应用噬菌体控制假单胞菌的研究进展

假单胞菌属细菌中的部分菌株是动植物和人类的致病菌，也是食品的腐败菌，会导致动植物和人类的高死亡率和严重的食品安全事故。噬菌体作为一种细菌性病毒，特异性高、自我增殖快且无副作用。这些特性使其成为了解决细菌性问题的新思路和新方法。本文就利用噬菌体防控假单胞菌属致病菌和腐败菌在食品、水产、植物、医疗等方面的研究和应用进行综述，以便为后期的深入研究提供一定的参考。     

沙眼衣原体持续感染的研究进展

沙眼衣原体持续感染是指衣原体在不利生长的条件下,为逃逸宿主的免疫防御产生的一种可逆状态。临床治疗实践、对未加工的rRNA检测和基因分型等方法证实持续感染存在于体内。体外研究发现与病毒共同感染、细胞因子、营养缺陷、抗生素效应诱发持续感染。抗生素联合治疗、抗生素联合色氨酸治疗、疫苗和噬菌体有利于CT的清除。     

寻找受体分子研究方法的进展

配体与受体间的识别及相互作用是分子发挥其功能的重要途径,具有重要的生物学意义。但是,寻找某一分子的受体并不容易,往往成为研究的瓶颈所在。目前寻找及验证某一对配体/受体分子及其对应关系的方法有很多,包括免疫共沉淀、噬菌体展示、酵母双杂交、分子模拟、谷胱甘肽巯基转移酶pull-down、串联亲和纯化等。该文对这些方法的基本原理、简要步骤及优缺点进行综述,为相关研究提供依据。     

人源性阿尔茨海默病噬菌体单链抗体库的构建

目的构建人源性阿尔茨海默病(AD)噬菌体单链抗体(scFv)库,为筛选β淀粉样蛋白(Aβ1-42)的人源性特异性抗体奠定基础。方法采集18例AD患者的外周血40ml,提取总RNA,应用RT-PCR法得到人抗体可变区重链(VH)和可变区轻链(VL)基因。将VH和VL由连接肽连接得到scFv片段,将所得片段双酶切后,克隆至pCANTAB5E噬菌体载体,大肠埃希菌TG1感受态细胞经电击转化,辅助噬菌体M13K07拯救后构建scFv型噬菌体抗体库。结果总RNA经逆转录PCR扩增VH和VL可变区基因的凝胶电泳显示,PCR产物长度分别为360bp和300bp,其连接形成的scFv片段长度为750bp,最终构建了库容为2.4×109的scFv库。BstNⅠ酶切鉴定构建的scFv库,经凝胶电泳可见,酶切片段长度差异性大,显示scFv库具有良好的多样性。结论成功构建人源性AD噬菌体scFv库,为进一步筛选Aβ特异性抗体,继而为AD的治疗研究奠定基础。     

噬菌体裂解法快速检测结核分枝杆菌

我们自2003年1月起采用结核分枝杆菌噬菌体裂解法快速检测肺结核患者痰液标本中的结核分枝杆菌,结果报告如下。     

噬菌体文库与计算机模拟筛选H1N1 流感病毒血凝素结合位点的比较

目的:对H1N1 流感病毒血凝素HA 的抗原表位初步筛选。方法:用噬菌体展示文库对2 株抗体的结合位点进行筛选,将筛选的抗原位点结合HA 序列进行多肽合成,免疫小鼠制备单克隆抗体,通过分子生物学手段对4 株抗体的轻链和重链可变区基因进行调取,通过计算机模拟抗体序列结合的抗原的结构域,推测抗体结合的氨基酸位点。结果:噬菌体文库筛选得出抗体的结合序列富含组氨酸和精氨酸,将针对多肽的单克隆抗体的序列和前期获得的2 株抗HA 单克隆抗体的序列比对分析,发现A1-8 和anti-14p 结合的HA 抗原序列相一致,H1-13 和anti-11p 结合的HA 抗原序列相一致。结论:通过将噬菌体展示文库技术和计算机模拟预测抗原抗体结合,可以有效筛选抗原表位,为流感病毒HA 抗原表位预测方法的完善提供理论基础。     

几种结核杆菌检测方法在结核病中的诊断价值

结核病是一种较严重的传染病,目前的疫情呈上升趋势.结核病的实验室诊断是发现传染源的主要途径和手段,是确定结核病诊断和化疗方案的重要依据,也是考核疗效、评价治疗效果的可靠标准.痰中结核杆菌的检测方法常规采用痰涂片及痰培养.涂片虽简单易行,但阳性率低,培养虽为金标准,但周期太长,均难以满足临床需要.近年来,一些针对结核分支杆菌检测的新方法陆续报道.本文对聚合酶链反应（PCR）法、噬菌体裂解法、PCR-斑点杂交法,几种结核分支杆菌检测方法的应用进行评价.     

产毒大肠杆菌肠毒素质粒(Entg::Tn5)的转导实验研究

我们利用1株带有Km抗性基因的产毒大肠杆菌E·colikl2W1485(Ent::Tn5)作为P1增殖菌制备P1(LT)裂解液,11株分属E、coli、E1EC、S.dysentery、S、sonnei、S.boydii、Proteus菌株作为受体菌,进行试管内转导试验。结果表明11株受体菌中有9株发生质粒完全和部分转导,分别呈表型K_m~+LT~+和K_m~+LT~-。选c600/P1(LT)转导子进行质粒电泳检测,发现K_m~+LT~+转导子出现同P1(LT)增殖菌E、colikl2相同的质粒带,而K_m~+LT~-未出现质粒带。我们再从11株受体菌中选用7株进行兔肠内转导实验,结果发现有3株受体菌所在肠段明显肿胀;而另4株虽不能引起肠段肿胀,但也可分离出转导子。同时,选用10株受体菌进行小白鼠灌胃质粒转导实验,其中4组可分离出转导子。 试管内转导子保留半年后,除1株K_m~+LT~+转导子失去质粒外,其它均保留其原表型。说明转导子稳定性良好。据上述结果提示Ent质粒和R质粒可通过转导在自然界传播。