白消安诱导构建胎鼠肢体畸形模型的研究

目的用易获得的化学药物建立大鼠四肢畸形发生率稳定、畸形类型特异的动物模型。方法采用抗肿瘤类致畸药物白消安作为受试物,观察不同剂量和不同给药时间的胎仔畸形率、畸形类型及特征。结果在大鼠受孕第12天(GD12),一次经口给予白消安25mg/kg时,胎仔畸形类型主要为肢体畸形。肢体畸形率以活胎计为37.9%(33/87),以窝计为61.5%(8/13)。畸形类型常见于多指(趾)和缺指(趾),掌跖骨缺失和骨化不全发生率也较高。此外,还发生胫骨缺失和骨化不全,在观察大体形态时所见的短肢是由胫腓骨缺失和发育不全所致。四肢畸形的发生率和严重程度存在着不对称性,后肢较前肢出现率高,缺指(趾)畸形较其他畸形出现率高。结论成功建立大鼠肢体畸形动物模型,为进一步分析研究肢体发育畸形的分子机制和潜在原因奠定了基础。     

慢性髓性白血病的治疗现状

慢性髓性白血病(CML)是第一个阐明的获得性分子学异常疾病. 由于9号和22号染色体易位[t(9;22)]形成BCR-ABL融合基因及其所表达的BCR-ABL融合蛋白,即P210具酪氨酸蛋白激酶活性,促使髓系细胞增殖,导致CML的发生.因此,CML也是迄今为止最好的白血病分子病理模型,为在分子水平寻找相关治疗措施提供了可能.临床上数十年来,由于新药的相继问世及造血干细胞移植和供者淋巴细胞输注的开展,CML的治疗正在不断改进和完善.本文将对传统的治疗方法进行评价,同时介绍已较成熟的新药及新疗法.     

Proliferation of exogenously injected primordial germcells （PGCs） into busulfan-treated chicken embryos

Aim: This study was designed to investigate the effect of busulfan treatment on the proliferation of chicken primordialgerm cells (Fgcs) in vivo, focusing on the preferential settlement of PGCs onto the germinal ridges of chicken em-bryos. Methods: Bustdfan (250 rig/egg) was injected into the egg white of freshly oviposited fertilized eggs, whichwere then incubated. Embryonic developnent and viability were examined, and exogenous PGCs collected from embry-onic blood vessels were injected into the germinal crescent region of recipient enthryos. The nttmber of PGCs residedonto germinal ridges of the right and left sides were compared. Results: Bustdfan had a slight harmful effect on theembryo viabihty and the PGCs proliferation. The number of PGCs resided onto the left side of germinal ridges wasslightly higher as compared with the right side. Conclusion: Busulfan suppressed the viability of embryos and the pro-liferation of endogenous PGCs in the recipient embryos. However, the number of exogenous PGCs proliferated washigher in embryos treated with busnlfan than those without busulfan. Data also suggest the possibihty of a preferentialresidence of PCCs toward the left side of the germinal crescent region as compared with the right, which may be due toa more advanced functional development of the left gonad than the right. (Asian JAndro11999 Dec; 1 : 187 - 190)     

马利兰和环磷酰胺预处理方案的非亲缘异基因骨髓移植治疗骨髓增生异常综合征

目的:评估以马利兰和环磷酰胺(Bu-CY2)为预处理方案的非亲缘异基因骨髓移植治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的临床疗效。方法:对6例MDS患者进行非亲缘异基因骨髓移植术,以Bu-CY2为预处理方案,Bu 4 m g.k-g 1.d-1,-7 d~-4 d,CY 60 m g.k-g 1.-d 1,-3 d~-2 d。输入单个核细胞数(MNC)为3.38×108/kg(2.4×108/kg~4.6×108/kg),CD 34+细胞数5.81×106/kg(1.2×106/kg~8.5×106/kg),粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)数2.88×105/kg(1.61×105/kg~4.56×105/kg)。以霉酚酸酯加环孢素A(C sA)和短程氨甲蝶呤(MTX)预防移植物抗宿主病,前列腺素E1脂质微球预防肝静脉阻塞病。结果:6例患者中性粒细胞≥0.5×109/L的中位时间为18 d(13~21 d),血小板≥20×109/L的中位时间为21 d(13~24 d)。经DNA短串联重复序列多态性分析和染色体检查,均为供者骨髓植活。早期死亡率为0,移植后随访时间为27个月(6~60个月)。目前实际无病生存6例,缓解期实际生存率100%。结论:以Bu-CY2为预处理方案的非亲缘异基因骨髓移植是治疗MDS的有效方法。     

比格犬体内环磷酰胺对白消安药动学及血清GST活性的影响

目的 研究比格犬体内环磷酰胺(cyclophosphamide，Cy)对白消安(busulfan，Bu)的药动学及谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase，GST)活性影响。方法 取3只比格犬进行双周期交叉试验，设置分组为对照组(单独静脉注射Bu 0.898 mg·kg^–1)和实验组(先连续4 d口服Cy 14.960 mg·kg^–1，然后静脉注射Bu 0.898 mg·kg^–1)，分别在0.083，0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，3，4，6，8 h于犬前肢静脉取血2 mL，分离血清，利用高效液相色谱法测定Bu浓度，采用非隔室模型计算药动学参数。利用紫外分光光度法测定并比较对照组和实验组的GST活性。结果 与对照组相比，实验组Bu的MRT减少了25.2%，AUC_0-t减少了44.5%，差异具有统计学意义(P<0.05)。GST活性测定结果表明，实验组各时间点的GST活性比对照组均有提高。结论 预先给予Cy后，GST活性提高，加快Bu消除，降低其血药浓度总体水平。     

白消安对U87胶质瘤干细胞增殖和自我更新的影响

目的探究白消安对 U87胶质瘤干细胞增殖和自我更新的影响。方法培养 U87胶质瘤干细胞,分为四组, A组加入 200 μL含 5%胎牛血清的 DMEM/F12培养基, B、C、D三组分别加入 200 μL含 20、50、100 μmol/L白消安的 DMEM/F12培养基。比较四组细胞增殖情况［四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法( MTT法)］、细胞凋亡情况［即 B细胞淋巴瘤 /白血病 -2(Bcl-2)、Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(Caspase-3)表达水平］,以及细胞周期。结果培养 24 h后,四组 U87胶质瘤干细胞吸光度比较差异无统计学意义( P＞0.05);培养 48 h、72 h后, B、C、D组 U87胶质瘤干细胞吸光度低于 A组( P＜0.05);培养 48 h、72 h后, B、C、D组 U87胶质瘤干细胞吸光度比较差异无统计学意义( P＞0.05)。 C组 U87胶质瘤干细胞 Bax、Caspase-3、 Bax/Bcl-2的吸光度值、阳性细胞表达率高于 A、B组,比较差异有统计学意义［吸光度值: CBax(0.38±0.01)比 ABax(0.46±0.04)、 BBax(0.41±0.01); CCaspase-3(0.45±0.02)比 ACaspase-3(0.54±0.01)、 BCaspase-3(0.47±0.02); CBax/Bcl-2(1.19±0.04)比 ABax/Bcl-2(1.36±0.01)、 BBax/Bcl-2(1.22±0.04);阳性细胞表达率: CBax(47.53±1.34)%比 ABax(39.81±4.02)%、BBax(39.51±1.37)%;CCaspase-3(65.17±2.34)%比 ACaspase-3(54.42±1.34)%、BCaspase-3(49.16±2.31)%;CBax/Bcl-2(60.24±4.10)%比 ABax/Bcl-2(35.47±1.20)%、BBax/Bcl-2(37.41±4.12)%;P＜0.05］; D组 U87胶质瘤干细胞 Caspase-3、Bax/Bcl-2的吸光度值、阳性细胞表达率高于 A、B组,比较差异有统计学意义［吸光度值: DBax(0.37±0.01)比 ABax(0.46±0.04)、 BBax(0.41±0.01); DCaspase-3(0.28±0.01)比 ACaspase-3(0.54±0.01)、 BCaspase-3(0.47±0.02); DBax/Bcl-2(0.97±0.02)比 ABax/Bcl-2(1.36±0.01)、 BBax/Bcl-2(1.22±0.04);阳性细胞表达率: DCaspase-3(68.06±1.09)%比 ACaspase-3(54.42±1.34)%、BCaspase-3(49.16±2.31)%;DBax/Bcl-2(65.10±2.15)%比 ABax/Bcl-2(35.47±1.20)%、BBax/Bcl-2(37.41±4.12)%;P＜0.05］。 A组、 D组处于 G1期细胞分别占8.20%、3.22%,处于 G2 /M期细胞分别占 16.07%、12.18%,两组比较差异有统计学意义( P＜0.05); A组、 D组处于 G0/G1期细胞分别占 52.27%、58.85%,处于 S期细胞分别占 23.36%、35.75%,两组比较差异无统计学意义( P＞0.05)。结论白消安可抑制 U87胶质瘤干细胞的增殖,促进其凋亡,并且呈现一定量效关系;机制可能与白消安上调 Bcl-2、Bax、Caspase-3表达有关。     

BMP-4在卵巢早衰小鼠卵巢中的变化

目的分析BMP-4在化疗后卵巢早衰(POF)小鼠卵巢中的表达,探索BMP-4与卵巢早衰卵巢中卵泡发育的关系,为卵巢早衰的发病机制及临床治疗的研究提供参考依据。方法选用48只4~5周龄具有正常动情周期的雌性昆明小鼠随机分为3组:POF组,腹腔注射环磷酰胺,皮下注射白消安建立卵巢早衰模型;对照组,腹腔注射0.9%的生理盐水;正常组。观察并记录小鼠的一般情况,应用HE染色、免疫组织化学技术和Western blot技术,观察卵巢形态学变化、各级卵泡数的变化及BMP-4的分布情况。结果 1POF组小鼠体重下降,卵巢体积缩小,HE染色显示卵泡数目减少,原始卵泡数目(15.44±2.16)与正常组(55.25±16.09)和对照组(53.37±18.11)相比明显减少(P0.05)。2免疫组化结果显示BMP-4在正常组卵巢和对照组卵巢中的表达比在POF组卵巢中的表达高。3免疫组化结果显示BMP-4在POF卵巢中的表达明显减少,其中原始卵泡(39.83±6.50)减少最为明显,与正常组(68.61±5.25)和对照组(66.72±6.26)相比差异有统计学意义(P0.05)。4Western blot结果显示POF卵巢中的BMP-4表达最低,约为正常组的0.6倍(P0.05)。结论 POF组的BMP-4表达降低明显,在原始卵泡中降低最为明显,推测其对原始卵泡的存活和发育及调控卵泡闭锁有促进作用。     

“马利兰+阿糖胞苷+环磷酰胺”预处理方案行外周血造血干细胞移植治疗白血病的疗效观察

目的探讨使用"马利兰+阿糖胞苷+环磷酰胺"(MAC)预处理方案行外周血造血干细胞移植(PBSCT)治疗白血病的临床疗效。方法对我院10例PBSCT治疗的急性白血病患者的临床资料进行分析,预处理采用MAC方案,临床观察药物的不良反应并评估造血重建速度及患者预后。结果 10例患者获得造血重建,未发生预处理相关死亡。移植后5～7d白细胞降为0,中性粒细胞绝对数>0.5×109/L的中位时间为11(8～12)d,无输注血小板计数>20×109/L的中位时间为13(12～13)d;本组平均随访36.8个月(3～100个月),其中3例(30%)患者移植后3个月左右复发。所有患者在移植过程中未出现严重不良反应。结论 MAC预处理方案其不良反应小,优于经典的全身照射/CY方案,且简便易行,抗白血病作用确实可靠,是治疗恶性血液病安全有效的方法。     

高效液相色谱-蒸发光散射法测定白消安片的含量

目的:建立HPLC-ELSD法考察并测定白消安片中白消安的含量。方法:SHIMADZU C8柱(250mm × 4．6min,5μm),流动相:水:乙腈(75:25),流速:1．0mL／min,载气:氮气,载气流速:2．0bar。结果:白消安在浓度0．25-0．75mg／mL范围内与峰面积的对数呈良好的线性关系,r为0．999 9。平均回收率为99．7％。结论:本方法专属性好,准确,可用于该制剂中白消安含量的测定。     

利用白消安致BALB/c小鼠生殖毒性建立NOA疾病模型

目的利用白消安对BALB/c雄性小鼠生殖毒性,建立不同损伤程度的NOA(non-obstructive azoospermia,NOA)动物模型。方法本研究取6~8周龄性成熟的BALB/c雄性小鼠共45只,随机分为3组:0 mg/kg组、30 mg/kg组、40 mg/kg组,每组15只。每2周观察并记录小鼠体重,睾丸和附睾湿重,睾丸体积,及生精细胞损伤程度。通过HE染色,判断生精细胞受损情况;通过免疫组化技术检测受损生精细胞停滞的减数分裂阶段,该法主要借助生精细胞减数分裂过程中的三个标记蛋白:STRA8(Stimulated by Retinoic Acid 8,STRA8)减数分裂启动标记蛋白,SCP3(Synaptonemal Complex Protein 3,SCP3)减数分裂中标记蛋白,TNP1(Transition Protein 1,TNP1)减数分裂后标记蛋白。结果注射白消安后小鼠存活良好,注射白消安2周时,生精细胞开始损伤,30 mg/kg组轻于40 mg/kg组;4周时,40 mg/kg组呈唯支持细胞样变化;6-10周时,生精功能开始恢复,30 mg/kg组恢复明显快于40 mg/kg组;40 mg/kg组STRA8、SCP3、TNP1表达在注射4周最低,第8周开始恢复到正常水平。结论白消安40 mg/kg组单次注射4周时,可建立为唯支持细胞型NOA生精障碍模型;单词注射4-8周期间,可建立损伤程度不同的NOA生精障碍模型,为睾丸组织体外培养提供稳定的研究组织。