,E-cadherin表达降低而Fibronectin表达显著增高.结论:食管癌耐阿霉素细胞EC9706/ADM发生了EMT现象,转移迁移能力增强,细胞表现出更高的干细胞特性,化疗药物有助于肿瘤干细胞的富集.     

人参皂苷Rh_2对胃癌细胞SGC7901/ADR耐药敏感性的影响

目的观察人参皂苷Rh_2(G-Rh_2)对人胃癌SGC7901/ADR耐药细胞增殖、细胞周期及化疗敏感性的影响。方法 MTT法检测G-Rh_2与阿霉素(ADR)联用对SGC7901/ADR细胞增殖的影响,并计算逆转倍数(RF);流式细胞术检测G-Rh_2对SGC7901/ADR细胞周期的影响;蛋白印迹法检测G-Rh_2对SGC7901/ADR细胞P-糖蛋白(P-gp)、Bcl-2蛋白表达水平的影响。结果与ADR单药处理后细胞的半数抑制浓度(IC50)值(54.52μmol/L)比较,G-Rh_2与ADR联用时SGC7901/ADR细胞IC50值(30.14μmol/L)明显下降,RF为1.81;G-Rh_2与ADR联用能够将SGC7901/ADR细胞周期阻滞在G2/M期,与ADR单药处理比较,联用组细胞P-gp、Bcl-2的蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论 G-Rh_2联合ADR能够提高SGC7901/ADR细胞的化疗敏感性,可能通过阻滞细胞周期、增加细胞凋亡进而抑制细胞增殖。     

Stathmin和CrkL蛋白在耐阿霉素的K562白血病细胞中表达上调

本研究应用蛋白质组学方法比较白血病K562细胞及其耐阿霉素的K562/A02细胞中蛋白质表达谱的差异,筛选新的耐药相关蛋白。利用荧光差异双向电泳（2D-DIGE）技术分离K562细胞及K562/A02细胞的总蛋白,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF/MS）对差异表达蛋白质点进行鉴定,搜索蛋白质数据库,获得差异蛋白质的信息,并用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量PCR法在蛋白质水平和mRNA水平对差异蛋白质进行验证。结果显示,经过DIGE技术和质谱分析,鉴定出8个蛋白质在耐阿霉素的K562细胞中表达有差异,其中2个表达下调,6个表达上调,它们分别参与细胞能量代谢、细胞增殖、细胞凋亡、细胞信号转导和基因转录等。在表达上调的蛋白中挑选Stathmin和CrkL蛋白,在K562及其耐药细胞株中进行了蛋白免疫印迹实验,结果与双向电泳结果一致;实时荧光定量PCR显示,CrkL在mRNA水平变化与在蛋白质水平变化一致,而Stathmin在mRNA水平变化与蛋白质水平变化不完全一致。结论：白血病K562细胞及其耐阿霉素K562/A02细胞蛋白质表达谱有差异,Stathmin和CrkL蛋白可能与耐药有关,值得进一步探讨。     

脂质体载药降低阿霉素抗SRS淋巴瘤毒性的实验研究

本文将阿霉素包封在多层脂质体中,观察治疗SRS淋巴瘤小鼠的毒性反应。与游离阿霉素比较,脂质体阿霉素能明显降低小鼠的早期死亡率,骨髓抑制作用减轻。通过血液生化检测与心、肝组织的病理观察,结果表明脂质体载药后能明显降低阿霉素治疗SRS淋巴瘤小鼠的毒副作用。