七叶一枝花甾体皂苷种类及含量差异研究进展＊

重楼是我国传统的名贵中药，七叶一枝花为历版《中国药典》收载的重楼药材两个基原植物之一，具有清热解毒、消肿止痛、活血化瘀等功效，其主要活性成分为甾体皂苷类物质。由于重楼市场需求量剧增和七叶一枝花成药时间较长，导致大量依靠人工种植。然而，人工种植过程中产地、采收年限和采收月份都会影响七叶一枝花的甾体皂苷含量。本文系统地总结了七叶一枝花中主要活性成分甾体皂苷的种类，以及不同产地、不同生长年限及不同采收月份的七叶一枝花根茎中甾体皂苷含量差异的研究现状，以期为进一步研究七叶一枝花品质差异、野生资源驯化及规范化种植提供参考。     

知母种子质量分级标准的研究

目的:研究制定知母种子的质量分级标准。方法:通过对不同产地20个批次知母种子的净度、千粒质量、含水量、生活力、发芽率等指标测定和外观形态观察,利用Excel 2010、SPSS 20.0软件对以上数据进行相关分析、主成分以及K-均值聚类分析,初步确定知母种子质量分级指标和分级标准,且以各等级知母种子分别在田间对比种植,通过测定1年产苗量,2年药材产量及有效成分含量,验证知母种子质量分级标准的合理性。结果:Ⅰ级知母种子发芽率不低于85%,千粒质量不低于7.5 g,净度不低于95%;Ⅱ级知母种子发芽率不低于70%,千粒质量不低于7.0 g,净度不低于85%;Ⅲ级知母种子发芽率不低于65%,千粒质量不低于6.0 g,净度不低于80%;各级种子含水量均小于10%。结论:发芽率和千粒质量为知母种子质量分级标准的主要指标,净度和含水量为参考指标。不同等级知母种子种植后对知母种苗产量、药材产量及质量会有显著影响。该研究制定的知母种子质量分级标准科学可行、符合生产实际,为知母的种子质量评价和规范化栽培提供参考依据。     

重楼皂苷D对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

重楼皂苷D(polyphyllin D)是重楼中的一种甾体皂苷单体,具有抗菌、镇痛、镇静、抗肿瘤等多种药理作用,但在胰腺癌中少有报道。该研究通过检测凋亡相关指标,探讨polyphyllin D对人胰腺癌Panc-1细胞增殖和凋亡的影响及相关作用机制。采用CCK-8法检测不同浓度的(0,1,2,3,4,5μg·μL-1)polyphyllin D分别处理胰腺癌Panc-1细胞24,48,72 h后,观察对细胞增殖的影响。采用流式细胞术对细胞周期、细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane protential,MMP)进行检测,Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞色素C (cytochrome C,Cyto C),Bax,Bcl-2,cleaved caspase-3,cleaved caspase-9的蛋白表达情况。结果表明,与对照组相比,polyphyllin D能够时间和浓度依赖性地抑制Panc-1细胞的增殖活性。流式细胞术检测显示polyphyllin D能浓度依赖性使细胞阻滞于S期和G2/M期,MMP明显降低,细胞凋亡率随polyphyllin D作用浓度增加而增加。Western blot结果显示,polyphyllin D能浓度依赖性地上调Bax,Cyto C,cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的蛋白表达水平,下调Bcl-2的蛋白表达水平。以上研究结果提示,polyphyllin D能抑制胰腺癌Panc-1细胞的增殖,其机制可能与阻滞细胞的生长周期以及通过线粒体途径诱导细胞的凋亡相关。     

桂枝芍药知母汤加减结合微针刀治疗急性痛风性关节炎疗效观察

目的:观察桂枝芍药知母汤结合微针刀治疗急性痛风性关节炎的疗效。方法:80例随机分为对照组和治疗组各40例。对照组用常规西药治疗,治疗组用桂枝芍药知母汤加微针刀治疗。两组总有效率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:桂枝芍药知母汤加减结合微针刀治疗急性痛风性关节炎可改善临床症状,降低尿酸含量。     

人参皂苷F2对过氧化氢诱导细胞损伤的保护作用

目的研究人参皂苷F2对人胚肾293(HEK-293)细胞氧化应激损伤的保护作用。方法以0.4 mmol/L过氧化氢(H_2O_2)诱导HEK-293细胞氧化应激,1.25、5和20μmol/L人参皂苷F2预处理,MTS法检测细胞活力;DCFH-DA荧光探针考察细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量;试剂盒检测丙二醛(malondialchehyche, MDA)水平和抗氧化酶超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活性;蛋白质印迹法(Western blot)和qRT-PCR检测核因子E2相关因子2 (nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)/抑制蛋白Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1 (kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1)信号的蛋白和mRNA表达量。结果 1.25、5和20μmol/L人参皂苷F2处理正常HEK-293细胞后对细胞无毒性或促增殖作用;人参皂苷F2预处理氧化应激细胞后,细胞活力显著高于损伤组,各组间差异均有统计学意义(P0.05);氧化损伤组的DCF荧光较对照组相比显著增强(P0.05),人参皂苷F2预处理后细胞ROS相对量呈浓度依赖性降低,各组间差异均有统计学意义(P0.05);人参皂苷F2预处理后细胞MDA水平呈浓度依赖性降低,各组间差异均有统计学意义(P0.05),SOD和GSH-Px活性显著高于损伤组(P0.05),5和20μmol/L人参皂苷F2能显著提高CAT活性(P0.05);人参皂苷F2处理后,Nrf2的mRNA和蛋白表达量均显著升高(P0.05),Keap1的mRNA和蛋白表达量显著低于损伤组(P0.05)。结论人参皂苷F2具有细胞保护作用,可降低HEK-293细胞ROS和MDA水平,提高抗氧化酶活性,其作用机制可能是通过调节Nrf2/Keap1信号通路以抵抗过氧化氢导致的细胞氧化应激损伤。     

利用电子顺磁波谱技术研究红参对羟自由基的清除作用

目的 探索电子顺磁波谱（electron paramagnetic resonance，EPR）技术检测红参清除自由基活性的适合产生体系，并研究红参对羟自由基（?OH）的清除作用及其物质基础。方法 采用电子顺磁共振波谱仪检测不同浓度的红参提取液对?OH的体外清除作用，并用液质联用技术（LC-MS）分析红参中的主要皂苷成分，然后研究这些人参皂苷成分对?OH的清除作用。结果 确定了羟自由基的生成体系为：Fe²⁺ 0.1 mmol?L^-1、H₂O₂ 500 mmol?L^-1、DMPO 225 mmol?L^-1；不同浓度的红参提取液对?OH具有明显的清除作用，且其清除?OH的效力与浓度成正相关；LC-MS分析显示该红参提取液中主要含有Rh1、Rf、Rb3、F1、F2、Rg3、Rg5等成分，其中人参皂苷Rg5的清除自由基活性最强。结论 本研究建立了用EPR技术研究红参清除自由基活性的适合产生体系，红参具有明显的清除?OH的能力，且人参皂苷Rg5是其清除自由基的活性成分之一，确定了红参抗自由基的主要物质基础，为红参及人参皂苷Rg5的开发、应用提供了科学依据和理论基础。