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2.
目的 刺五加三萜皂苷是我国传统中药刺五加的主要活性成分之一,具有抗炎、抗癌、抗疲劳、抗氧化等多种功效。但由于刺五加自然资源缺乏,难以满足对三萜皂苷的需求,急需寻求可持续资源利用新模式。目前,生物合成已成为植物次生代谢物积累的重要途径,为此,探寻出刺五加三萜皂苷的生物合成途径具有重要意义。方法 本文通过同源搜索和系统发育分析,预测并克隆了刺五加三萜皂苷合成途径中关键基因EsOSC5,并通过农杆菌介导的烟草瞬时表达实验,获得代谢产物;利用GC-MS检测其次生代谢产物并确定EsOSC5基因功能。结果 挖掘并克隆出片段大小为2286 bp的EsOSC5基因;EsOSC5基因转化烟草的瞬时表达实验及GC-MS次生代谢产物检测数据表明,β-香树脂醇为该基因的代谢产物。结论 EsOSC5基因可促进刺五加β-香树脂醇(三萜皂苷前体)的合成积累,该基因为刺五加β-香树脂醇合酶基因。 相似文献
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目的:探究铜绿假单胞菌Ⅵ型分泌系统VgrG1a蛋白的原核表达方法,并制备鼠源性和人鼠嵌合型单克隆抗体为抗铜绿假单胞菌感染提供了研究基础。方法:根据NCBI网站上查找到的VgrG1a序列合成重组质粒pET-21a-VgrG1a,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)plysS进行诱导。通过免疫沉淀法和酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对诱导得到的重组蛋白进行表达、纯化和鉴定。用纯化后的VgrG1a重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠源多克隆抗体,并利用ELISA方法测定小鼠血清抗体的效价和特异性。通过P3X63Ag8.653骨髓瘤细胞融合小鼠脾细胞制备杂交瘤细胞,再通过有限稀释法获得单克隆细胞。经多次ELISA筛选出能够稳定产出特异性抗体的细胞株。在公司测序后获得单克隆抗体的序列信息,并设计出含有此抗体的质粒,转染Expi293细胞,制备人源化单克隆抗体。结果:结果显示,实验成功构建了VgrG1a重组质粒,经探索在最佳表达诱导条件下(温度16℃,IPTG浓度0.5mM,诱导时间16小时),表达得到了重组蛋白VgrG1a,SDS-PAGE显示72kDa处重组蛋白浓度最高。检测制备的鼠源抗体在稀释到1/640000后效价仍较高,并且与目的蛋白能够能特异性的识别并结合。人鼠嵌合型单克隆抗体8A4F5对抗原VgrG1a亲和力高于鼠源单克隆抗体。结论:以上结果表明,该原核表达的重组蛋白具有良好的免疫原性,利用表达的重组蛋白制备的单克隆抗体具有较高的抗体效价和特异性,为进一步研究蛋白的结构与功能、研制相关的诊断试剂及疫苗提供了生物材料。 相似文献
5.
目的:探讨Notch3/Hes-1/p27Kip1信号通路与低氧性肺动脉高压大鼠肺血管重构的关系及三七总皂苷(PNS)的干预作用。方法:将SPF级雄性SD大鼠采用随机编号分为3组:正常组(C组),低氧组(H组)和PNS组(P组),检测肺动脉压,称量右心室重量,HE染色和Masson染色观察肺血管重构情况,RT-qPCR检测大鼠肺组织中Notch3、Hes-1和p27Kip1的mRNA表达水平,Western blot检测大鼠肺组织中Notch3、Hes-1、p27Kip1,增殖细胞核抗原(PCNA)和caspase-3的蛋白水平。结果:与C组相比,H组大鼠的肺动脉压和右心室肥厚指数明显增加;肺血管重构现象明显;Notch3、Hes-1和PCNA的蛋白水平增加,p27Kip1和caspase-3的蛋白水平降低;Notch3和Hes-1的mRNA表达增加,p27Kip1的mRNA表达降低(P<0.05)。经PNS干预后,与H组相比,P组大鼠的肺动脉压和右心室肥厚指数降低;肺血... 相似文献
6.
重楼是我国传统的名贵中药,七叶一枝花为历版《中国药典》收载的重楼药材两个基原植物之一,具有清热解毒、消肿止痛、活血化瘀等功效,其主要活性成分为甾体皂苷类物质。由于重楼市场需求量剧增和七叶一枝花成药时间较长,导致大量依靠人工种植。然而,人工种植过程中产地、采收年限和采收月份都会影响七叶一枝花的甾体皂苷含量。本文系统地总结了七叶一枝花中主要活性成分甾体皂苷的种类,以及不同产地、不同生长年限及不同采收月份的七叶一枝花根茎中甾体皂苷含量差异的研究现状,以期为进一步研究七叶一枝花品质差异、野生资源驯化及规范化种植提供参考。 相似文献
7.
目的 探讨绞股蓝皂苷对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞损伤的保护作用及其机制。方法 LPS处理PC12细胞建立神经元炎性损伤模型;实时定量PCR检测炎性因子表达,CCK-8法检测细胞活力,蛋白印迹检测NF-κB蛋白。结果 不同剂量(0、100、300和1 000 ng/mL)的LPS刺激PC12细胞12 h后,TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA水平随剂量的增加而逐渐升高。LPS导致细胞活力下降到85.7%,不同浓度绞股蓝皂苷(30, 100μg/mL)预处理细胞6 h后,30和100μg/mL绞股蓝皂苷能够使细胞活力分别恢复至96.2%和97.9%。绞股蓝皂苷预处理后,LPS诱导的TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平升高都受到不同程度的抑制。LPS刺激导致NF-κB通路信号蛋白p65的磷酸化(p-p65)水平上调,但绞股蓝皂苷预处理能够使升高的p-p65下调。结论 绞股蓝皂苷通过抑制NF-κB信号通路减轻LPS诱导的PC12细胞炎性反应,从而起到保护神经元损伤的作用。 相似文献
8.
目的建立HPLC法同时测定复方川参胶囊(川芎、人参、红花等)中羟基红花黄色素A、细叶远志皂苷、阿魏酸、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2的含量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Intersil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-水(含1.0 g/L磷酸),梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;柱温35℃;检测波长203、321 nm。结果各成分在各组范围内线性关系良好(R2≥0.9995),平均加样回收率96.00%~100.00%,RSD小于2%。结论该方法重复性好,专属性强,稳定可靠,可用于复方川参胶囊的质量控制。 相似文献
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10.
目的观察加味济川煎对慢传输型便秘(STC)患者MTL、SP、VIP表达影响,探讨加味济川煎治疗STC的机制,为临床提供疗效依据。方法选取2019年1月—2019年7月井冈山大学附属医院肛肠科就诊的STC患者,采用随机数字表法分为2组,治疗组(加味济川煎)30例和对照组(莫沙必利片口服)30例,2组均以1周为1个疗程,共2个疗程,对比2组患者治疗后的临床疗效,首次排便时间,便秘症状评分及粪便性状评分,采用ELISA测定2组患者胃动素(MTL)、P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)在0、7、14 d后的表达水平,并记录不良反应。结果疗程结束后,治疗组总有效率高于对照组;治疗组首次排便时间明显短于对照组(P<0.05);与治疗前比较,2组患者治疗后CCS评分明显降低(P<0.05),与对照组相比,治疗组粪便性状有明显改善(P<0.05);与对照组同时间点相比,治疗组MTL、SP表达水平升高,VIP降低(P<0.05)。结论加味济川煎能明显改善STC患者症状,其机制可能与调节MTL、SP、VIP的表达水平相关。 相似文献