CCR6通过上皮间质转化促进结直肠癌肝转移的机制研究

目的检测人趋化因子受体6(CCR6)、人趋化因子配体20(CCL20)、E-钙黏着蛋白和波形蛋白在结直肠癌及肝转移组织中的表达,探讨CCR6参与结直肠癌肝转移的可能机制。方法选取山西医科大学第一医院及山西省肿瘤医院2009至2017年资料齐全的62例原发性结直肠癌患者(结肠癌54例、直肠癌8例)手术切除存档蜡块,其中包含同期切除结直肠癌伴肝转移病灶的标本20例。采用免疫组织化学法检测结直肠癌及肝转移组织中CCR6、CCL20、E-钙黏着蛋白和波形蛋白的表达情况,分析CCR6、E-钙黏着蛋白和波形蛋白的表达与患者临床病理特征之间的关系,采用logistic多因素回归分析肝转移与患者临床病理特征及CCR6、E-钙黏着蛋白和波形蛋白表达的关系,采用Spearman相关分析CCR6与E-钙黏着蛋白和波形蛋白的相关性。结果CCR6在结直肠癌组织中的阳性表达率为66.1%(41/62);在伴有肝转移的结直肠癌组织中的阳性表达率为85.0%(17/20),在肝转移组织中的阳性表达率为70.0%(14/20)。CCL20在结直肠癌中的阳性表达率为83.9%(52/62);在伴有肝转移的结直肠癌组织中的阳性表达率为90.0%(18/20),在肝转移组织中的阳性表达率为90.0%(18/20)。E-钙黏着蛋白在结直肠癌中的阳性表达率为67.7%(42/62);在伴有肝转移的结直肠癌组织中的阳性表达率为50.0%(10/20),肝转移组织中的阳性表达率为65.0%(13/20)。波形蛋白在结直肠癌组织中阳性表达率为79.0%(49/62);在伴有肝转移的结直肠癌组织中的阳性表达率为85.0%(17/20),在肝转移组织中的阳性表达率为90.0%(18/20)。CCR6的表达与淋巴结转移(χ^2=11.142,P=0.001)、肝转移(χ^2=4.694,P=0.030)、TNM分期(χ^2=21.785,P<0.001)密切相关;E-钙黏着蛋白的表达与患者淋巴结转移(χ^2=4.694,P=0.030)、肝转移(χ^2=4.253,P=0.039)、TNM分期(χ^2=7.867,P=0.005)密切相关;波形蛋白的表达与患者淋巴结转移(χ^2=7.293,P=0.007)、TNM分期(χ^2=5.712,P=0.017)密切相关。CCR6、E-钙黏着蛋白、波形蛋白均与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小及分化程度无关(均P>0.05)。logistic多因素回归分析发现,CCR6(OR=6.812,95%CI为1.206~38.474,P=0.030)、E-钙黏着蛋白(OR=0.256,95%CI为0.069~0.945,P=0.041)是结直肠癌患者肝转移的独立影响因素。Spearman相关分析显示,在20例晚期结直肠癌患者肝转移组织中,CCR6与E-钙黏着蛋白表达(r=0.454,P=0.044)、波形蛋白表达(r=0.509,P=0.022)相关。结论CCR6可能通过上皮间质转化机制促进结直肠癌的进展和肝转移。     

沉默LIMK1抑制人结肠癌SW480细胞上皮-间质转化

目的:研究沉默LIMK1对人结肠癌SW480细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation，EMT）的影响。方法:RT-PCR、Western blot、免疫荧光与免疫组化检测沉默LIMK1对EMT相关分子表达的影响。裸鼠实验检测沉默LIMK1对移植瘤生长的影响。结果:RT-PCR检测显示，沉默LIMK1可下调Vimentin和上调E-cadherin mRNA表达(P<0.05)。Western blot显示，沉默LIMK1可明显下调SW480细胞Snail及Vimentin蛋白表达和上调E-cadherin表达(P<0.05)。免疫荧光显示，LIMK1沉默细胞Snail与Vimentin阳性信号较对照组明显减弱，而E-cadherin阳性信号显著增强。裸鼠实验结果显示，沉默组肿瘤生长速度较SW480组明显减慢(P<0.05)。沉默组移植瘤瘤重（0.16±0.079）g较SW480组（0.86±0.165）g明显减少，瘤重抑制率为97.7%(P<0.05)。LIMK1沉默组移植瘤较对照组的Ki-67、Vimentin、Snail与CD34阳性表达明显减弱，而E-cadherin表达明显增加。结论:沉默LIMK1可体外抑制人结肠癌SW480细胞EMT。     

兔心包液CD44和波形蛋白阳性细胞具有多项分化潜能

目的 探讨兔心包液内的细胞成分及其分化潜能,为心包液细胞基础研究和临床应用提供形态学依据。 方法 成年新西兰大白兔 30 只, 无菌开胸,用输液针软管抽取心包液,离心培养。取不同培养代次细胞,倒置显微镜下行细胞形态观察。利用免疫荧光技术对心包液细胞进行免疫显色,观察CD44、CD45、波形蛋白（vimentin）的表面标记。取第3代细胞进行成骨、成脂诱导。利用 PCR技术检测CD44、CD45、vimentin相关分子表达情况及分析表达量的差异。结果 成年兔心包液中含有形态较为均匀、生长状态良好、增殖能力强的细胞群。免疫荧光结果显示,CD44、vimentin阳性表达, 不表达CD45。成脂和成骨诱导后,可向成骨和成脂细胞分化。 结论 兔心包液中含有多项分化潜能的细胞,它们可能对心肌修复具有积极意义。     

Peroxiredoxin 1与EMT相关蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨过氧化物还原酶1( Prx1)与上皮细胞间质转化( EMT)相关蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法分别检测 Prx1、E-钙黏素( E-cadherin)、波形蛋白( Vimentin)在66例胰腺癌组织和11例正常胰腺组织中的表达,并分析三者之间的关系及与临床病理因素间的关系。结果 Prx1、E-cadherin和Vimentin分别在66例胰腺癌组织中的阳性表达率为69．70%(46/66)、40．91%(27/66)、56．06%(37/66);Prx1、E-cadherin和Vim-entin分别在11例正常胰腺组织中的阳性表达率为18．18%(2/11)、90．90%(10/11)、18．18%(2/11)。 Prx1、E-cadherin和Vimentin在胰腺癌组织中的表达均与TNM分期、淋巴结转移和肿瘤分化程度显著相关(P<0．05),而与性别、年龄、肿瘤大小、病变部位均无关;Prx1与神经侵犯显著相关( P<0．05),而E-cadherin和Vimentin与神经侵犯无关。 Prx1的表达与Vimentin表达呈正相关(P<0．05),Prx1和Vimentin的表达均与 E-cadherin表达呈负相关( P<0．05)。结论Prx1与EMT相关蛋白在胰腺癌组织中的表达呈显著相关性,并与其侵袭转移能力相关,提示Prx1的高表达可能为预测胰腺癌患者预后不良的辅助指标之一。     

肺复康对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及E-cadherin、Vimentin和TGF-β表达的影响

目的 研究肺复康对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及癌、癌旁组织中上皮-间质转化(EMT)相关因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和转化生长因子-β(TGF-β)表达的影响.方法 40只小鼠随机分为肺复康组(17.2 g生药/kg)、5-Fu组(25 mg/kg)、Lewis肺癌模型组、正常组.检测肿瘤体积、肿瘤质量以及癌、癌旁组织中E-cadherin、Vimentin和TGF-β的蛋白表达情况.结果 与模型组相比,肺复康组肿瘤体积减小(P＜0.01),肿瘤质量降低(P＜0.01);肺复康组抑瘤率为36％.与正常组比较,模型组癌及癌旁组织E-cadherin表达降低(P＜0.01),Vimentin、TGF-β表达升高(P＜0.01);与模型组癌及癌旁组织相比,肺复康组癌及癌旁组织E-cadherin表达升高(P＜0.01),而Vimentin、TGF-β无显著性差异(P＞0.05).结论 肺复康对Lewis肺癌小鼠肿瘤的生长具有一定的抑制作用;并能上调E-cadherin的表达,从而促进肿瘤细胞间的同质粘附而抑制肿瘤的侵袭、转移.     

EFFECT OF GROWTH FACTORS ON DNA LABELING AND CYTOSKELETAL PROTEIN EXPRESSION IN 17-β-ESTRADIOL AND BASIC FIBROBLAST GROWTH FACTOR PRE-TREATED ASTROCYTE CULTURES

Astrocytes react to all noxae which damage neurons. Their reactions include degeneration, hypertrophy, hyperplasia and fibre formation. Growth factors inducing proliferation and differentiation of both neurons and astrocytes in culture play a pivotal role in the dynamic flow of signaling molecules between neurons and astroglia. Estrogens as well influence astroglia and are neuroprotectants. This study has investigated the interactions between growth factors and estrogens on DNA labeling and cytoskeletal protein [glial fibrillary acidic protein (GFAP) and vimentin] expression in 22 DIV astrocyte cultures treated for 24 or 36?h under different experimental conditions.

Contemporary addition of 17-β-estradiol (E₂) with two or three growth factors for 24?h, significantly stimulated methyl-[³H]thymidine incorporation into DNA from 22 days in vitro (DIV) astrocyte cultures.

This effect reached a peak when E₂ was co-added with epidermal growth factor (EGF), basic fibroblast growth factor (bFGF) and insulin. In astrocyte cultures treated for 36?h with E₂ and EGF+insulin or bFGF+insulin added in the last 12?h, DNA labeling was remarkably increased. The parallel cyclin D1 expression positively correlated with ERK2 activation. Western blot analysis for cytoskeletal proteins showed also changes of both GFAP and vimentin expression. The above data suggest the occurrence of a scheduled interaction between “competence” or “progression” growth factors and estrogens on DNA labeling and cytoskeletal protein expression during astroglial cell proliferation and differentiation in culture. A better understanding of the mechanisms of these interactions may contribute to develop strategies for controlling astroglial reaction in cerebrovascular disease including stroke and hypertensive brain damage.     

Glial Fibrillary Acidic Protein and Vimentin Expression Is Regulated by Glucocorticoids and Neurotrophic Factors in Primary Rat Astroglial Cultures

The neurotrophic factors epidermal growth factor (EGF), basic fibroblast growth factor, (bFGF), insulin‐like growth factor I (IGF‐I) and insulin (INS) regulate neural and astroglial cell functions. Glucocorticoids may influence the metabolism of astroglial compartment and are key hormones in neurodegenerative events. This study was designed to assess the interactions between growth factors and dexamethasone (DEX) on cytoskeletal proteins (GFAP and vimentin) expression in 25 days in vitro (DIV) astrocyte cultures. An increase in GFAP and vimentin expression was observed after 12 h pretreatment with bFGF and subsequent treatment for 60 h with DEX. GFAP immunoreactivity was decreased after 24 h progression growth factors (EGF, IGF‐I and INS) addition, when compared to control 36 h DEX and bFGF‐pretreated cultures for the last 12 h. Vimentin immunoreactivity was decreased after 12 h bFGF pretreatment and subsequent 60 h DEX addition in astrocyte cultures compared to 12 h bFGF‐pretreated ones. Pretreatment for 36 h with DEX plus bFGF in the last 12 h and subsequent treatment for 24 h with DMEM (Dulbecco's modified Eagle medium; DMEM) + BSA (bovine serum albumine) (harvesting), or with progression growth factors (EGF, IGF‐I or INS) alone or two of them together, stimulated GFAP expression, compared to untreated controls. Immunochemical analysis of the mitogen‐activated protein kinase ERK2 suggests an involvement of this enzyme in the control of GFAP expression. The above findings support the view of an interactive and complex dialogue between growth factors and glucocorticoids during astroglial cell proliferation and maturation in culture. This may have implications in therapeutic approach of neurologic disorders associated with astrogliosis, including cerebrovascular disease.     

α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的观察α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白1在乳腺癌间质和正常乳腺组织中的表达变化。方法收集2012年1月至2013年3月在沧州市人民医院手术治疗并经病理证实的女性乳腺癌患者60例纳入病例组,选择同期乳腺活检的女性正常乳腺组织30例纳入对照组。采用免疫组织化学的方法检测两组间α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白的表达变化。结果α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白1在正常乳腺组织及乳腺癌间质中阳性表达率分别为:0 vs73.4%、10.0%vs 61.2%、76.7%vs 60.0%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);三种标志物在不同年龄、组织学分型、临床分期及有无淋巴结转移的患者中表达水平均有不同,差异有统计学意义。结论α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白在乳腺癌进展过程中表达逐渐增高,而陷窝蛋白1则呈现负性表达的趋势,提示三者在乳腺癌浸润和转移过程中起重要作用。早期乳腺癌监测此三项指标有助于乳腺癌危险度分级。     

MEK抑制剂对脊髓损伤后胶质瘢痕形成的影响

目的:观察MEK(mitogen-activated ERK-regulating kinase,丝裂原活化的细胞外信号调节激酶之调节激酶)抑制剂对脊髓损伤后胶质瘢痕形成的影响,并探讨胶质瘢痕形成的机制。方法:36只SD大鼠随机分为3组。Ⅰ组为假手术组,只打开椎板,不打击脊髓;Ⅱ组及Ⅲ组分别为脊髓损伤组及脊髓损伤后干预组,均造成T12脊髓损伤,Ⅲ组每天给予腹腔注射MEK抑制剂(U0126)共9d,其余组给予腹腔注射等量的二甲基亚砜(DMSO)。在术后当天、1d、3d、5d、7d、14d、21d、28d时对每组大鼠行BBB评分;术前及术后当天、14d及28d时对大鼠行体感诱发电位检测;术后14d及28d时分别处死大鼠,灌注固定,取原打击处脊髓标本行HE染色、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)及波形蛋白(Vim)免疫组化染色并光镜下进行观察,计算阳性细胞数。结果:Ⅰ组各时间点BBB评分及其他指标均无明显变化。脊髓损伤后,Ⅱ组及Ⅲ组大鼠双后肢运动功能均表现出不同程度的恢复,术后28d时Ⅱ组BBB评分为12.00±1.70分,Ⅲ组为16.5±1.08分,Ⅲ组恢复速度较Ⅱ组更快(P<0.05)。脊髓损伤后,大鼠双后肢感觉诱发电位潜伏期明显延长,波幅明显降低;术后观察,Ⅲ组潜伏期及波幅恢复较Ⅱ组明显增快(P<0.05),Ⅲ组在28d时可达到潜伏期16.86±0.55ms、波幅4.19±0.11μV。脊髓损伤后,HE染色可看到胶质细胞明显增多,胶质瘢痕形成,28d时Ⅲ组较Ⅱ组瘢痕范围小;损伤后星形胶质细胞明显活化增殖,GFAP及Vim的镜下表达数量明显增多。Ⅱ组、Ⅲ组损伤后14d时GFAP的表达分别为143.56±1.09和133.56±3.31,Vim的表达分别为93.82±4.48和89.32±6.50;28d时两组的GFAP表达分别为110.68±9.41和102.44±6.93,Vim的表达分别为72.96±4.16和66.44±4.46,干预后明显下调了GFAP及Vim的表达(P<0.05)。结论:MEK抑制剂能通过抑制星形胶质细胞的增殖,下调GFAP及Vim的表达,减少胶质瘢痕形成;同时可促进脊髓损伤后大鼠双后肢行为学及神经功能的恢复。