嵌合抗原受体T细胞与病毒相关的应用进展

嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell, CAR-T)疗法是近年来新兴的细胞免疫疗法，它通过基因工程技术使T细胞表达特异性嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor, CAR),以非MHC依赖形式识别并杀伤表达相应抗原的靶细胞。CAR-T疗法在血液系统恶性肿瘤的治疗中取得了令人振奋的结果，但在实体瘤治疗领域仍然存在很多困难。溶瘤病毒可直接裂解实体瘤细胞，逆转肿瘤局部的免疫抑制微环境，与CAR-T疗法联用可以增强抗实体瘤效果。此外，CAR-T疗法也显示出一定的抗病毒作用，主要表现在抗人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)、HBV等方面。文章从CAR-T与病毒的关系入手，主要就CAR-T疗法抗病毒的研究现状及溶瘤病毒与CAR-T疗法联合抗实体瘤机制等方面展开综述，以期为拓宽CAR-T抗病毒治疗领域以及CAR-T的联合治疗方案制定提供新思路。     

重组沙门氏菌VNP20009-M对骨肉瘤的治疗作用

目的 研究携带甲硫氨酸酶基因的减毒沙门氏菌VNP20009-M对骨肉瘤的治疗作用及其机制。方法 将重组沙门氏菌VNP20009-M与骨肉瘤细胞MNNG-HOS共培养；骨肉瘤细胞MNNGHOS、U2OS及SaoS-2均高表达甲硫氨酸酶基因后探索细胞增殖、迁移及凋亡能力的变化；构建MNNG-HOS裸鼠皮下荷瘤模型，评价不同剂量的VNP20009-M在动物模型中的治疗效果。结果 通过质粒PCR验证甲硫氨酸酶基因只存在于目的菌株VNP20009-M中，且具有较高的甲硫氨酸酶活性，重组沙门氏菌构建成功。VNP20009-M显著诱导骨肉瘤细胞MNNG-HOS的凋亡。相比对照组，甲硫氨酸酶基因过表达的骨肉瘤细胞增殖、迁移能力被显著抑制。VNP20009-M治疗后小鼠皮下肿瘤生长被显著抑制。结论 VNP20009-M可诱导骨肉瘤细胞凋亡并抑制癌细胞增殖和迁移，可以作为一种新型高效的药物为临床提供新的治疗方式。     

淡豆豉的发酵工艺沿革及过程控制概述

通过查阅古籍及现代文献，对淡豆豉的历史演变、古今发酵工艺对比和关键环节控制进行了系统的梳理，分析并总结了淡豆豉的品质影响因素及其控制方法，以期为淡豆豉质量控制研究提供参考依据。经分析后发现，在淡豆豉的发酵过程中，发酵菌种、杂菌、温度和湿度等均为影响其品质的重要因素，“后酵”过程的条件控制更是被历代本草重点关注。此外，古代认可的“香美之豉”是以霉菌为优势菌发酵而成，发酵霉菌的选育和使用应是解决淡豆豉品质问题的要点。因此，基于历代本草所载 “香”和“美”的评价指标深入研究和优化菌种、温度、湿度等工艺条件对提高淡豆豉的品质具有重要意义。     

基因工程课程内容的更新与教学方法的反思

基因工程课程是生物工程、生物技术和生物制药等专业的必修课,包括基因操作原理与基因工程实践两部分内容。它为分子生物学研究提供技术支持,为工程应用提供理论指导。随着DNA合成与测序技术的发展以及新型DNA组装与编辑技术的兴起,基因工程的概念持续升级,基因工程的课程内容和教学方法都需要进行相应的更新与改革。本文就此内容展开论述。     

基因工程与组织工程联合应用在牙周组织再生的研究进展

组织工程应用于牙周组织缺损修复为牙周病的治疗开辟了一条新路。基因治疗是一种崭新而具有广阔前景的方法,与传统的细胞因子导入治疗相比,它可在一定时期内使局部保持一定的生长因子浓度,更有利于骨缺损的修复。两者的联合运用在牙周治疗中有着强大发展潜力。     

合格伦综合征基因工程动物模型的研究

本文围绕两大类基因工程动物模型即转基因动物模型和基因敲除动物模型，对近年来有关舍格伦综合征基因工程动物模型的研究进展作一综述。     

舍格伦综合征基因工程动物模型的研究

本文围绕两大类基因工程动物模型即转基因动物模型和基因敲除动物模型，对近年来有关舍格伦综合征基因工程动物模型的研究进展作一综述。     

人源化动物模型的研究进展

实验动物为医学研究不断提供新模型、新技术、新方法.而伴随着实验技术与仪器的发展,原本孤立的学科也交叉融合,基因研究在动物中的实践诞生了基因工程动物.为了更好地模拟人类的性状,产生了人源化动物模型.本文旨在介绍当前几种主流的基因工程动物,以及人源化动物模型的研究进展.     

应用AdEasy腺病毒载体系统构建鼠白细胞介素10基因重组腺病毒

目的:AdEasy系统可在原核细胞E.coli BJ5183中完成穿梭质粒与骨架质粒之间的高效同源重组,经抗生素培养板筛选重组体,然后转染293细胞获得重组病毒,极大简化了载体的构建过程.实验利用AdEasy腺病毒载体系统构建鼠白细胞介素10基因重组腺病毒.方法:实验于2006-08/2007-05在青岛大学医学院病毒学实验室完成.①实验材料:清洁级SD大鼠5只,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,骨架质粒pAdeasy-1,大肠杆菌BJ5183和DH10B,人胚肾293细胞均由青岛大学医学院微生物教研室罗兵教授惠赠.②实验方法:从脂多糖刺激培养的大鼠脾细胞中提取细胞总RNA,应用反转录多聚酶链反应技术扩增白细胞介素10 cDNA,定向亚克隆至pAdtrack-CMV中构建腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-IL-10,酶切线性化后转化到含腺病毒骨架质粒pAdEasy的BJ5183大肠杆菌中,获得重组腺病毒质粒pAd-IL-10,Lipofectamin包装转染293细胞,获得重组腺病毒vAd-IL-10,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达.将293细胞接种于96孔板中,每孔1×104个细胞,浓缩后的病毒贮存液按不同比例稀释加至培养板中,测定重组腺病毒滴度.用重组腺病毒vAd-IL-10感染293细胞3 d后,以TRIzol一步法提取细胞总RNA,所获RNA加入DNaseⅠ消化处理可能污染的DNA后,PCR产物行琼脂糖电泳检测白细胞介素10 mRNA的表达.结果:①重组腺病毒的包装及滴度测定:经限制性内切酶转染293细胞16 h后,荧光显微镜观察到细胞中有GFP荧光,可间接反映目的基因的表达.将病毒上清反复感染293细胞扩增重组腺病毒,通常传至第4～5代于接种病毒后24～48 h,几乎可观察到所有细胞出现荧光,此时收获病毒,重组病毒命名为vAd-IL-10.vAd-IL-10滴度为5.5×108 pfu/mL,vAd-GFP滴度为9.0×108 pfu/mL.②目的基因RT-PCR产物的鉴定:提取重组腺病毒感染293细胞总RNA,RT-PCR扩增后琼脂糖电泳显示特异性580 bp预计大小的片段,表明该重组腺病毒可在293细胞中有效转录.结论:利用AdEasy腺病毒载体系统成功构建了携带白细胞介素10基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度的重组腺病毒vAd-IL-10,可在293细胞中有效转录.     

高新技术在医学领域的应用

就21世纪高新技术在医学领域的应用情况作一阐述。