王琦教授新冠肺炎预防方预防新型冠状病毒肺炎机制的网络药理学探讨＊

目的 借助网络药理学的方法，探究两组王琦教授新冠肺炎预防方（简称预防方）预防新型冠状病毒肺炎（COVID-19）的分子靶点和机制。方法 通过TCMSP数据库检索并筛选其活性成分及其作用靶点，通过Uniprot数据库进行蛋白标准化处理。从Genecards数据库中以“Novel coronavirus pneumonia”为关键词搜索获取COVID-19的靶标，构建相交靶点韦恩图。通过cytoscape3.7.2构建PPI蛋白互作网络，寻找富集数目最多的靶点。通过R语言对预防方治疗COVID-19的靶点进行GO和KEGG富集分析，并绘制气泡图。结果 预防方与新冠肺炎相关靶点涉IL-6、TNF、CXCL8、VEGFA、MMP9；GO功能富集分析分别获得53、57条通路；27、29条KEGG相关信号通路。结论 王琦教授新冠肺炎预防方中的主要活性成分为槲皮素、山奈酚、木犀草素、β-谷甾醇、植物甾醇等，可能通过作用于IL-6、TNF、CXCL8、VEGFA、MMP9、CXCL8、IL10、CCL2、IL1B等靶点和介导TNF信号通路、T细胞受体信号通路、Toll样受体信号通路等发挥作用，从而促进免疫反应、炎症反应及细菌防御反应，预防COVID-19。     

槲皮素通过抑制氧化应激改善3×Tg-AD小鼠的认知功能障碍＊

目的 探讨槲皮素（Quercetin，QT）对含有3个突变等位基因（PS1、APP、Tau）的纯合子小鼠（3×Tg-AD）的认知功能改善作用及其机制。方法 通过基因鉴定确定小鼠的基因型，将9月龄的3×Tg-AD小鼠和其同窝野生对照小鼠随机分为4组：野生型组（wildtype，WT）、野生型 + QT组（WT + QT）、模型组（3×Tg-AD）和模型小鼠 + QT组（3×Tg-AD + QT），每组8只。WT + QT组和3×Tg-AD + QT组的小鼠灌胃给予QT 15 mg/kg/天，WT组和3×Tg-AD组的小鼠灌胃给予等体积溶剂，共治疗8周。第7周进行水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力。采用ELISA法检测小鼠脑组织中的肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α）、白介素-1β（interleukin-1β）和小鼠血清中谷胱甘肽-过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）的含量；试剂盒检测小鼠血清中丙二醛（malondialdehyde，MDA）和总超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的含量以及脑组织中一氧化氮（nitric oxide，NO）的含量；Western blot检测脑组织中核转录因子E2相关因子2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1的表达水平。结果 3×Tg-AD组小鼠存在明显的认知功能障碍；而3×Tg-AD + QT组小鼠的学习记忆能力明显提高（P < 0.05）。另外，3×Tg-AD组血清中MDA水平较WT组升高，SOD与GSH-Px水平较WT组下降；3×Tg-AD + QT组小鼠血清中MDA水平下降，SOD和GSH-Px水平则升高。3×Tg-AD组小鼠脑组织中的NO、TNF-α、IL-1β水平明显升高；3×Tg-AD + QT组小鼠脑组织中的炎症因子水平均明显降低（P < 0.05）。3×Tg-AD组小鼠脑组织中的Nrf2表达降低，Keap1表达升高；3×Tg-AD + QT组中，Nrf2表达上调，Keap1表达下调（P < 0.05）。结论 QT可能通过抑制炎症因子和MDA，Keap1的水平，上调SOD，GSH-Px，Nrf2的表达，发挥改善3×Tg-AD小鼠学习记忆能力的作用。     

槲皮素通过TGF β1/Smad3信号通路改善慢性心衰大鼠心肌纤维化

目的观察槲皮素对慢性心力衰竭大鼠心功能的改善作用,探讨TGF β1/Smad3信号通路在其中的作用机制。方法 SD大鼠45只,采用随机数字表法将大鼠随机分为假手术组(Sham组)、心力衰竭模型组(CHF组)和槲皮素干预组(Qu组);采用腹主动脉缩窄法建立压力负荷型慢性心力衰竭大鼠模型,Qu组予以槲皮素100mg/kg灌胃,余组予以等量生理盐水,连续给药8w,超声心动图观察各组大鼠心脏结构参数,HE染色、Masson染色观察各组大鼠心脏组织病理学变化,Western blot、qPCR法检测心脏组织中TGF β1/Smad3信号通路相关因子collagen I、collagenIII、TGF-β1、smad3、p-smad3表达情况。结果槲皮素可以改善心衰大鼠心功能,大鼠LVDD、LVDS明显降低,LVEF、LVFS明显升高,Qu组大鼠心肌细胞肿胀明显改善,排列较规则,结构较完整,仅见少量炎性细胞浸润及胶原纤维蛋白沉积,纤维化程度明显减轻。同时,槲皮素可下调心衰大鼠心脏心脏组织中TGF-β1、Smad3、p-smad3、collagen I、collagen III表达水平。结论槲皮素明显改善慢性心力衰竭大鼠的心功能,减轻大鼠心室重构及心肌细胞损伤,与调控TGF β1/Smad3信号通路相关。     

左旋肉碱修饰的壳聚糖-硬脂酸协载槲皮素口服紫杉醇纳米胶束的制备、表征及在体肠循环研究

目的 制备左旋肉碱修饰的壳聚糖-硬脂酸（LC-SA/CS-SA）纳米胶束，包载紫杉醇（PTX）且协载槲皮素，考察胶束特性，并以大鼠在体肠循环评估给药系统对PTX口服吸收的促进作用。方法 将硬脂酸（SA）通过酰胺化反应接枝于壳聚糖（CS），形成共聚物CS-SA；采用核磁共振H谱、红外光谱鉴定产物结构；以PTX为主药，槲皮素为辅药，采用激光粒径分析、Zeta电位分析和HPLC分析分别考察了胶束的粒径、Zeta电位、载药量、包封率；透射电子显微镜观察胶束形貌；芘荧光探针法测定LC-SA/CS-SA胶束的临界胶束浓度（critical micelle concentration，CMC）；透析袋法考察胶束的体外释放行为；大鼠在体肠吸收实验评估载药胶束的促吸收作用。结果 红外与核磁结果表明SA通过酰胺键接枝于CS；协载槲皮素的LC-SA/CS-SA载PTX胶束呈类球形，粒径为（148.3±1.7）nm，多分散系数（PDI）为0.16±0.07，Zeta电位为（24.600±0.167）mV，CMC为14.31 μg/mL；体外释放结果表明，与市售紫杉醇注射剂相比，协载槲皮素的LC-SA/CS-SA载PTX胶束、LC-SA/CS-SA载PTX胶束具有明显缓释效应；大鼠在体肠吸收实验表明，协载槲皮素的LC-SA/CS-SA胶束对载药PTX的胃肠吸收具有显著促进作用。结论 构建的协载槲皮素的LC-SA/CS-SA载PTX胶束性能优良，促进了PTX的大鼠肠吸收，具有增强药物口服吸收潜力。     

黄蜀葵和秋葵不同部位黄酮类成分含量测定方法研究

目的:建立高效液相色谱法同时测定黄蜀葵(花、种子)、秋葵(花、种子、果实)中金丝桃苷、杨梅素、槲皮素的含量。方法:黄蜀葵花采用Inertsil?…ODS-3(4.6mm×250mm,5μm),流动相乙腈-0.4%磷酸溶液(28∶72),检测波长360nm,流速1mL/min,柱温30℃,进样量4μL;黄蜀葵种子、秋葵采用Inertsil?…ODS-3…(4.6mm×250mm,5μm),流动相乙腈-0.4%磷酸溶液,梯度洗脱(0～30…min…23∶77;30～35…min…27∶73),检测波长360nm,流速1mL/min,柱温30℃,进样量10μL。结果:黄蜀葵花中含有金丝桃苷1.27%、杨梅素0.041%、槲皮素0.019…7%;秋葵花中含有金丝桃苷0.131%、槲皮素0.001…5%。黄蜀葵种子含有金丝桃苷0.000…52%、槲皮素0.000…72%,秋葵种子含有金丝桃苷0.000…25%、槲皮素0.000…51%。而秋葵果实含有金丝桃苷为0.000…41%。结论:该方法结果准确,灵敏度高,重现性好,优化了《中国药典》中黄蜀葵花的含量测定方法,能够对黄蜀葵和秋葵不同部位中金丝桃苷、杨梅素、槲皮素的含量进行检测分析。     

枳实薤白桂枝汤HPLC指纹图谱及10种指标成分含量测定研究

目的建立枳实薤白桂枝汤HPLC指纹图谱分析方法和复方中10种指标成分(辛弗林、槲皮素、桂皮酸、厚朴酚、柚皮苷、腺苷、香豆素、橙皮苷、和厚朴酚、新橙皮苷)含量测定方法,开展相关评价分析。方法采用HPLC法建立枳实薤白桂枝汤指纹图谱,开展相似度评价研究;测定复方中10个指标成分,分析复方中药材不同配伍对其量的变化影响;采用聚类分析等化学计量学方法,对获取相关数据进行分析,评价枳实薤白桂枝汤的质量控制相关指标的影响和价值。结果 10批样品的相似度在0.376～0.990,部分批次相似度大于0.9(5批),说明10批样品相似度差异较大。10批样品中S1～S3、S5、S6、S8、S10为一组,S4、S9为一组,S7单独为一组。共标定了30个特征峰,经主成分分析,主成分1～6是影响药材样品质量评价的主要因子;30个特征峰中对样品分组起关键作用的成分为21(新橙皮苷)、26、29(和厚朴酚)、3、23、17、30(厚朴酚)、5、24(香豆素)、28和7。含量测定结果显示,除槲皮素外,其余9种成分在测定的质量浓度范围内线性关系、精密度、稳定性和重复性良好;不同配伍会对药材中相关成分产生增加或抑制溶出的作用。结论所建立的HPLC方法可用于同时测定枳实薤白桂枝汤中10种化学成分的含量,该方法高效、准确、重复性好,可用于枳实薤白桂枝汤的质量控制和评价。     

基于网络药理学和分子对接技术的抗病毒颗粒治疗新型冠状病毒肺炎（COVID-19）的潜在物质基础研究

目的通过网络药理学及分子对接技术探寻抗病毒颗粒治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的潜在物质基础。方法借助TCMSP检索抗病毒颗粒中板蓝根、连翘、石膏、知母、芦根、地黄、广藿香、石菖蒲、郁金的化学成分和作用靶点。通过Uni Prot数据库查询靶点对应的基因,进而运用Cytoscape3.6.1构建药材-化合物-靶点(基因)网络,通过DAVID进行基因本体(GO)功能富集分析和KEGG通路富集分析,预测其作用机制,将药材-化合物-靶点网络中排名前15的成分与新型冠状病毒(SARS-Co V-2)3CL水解酶进行分子对接,同时将比枯枯灵、木犀草素、槲皮素与血管紧张素转化酶Ⅱ(ACE2)进行分子对接。结果药材-化合物-靶点(基因)网络包含药材8个、化合物75个、靶点255个。GO功能富集分析得到GO条目161个(P0.05),其中生物过程(BP)条目65个,细胞组成(CC)条目36个,分子功能(MF)条目60个。KEGG通路富集筛选得到131条信号通路(P0.05)。分子对接结果显示抗病毒颗粒中比枯枯灵、木犀草素、槲皮素等核心活性化合物与SARS-Co V-23CL水解酶的亲和力与临床推荐化学药相似。结论抗病毒颗粒中的活性化合物比枯枯灵、木犀草素、槲皮素等能通过与ACE2结合作用于PTGS2、HSP90AB1、PTGS1等靶点调节多条信号通路,从而可能发挥对COVID-19的治疗作用。     

槲皮素对SW620细胞迁移和侵袭的影响

目的探索槲皮素对结直肠癌细胞SW620迁移和侵袭的影响。方法不同浓度(0、25、50、100μmol/L)槲皮素处理SW620细胞后,MTT法检测细胞存活率,Transwell法检测细胞迁移和侵袭,RT-PCR、Western blot分别检测STAT3 mRNA、蛋白表达。结果槲皮素呈剂量和时间依赖性地降低SW620细胞存活率、STAT3 mRNA表达。最佳浓度、处理时间分别为50μmol/L、48 h,细胞迁移和侵袭显著降低(P<0.05)。敲低STAT3,SW620细胞存活率、迁移和侵袭数目明显减少(P<0.05)。STAT3过表达显著逆转槲皮素对细胞存活率、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论槲皮素可通过调控STAT3表达来抑制SW620细胞迁移和侵袭。     

异烟肼通过ROS/Caspase-3信号通路诱导L-02细胞凋亡及槲皮素的保护作用

目的：探讨ROS/Caspase-3信号通路在异烟肼（INH）诱导人正常肝细胞（L-02细胞）凋亡中的作用及槲皮素的保护效应。方法：将L-02细胞随机分为对照组、INH组（10 mmol/L INH）、25 μmol/L槲皮素组（10 mmol/L INH和25 μmol/L槲皮素）、50 μmol/L槲皮素组（10 mmol/L INH和50 μmol/L槲皮素）。各组均处理24 h后，应用MTT法检测L-02细胞存活率，分光光度法检测细胞上清液中LDH活性，Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡率；制备L-02细胞线粒体，利用DCFH-DA和Rho-123荧光探针检测活性氧（ROS）水平及线粒体膜电位（△Ψm），应用Western blot检测Caspase-3蛋白的表达。结果：与对照组比较，INH组细胞存活率显著降低（P < 0.01），与INH组比较，50 μmol/L槲皮素处理组细胞存活率明显增加（P < 0.01）；INH组细胞LDH活性、细胞凋亡率、线粒体ROS水平较对照组显著升高（P < 0.01），25和50 μmol/L槲皮素组细胞LDH活力、细胞凋亡率、线粒体ROS水平较INH组明显降低（P < 0.05或P < 0.01），且50 μmol/L槲皮素组作用更显著；INH组细胞线粒体△Ψm较对照组显著降低（P < 0.01），25和50 μmol/L槲皮素组细胞线粒体△Ψm较INH组明显升高（P < 0.05或P < 0.01），50 μmol/L槲皮素组的作用更加明显；与对照组比较，INH组细胞Caspase-3蛋白表达显著增加（P < 0.01），与INH组比较，25和50 μmol/L槲皮素组细胞Caspase-3蛋白表达明显减少（P < 0.05或P < 0.01），且50 μmol/L槲皮素组作用更明显。结论：INH可以诱导L-02细胞发生凋亡，ROS/Caspase-3信号通路参与了其凋亡的过程；槲皮素对INH诱导的细胞凋亡具有保护效应，机制可能与其减少ROS释放，抑制ROS/Caspase-3信号通路有关。     

槲皮素对脑出血大鼠神经细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白表达的作用研究

目的通过观察大鼠脑出血后神经细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白表达的动态变化及槲皮素的干预作用,探讨槲皮素可能的神经保护作用及机制。方法以雄性健康SD大鼠通过自体血注入法制备大鼠脑出血模型,并随机分为假手术组、脑出血模型组、槲皮素低剂量组、槲皮素高剂量组,共4组,每组30只;槲皮素低剂量组和槲皮素高剂量组分别给予槲皮素10、50 mg/(kg·d)腹腔内注射,假手术组和脑出血模型组给予同等体积生理盐水腹腔内注射,每日1次,连续7 d;各组大鼠分别在术后第6小时、1天、2天、3天、7天通过前肢放置试验评分法评估神经功能缺损,采用TUNEL法检测血肿周围神经细胞凋亡,采用Western blot法检测血肿周围Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果与模型组比较,槲皮素低剂量组在脑出血后第3天、7天及槲皮素高剂量组在第2天、3天、7天的前肢放置试验评分和Bcl-2蛋白表达均明显增加(P<0.01);与模型组比较,槲皮素低剂量组在第3天、7天及槲皮素高剂量组在第1天、2天、3天、7天的神经细胞凋亡率和Bax蛋白表达均明显降低(P<0.01)。结论槲皮素能减轻脑出血后神经功能损伤,其机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,从而减少神经细胞凋亡有关。