绞股蓝三萜类化合物及其抑制α-葡萄糖苷酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B的活性研究

目的 研究绞股蓝总皂苷及其水解产物中达玛烷型四环三萜类化合物及其降糖活性。方法 采用反复硅胶柱色谱法、重结晶法和半制备液相色谱法等，对绞股蓝总皂苷水解产物和总皂苷进行系统分离，结合NMR数据鉴定了化合物的结构。利用体外抑制α-葡萄糖苷酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）活性模型进行化合物活性筛选，并对活性较强的化合物进行了酶抑制动力学研究，采用计算机辅助药物设计的活性位点分析法，对PTP1B与化合物的相互作用进行对接模拟。结果 从绞股蓝总皂苷酸水解产物中分离得到7个化合物，分别鉴定为gpsapogenin A（1）、20（S）-人参二醇（2）、gypensapogenin F（3）、20（R）-原人参二醇（4）、（23S）-3β-羟基达玛-20，24-二烯-21-羧酸21，23-内酯（5）、gypsapogenin A（6）和（20S，24S）-3β，20，21β，23β，25-五羟基-21，24-环氧达玛烷（7）；从总皂苷中分离得到5个化合物，分别鉴定为（20R，23R）-3β，20-二羟基达玛-24-烯-21-羧酸21，23-内酯-3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）][β-D-吡喃木糖基（1→3）]-6-O-乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷（8）、（20S，23S）-3β，20-二羟基达玛-24-烯-21-羧酸21，23-内酯-3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）][β-D-吡喃木糖基（1→3）]-6-O-乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷（9）、（20R，23R）-19-醛基-3β，20-二羟基达玛-24-烯-21-羧酸21，23-内酯-3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）][β-D-吡喃木糖基（1→3）]-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（10）、（20S）-3β，20，21-三羟基达玛-23，25-二烯3-O-{[α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）][β-D-吡喃木糖基（1→3）]-β-D-吡喃葡萄糖基}-21-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（11）、（20S，23S）-3β，20-二羟基达玛-24-烯-21-羧酸21，23-内酯3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）][β-D-吡喃木糖基（1→3）]-β-D-吡喃葡萄糖苷（12）。结论 除化合物4，其他化合物对α-葡萄糖苷酶和PTP1B均具有抑制活性。化合物9的活性最好，其半数抑制浓度（IC₅₀）值分别为2.10和1.07 μmol/L。     

绞股蓝阻断金地鼠颊囊癌变的光镜观察

采用二甲基苯并恩（ＤＭＢＡ）诱导金地鼠颊囊癌前病变模型，结果发现不典型增生以及原位癌最早出现时间分别为涂ＤＭＢＡ３周和６周，远期致癌情况最早出现于涂ＤＭＢＡ４周者。比以往报道时相提前。以单方和复方绞肌蓝喂服，经光镜观察发现：服药组比模型组６周时癌变率低；涂ＤＭＢＡ３周后远期观察不典型增生有逆转现象，提示绞股蓝有一定的防癌作用，单方与复方疗效无显著差别。     

复方绞股蓝对金地鼠颊囊癌前病变的疗效观察

本实验采用ＤＭＢＡ（二甲基苯丙蒽）丙酮局部涂抹法成功地建立了金地鼠颊囊癌前病变的动物模型。与此同时应用复方绞股蓝进行了对口腔粘膜癌前病变阻断的实验研究。结果显示：绞股蓝对口腔粘膜癌前病变的阻断部位发生在均质型白斑到颗粒状白斑或疣状白斑阶段。先服绞股蓝后涂ＤＭＢＡ组优于边涂边服组。实验证明绞股蓝具有防癌和抗癌功能，在口腔粘膜癌前病变的防治中具有应用前景，其抗癌机理还有待于作更深入的研究。     

人参属植物高温蒸制前后人参皂苷含量的变化和细胞毒活性研究

目的研究人参属植物人参Panax ginseng、三七P. notoginseng和西洋参P. quinquefolium高温蒸制前后主要人参皂苷的含量变化,并测定高温蒸制前后样品对4株肿瘤癌细胞的细胞毒活性。方法采用HPLC建立了测定22种皂苷含量的分析方法,测定这些皂苷在人参属植物及其高温蒸制品中的含量。用MTT法测定人参属植物及其高温蒸制品对4株人类癌细胞(人类骨髓癌HL-60细胞、肝癌SMMC-7721细胞、肺癌A-549细胞、乳腺癌SK-BR-3细胞)的细胞毒活性。结果从人参、三七和西洋参及高温蒸制后的样品中鉴定出22个皂苷,包括人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rd、Rk3、Rh4、Rk1、Rg5、Rb3、Rh3、Rk2,20(S)-人参皂苷Rh1、20(R)-人参皂苷Rh1、三七皂苷Fc、三七皂苷R1、绞股蓝皂苷IX、20(S/R)-三七皂苷Ft1、20(S/R)-人参皂苷Rg3、人参皂苷Rs3、人参皂苷Rh2。人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2和Rd为人参的主要成分;人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd为西洋参的主要成分;人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd和三七皂苷R1为三七的主要成分,高温蒸制后这3种植物的主要成分全部转化为人参皂苷Rk3、Rh4、Rk1、Rg5和20(S/R)-人参皂苷Rg3,在高温蒸制后的三七中还检测到20(S)-人参皂苷Rh1和20(R)-人参皂苷Rh1。三七皂苷Fc、人参皂苷Rb3和绞股蓝皂苷IX为三七茎叶的主要成分,高温蒸制后转化为另外8个主要成分20(S/R)-三七皂苷Ft1,20(S/R)-人参皂苷Rg3、Rs3、Rk1、Rg5,20(S/R)-人参皂苷Rh2、Rh3和Rk2。细胞毒活性结果显示,高温蒸制三七的细胞毒活性比高温蒸制人参和高温蒸制西洋参强,高温蒸制三七的细胞毒活性比三七的活性强,说明高温蒸制后三七的细胞毒活性增强。结论人参、西洋参和三七经过高温蒸制后原来的主要成分基本消失,随之转化为其他主要成分,高温蒸制三七的细胞毒活性最强。     

绞股蓝中1个新的葫芦烷型皂苷类化合物

目的对绞股蓝Gynostemma pentaphyllum的总皂苷提取物进行化学成分研究。方法综合应用多种色谱技术进行分离纯化,通过各种现代谱学技术对化合物进行结构鉴定。结果从绞股蓝的总皂苷提取物中分离得到2个葫芦烷型三萜皂苷类化合物,分别鉴定为葫芦素L-2-O-{[a-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)][α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基}-25-O-β-D-吡喃木糖苷(1)、葫芦素L-2-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)][a-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)。结论化合物1为1个新化合物,命名为绞股蓝葫芦皂苷A。     

绞股蓝皂苷对鼠应激能力影响的效果评估

目的：观察在不同类型应激状态下，绞股蓝皂苷对鼠应激能力的影响，并与人参皂甙作用效果进行比较。 方法：（1）实验于2004—07／08在宜春学院生物工程研究所完成。选用昆明种小鼠90只，SD大鼠30只。②常压下缺氧应激模型：将30只小鼠随机分为3组：生理盐水组（给予相同容积的生理盐水）、绞股蓝皂苷和人参皂苷（100mg／kg分别灌胃绞股蓝皂苷和人参皂苷），各组均连续干预3d。均在末次给药50min后将小鼠置于250mL的盛有碱石灰10g的磨口广口瓶内，每瓶放小鼠1只，然后密塞涂以凡士林，造成瓶内氧气逐渐减少，形成缺氧环境，以呼吸停止为判断死亡指标。观察记录在缺氧应激状态下，小鼠存活的时间。③异丙肾上腺素作用下的缺氧应激模型：分组、给药同“常压下缺氧应激模型实验”。于在末次给药35min后，腹腔注射异丙肾上腺素15mg／kg，25min后，按“常压下缺氧应激模型实验”法观察记录小鼠在缺氧应激状态下存活的时间。强迫游泳应激模型：分组、给药同“常压下缺氧应激模型实验”。在末次给药50min后将小鼠置于25℃，水深35cm的恒温水箱中强制游泳，小鼠游泳至力竭时开始下沉，以小鼠下沉至水底为指标，观察记录小鼠自游泳开始至下沉水底的时间。④急性心肌缺血性应激模型：随机将SD大鼠30只分成为3组：生理盐水组（给予0．1mL/只）、绞股蓝皂苷组（给予绞股蓝皂苷30mg／kg）和人参皂苷组（给予人参皂苷30mg／kg），每组10只。15min后记录一次心电图。然后，舌下静脉注射垂体后叶素0．5μg/kg（药物浓度100μg／L），造成大鼠急性心肌缺血。并立即记录心电图的变化．若ST段较实验前抬高0．1mV或T波低平、双向、倒置或出现心律失常者，则为缺血阳性指标，否则为阴性，缺血指标阴性率高则对心肌缺血的保护作用强。⑤计量资料差异性比较采用方差分析，进行F检验和q检验；计数资料以百分数表示，进行r检验。 结果：昆明种小鼠90只和SD大鼠30只均进入结果分析。①常压缺氧应激实验结果：人参皂苷组和绞股蓝皂苷组小鼠应激存活时间均明显长于生理盐水组（P〈0．05）。②异丙肾上腺素作用下的缺氧应激实验结果：绞股蓝皂苷和人参皂苷对异丙肾上腺素作用下的缺氧应激小鼠无明显影响（P〉0．05）。各组小鼠应激存活时间差异不明显（P〉0．05）。③强迫游泳应激实验结果：各组动物平均游泳时间无差异（P〉0．05）。但人参皂苷和绞股蓝皂苷均能延长小鼠强迫游泳的泳时，泳时延长率分别59％和57％，显示其具有一定的抗疲劳作用趋势。④大鼠急性心肌缺血应激实验结果：绞股蓝皂苷和人参皂苷都可使缺血性心电图变化发生率减少（P〈0．01，0．05），表明两药均能部分对抗垂体后叶素所致的心肌缺血反应，对大鼠急性心肌缺血有保护作用。人参皂苷组和绞股蓝皂苷组缺血指标阴性率明显高于生理盐水组（P〈0．05，0．01）。 结论：绞股蓝皂苷能明显提高小鼠常压缺氧、异丙肾上腺素作用下的缺氧、强迫游泳应激能力及大鼠急性心肌缺血应激能力，且该种作用与人参皂苷类似。     

绞股蓝皂苷对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制

目的 探索绞股蓝皂苷对人胃癌细胞SGC-7901和AGS增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 不同浓度的绞股蓝皂苷分别处理SGC-7901和AGS细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖活性并计算得到IC₅₀;细胞克隆实验检测集落形成情况;流式实验检测细胞凋亡;caspase活性检测实验检测细胞内caspase-9和caspase-3的活性;Western blot实验检测细胞内凋亡相关蛋白的表达。结果 CCK-8和细胞克隆实验结果显示,绞股蓝皂苷能抑制SGC-7901和AGS细胞的增殖。流式结果表明,绞股蓝皂苷能够促进细胞的凋亡。caspase活性检测结果表明,绞股蓝皂苷能增加细胞内caspase-9和caspase-3的活性。Western blot结果表明,绞股蓝皂苷主要通过上调人胃癌细胞cleaved-PARP、caspase-9和caspase-3蛋白的表达,同时下调Bcl-2蛋白的表达,诱导细胞凋亡。结论 绞股蓝皂苷能抑制SGC-7901和AGS细胞的增殖,并调控凋亡途径所涉及的cleaved-PARP、caspase-9、caspase-3和Bcl-2等相关...     

绞股蓝总苷逆转胆固醇诱导的血管平滑肌细胞表型转化

目的：研究绞股蓝总苷（Gypenosides,GP）对胆固醇所致人血管平滑肌细胞（Human Vascular Smooth Muscle Cells,HVSMCs）表型转化的影响。方法：体外培养人VSMCs株,分别用1.0、10.0、100.0μg?mL^-1的GP预处理1h后,再加入50.0mg?L^-1的胆固醇处理48h。透射电镜观察细胞超微结构改变;Western blot法检测VSMCs中α-平滑肌肌动蛋白（Smooth Muscle alpha-Actin,α-SMA）、平滑肌22α（Smooth Muscle 22 alpha,SM22α）及表皮调节素（Epiregulin）蛋白表达;实时定量PCR检测VSMCs中生长抑制同源基因（Growth arrest-specific homeobox,Gax）基因的表达。结果：与正常对照组比较,胆固醇组各指标差异均有统计学意义（P<0.01）;与胆固醇组比较,10.0、100.0μg?mL^-1GP可逆转胆固醇所致细胞超微结构的改变,增加细胞收缩表型标志蛋白α-SMA、SM22α的表达及减少合成表型标志蛋白Epiregulin的表达（P<0.05）,并能减少胆固醇所致的细胞增殖（P<0.05）。GP可逆转胆固醇所致的转录因子Gax的减少（P<0.05）。结论：GP可逆转胆固醇所致的VSMCs表型转化,并可能与增加转录因子Gax的表达有关。     

绞股蓝总苷的药理作用及其临床应用进展

绞股蓝为葫芦科绞股蓝属植物,其主要药效成分为绞股蓝总皂苷。本文通过对大量绞股蓝总苷相关文献进行总结归纳,得出绞股蓝总苷具有降血脂、降血糖、心血管活性、改善记忆、抗组织纤维化、抗肿瘤等药理作用,临床可用于治疗高血脂症、老年脑血管性痴呆、肿瘤等疾病。绞股蓝总苷为葫芦科植物绞股蓝Gynostemma pentephyllum （ Thunb．） Mak．全草中提取得到的总皂苷经精制而成。     

绞股蓝正丁醇提取物对快速老化小鼠学习记忆的影响及其机制

目的研究绞股蓝正丁醇部位对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习记忆的影响。方法采用Morris水迷宫方法对小鼠记忆行为进行检测;采用ELISA法测定SOD、GSH-PX和MDA的含量;采用HE法染色观察对小鼠大脑海马组织的影响。结果绞股蓝正丁醇部位能改善老年痴呆小鼠的学习记忆能力;能促进SOD和GSH-PX生成,抑制MDA的生成。结论绞股蓝正丁醇部位可提高AD小鼠的抗氧化能力,从而起到防治AD的作用。