苓桂术甘汤中多糖结构组成及其抗氧化活性考察

目的:研究苓桂术甘汤中多糖的结构,包括单糖组成以及官能团检测,并对其抗氧化能力进行评估,为体外生物测定法运用于苓桂术甘汤的质量评价提供基础。方法:利用高效凝胶色谱对全方多糖分子量进行研究;进一步采用气相色谱-质谱(GC-MS)柱前衍生化法及红外光谱扫描分析全方多糖结构组成;采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)及羟基自由基测定全方粗多糖及精多糖的抗氧化能力。结果:全方多糖由单一峰组成,且相对分子质量为3 689 Da,主要由阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、果糖组成,摩尔比为6. 85∶1. 00∶109. 21∶1. 04∶21. 82,其中葡萄糖和果糖为主要组成成分;红外结果显示聚糖结构中存在吡喃糖及糖醛酸,并且糖苷键存在2种立体异构(α-糖苷键及β-糖苷键);抗氧化研究发现全方多糖有一定清除DPPH自由基及羟基自由基的能力,粗多糖的活性优于精多糖。进一步采用LC-Q-TOF-MS对粗多糖中的其他成分进行定性分析,提示这与甘草中五环三萜类成分的吸附有关。结论:苓桂术甘汤中多糖及五环三萜类物质均是苓桂术甘汤抗氧化作用的物质基础,利用体外生物测定法测定抗氧化活性可作为全面控制苓桂术甘汤质量的评价指标。     

基于柱前衍生UPLC-MS/MS的宁陕地区猪苓单糖组成差异研究

目的:研究宁陕地区猪苓多糖中单糖组成的差异。方法:采用柱前衍生-超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱法检测不同生长条件下猪苓多糖中单糖组成及含量。结果:不同生长年限、不同种植地点及地势、种植过程中是否翻窝、不同发育时期的猪苓多糖的单糖组成均存在差异。3年生猪苓相对2年生猪苓,半乳糖、核糖和木糖等9种单糖的含量降低,而葡萄糖醛酸含量增加;黑苓与灰苓中葡萄糖含量差异明显,黑苓葡萄糖含量均值最高可达灰苓的1.9倍;种植过程中不翻窝、选择坡地种植可能有利于猪苓中单糖成分的积累。结论:对宁陕地区不同猪苓样品单糖组成差异进行初步研究,为宁陕地区猪苓的规范化种植提供依据。     

亲水作用色谱-质谱法测定麻黄根多糖单糖的组成

目的:建立一种亲水相互作用色谱-质谱(HILIC-UPLC-MS/MS)检测分析方法,用于直接检测麻黄根多糖的单糖组成。方法:采用ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相A为乙腈-水(95∶5),B为乙腈-水(5∶95),柱温60℃,梯度洗脱(0~10 min,92%~70%A;10~10.1 min,70%~92%A;10.1~15 min,92%A),进样量2μL,流速0.2 m L·min~(-1);质谱采用电喷雾离子源,负离子模式下多反应离子检测。Turbo V离子源参数如下:毛细管电压-4.5 k V,源温度550℃;气帘气和碰撞气压力分别设为30 psi和10 psi;雾化气和气化气压力均为55 psi,碰撞电池入口电位和出口电位均为-10 V。结果:该方法在12 min内实现8种未衍生单糖成分的完全基线分离,精密度、稳定性和重复性的RSD均2.1%,各成分的回收率在99.3%~102.5%,RSD在1.5%~2.9%,应用上述建立的方法分别对5批麻黄根多糖进行单糖组成分析,结果显示,麻黄根中检测到5种单糖分别为L-鼠类糖,L-阿拉伯糖,D-甘露糖,D-半乳糖,D-半乳糖醛酸。结论:HILICUPLC-MS/MS方法灵敏度高、重复性好、快速、准确、样品前处理简单、无需衍生化,可用于植物多糖中单糖及寡糖的快速检测。     

分步醇沉对玛咖多糖单糖组成及抗氧化活性的影响

目的:分析分步醇沉所得玛咖多糖的单糖组成,并对各部分玛咖多糖的抗氧化能力进行研究。方法:采用水提醇沉法得到玛咖粗多糖,通过分步醇沉对玛咖粗多糖进行分离、纯化;采用气相色谱分析法对各玛咖多糖的单糖组成进行分析;最后采用三氯乙酸法和清除DPPH自由基的方法考察各部分玛咖多糖的抗氧化能力。结果:分步醇沉随乙醇浓度增加依次得到0~40%乙醇多糖部分,40%~50%乙醇多糖部分,50%~60%乙醇多糖部分,60%~70%乙醇多糖部分及70%~80%乙醇多糖部分,依次命名为MP1,MP2,MP3,MP4和MP5;其中收率最大的为MP1,纯度最高的为MP4,分别为0.856%和68.5%;经气相色谱技术分析发现不同体积分数乙醇所得玛咖多糖的单糖组成种类及比例不同;抗氧化能力试验结果表明各部分玛咖多糖的抗氧化能力存在显著性差异,其中抗氧化能力最强的为MP5,MP4抗氧化能力次之,抗氧化能力最弱的为MP1。结论:分步醇沉所得各部分玛咖多糖的抗氧化能力有较大差异,玛咖多糖的抗氧化活性与其单糖组成的种类、比例及其空间构象密切相关,分步醇沉对分离纯化玛咖多糖具有重要意义,为玛咖多糖进一步分离纯化、结构组成和药理研究提供可靠的参考依据。     

松茸水提物提取工艺优化及其单糖组成分析

目的优化松茸水提物提取工艺,并分析其单糖组成。方法以提取温度、液料比、提取时间、提取次数为影响因素,多糖提取率为评价指标,正交试验优化提取工艺。水提醇沉法得到粗多糖后用三氟乙酸水解,加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)进行衍生化,HPLC法分析单糖组成。结果最佳条件为药材加入50倍量水,90℃下回流提取2 h,重复3次,多糖提取率为17.44%。多糖主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、岩藻糖组成,摩尔比为1:3.39:1.19:0.24:0.40。结论该方法快速稳定,准确简便,可用于松茸及其相关制剂的质量控制。     

葛根素影响链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4的表达

目的：观察葛根素对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响及对糖尿病的治疗作用。 方法：实验于2004—10／2005-12在国家人类基因组北方研究中心（北京诺赛基因组研究中心有限公司）完成。选择8～10周龄雄性Wistar大鼠20只，采用静脉注射链脲佐菌素建立链脲佐菌索诱导的糖尿病大鼠模型．链脲佐菌素（60．0mg/kg）一次性静脉注射，当血糖浓度大于20．0mmol／l。并伴有多尿等其他糖尿病症状定为链脲佐菌素诱导的精尿病大鼠模型成功然后将链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠随机数字表法分为4组，糖尿病模型组，葛根素治疗组，胰岛素治疗组，葛根素＋胰岛素治疗组，每组5只。葛根素治疗组大鼠腹腔注射葛根素10．0mg／（kg&;#183;d）；胰岛素治疗组给予正规胰岛素治疗，皮下注射胰岛素30U／（kg&;#183;d）；葛根素＋胰岛素治疗组混合治疗，大鼠腹腔注射葛根索10．0mg／（kg&;#183;d）；然后皮下注射胰岛素30U／（kg&;#183;d）；治疗4周后断髓法处死大鼠，解剖取出大鼠肾周脂肪组织。经处理后采用Western blot方法检测脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4的表达。并用Sigmagel软件对X射线胶片上阳性条带实施扫描。加样量误差由β-actin矫正。 结果：在实验过程中无动物死亡，全部进入结果分析：①将糖尿病模型组脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4的吸光度没定为1，葛根素治疗组，胰岛素治疗组、葛根素＋胰岛素治疗组脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4的吸光度分别为2．70&;#177;0．23，2．14&;#177;0．28，3．49&;#177;0．47，与糖尿病模型组比较，差异均有显著性意义（P＜0．01～0．05）。葛根素治疗组葡萄糖转运蛋白4的含量比糖尿病模型组显著增加，大约增加2～3倍。胰岛索治疗组也比糖尿病模型组增加，大约增加1～2倍，不如葛根素治疗组明显。葛根素＋胰岛素治疗组比糖尿病模型组显著增加，大约增加2～3．5倍。②Western　blot条带结果显示，以β－actin作为对照，葛根素治疗组和葛根素＋胰岛素治疗组大鼠脂肪细胞中葡萄糖转运蛋白4的含量明显增加。 结论：葛根素有类似胰岛素的作用，能够增加链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4的含量。     

太子参均一多糖的分离与表征

目的:对太子参抗二型糖尿病多糖活性部位(PF40),进行分离纯化得到均一多糖并对其进行结构表征。方法:太子参粉碎后,通过水提醇沉法(40%乙醇)得到太子参粗多糖,采用DEAE-纤维素、葡聚糖凝胶柱对其分离纯化,得到一种均一多糖,采用高效凝胶渗透色谱法测定分子量,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)-柱前衍生高效液相色谱法分析单糖组成。结果:分离得到一种均一多糖,由葡萄糖组成,分子量为18400Da,命名为HPh-1-1。结论:太子参均一多糖HPh-1-1是一种葡聚糖。     

何首乌多糖提取方法的比较研究

目的:比较不同提取方法对生何首乌多糖的影响,同时初步探索了热水提取生何首乌和制何首乌多糖的差异。方法:以何首乌为原料,分别通过热水提取法、超声提取法、微波提取法制得多糖,并对不同提取工艺下多糖的得率、总糖含量、蛋白含量、重均分子量(M_w)、单糖组成和2,2-二苯基-1-苦基肼(DPPH)自由基清除能力进行比较和研究。结果:不同提取方法所得何首乌多糖得率依次为：微波提取法[微波提取何首乌粗多糖(M-PMP)]>热水提取法[热水浸提何首乌粗多糖(H-PMP)]>超声提取法[超声提取何首乌粗多糖(U-PMP)]; U-PMP的蛋白含量最高,M_w与其他多糖也有明显差别;单糖组成结果显示,不同提取方法的何首乌多糖中单糖组成相同,主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,但单糖组成的摩尔比有所不同。结论:3种提取方法所得的多糖成分存在一定差异,且不同提取方法得率差异明显,其中M-PMP得率最高;同时发现生何首乌和制何首乌中多糖成分可能存在一定差异,有待进一步验证。     

琵琶甲多糖的提取分离、结构表征及生物活性研究

目的 研究昆虫琵琶甲多糖的结构表征及生物活性。方法 采用水提醇沉和分级沉淀法制备得琵琶甲粗多糖组分BP50、BP75和BP90,并用葡聚糖凝胶G-75进一步分离纯化BP90得琵琶甲多糖组分BP90-Ⅱ。用苯酚-硫酸法、BCA法、HPLC、凝胶渗透色谱联用多角度激光光散射和示差检测器、红外光谱法分析表征多糖结构特征;测定各组分清除DPPH、ABTS和OH自由基的能力来评估抗氧化活性;此外,采用脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞初步研究琵琶甲多糖的抗炎活性。结果 多糖组分BP90的抗氧化能力最强。BP90-Ⅱ的总糖、蛋白质含量分别为82.13%和11.28%。BP90-Ⅱ的红外光谱呈现多糖的典型特征吸收峰,重均分子质量为56 200 g·mol^–1。BP90-Ⅱ是由甘露糖、鼠李糖、氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、氨基半乳糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和岩藻糖10种单糖组成的杂多糖,其中葡萄糖含量最高,达74.85%。结果显示琵琶甲多糖BP90-Ⅱ对脂多糖诱导产生的NO有一定的抑制作用,当BP90-Ⅱ浓度为10 μg·mL^–1和100 μg·mL^–1时,NO抑制率分别为(14.86±1.63)%、(36.43±5.62)%。结论 琵琶甲多糖具有良好的抗氧化能力和一定的抗炎活性,具有一定的药用和食用开发价值。     

基于单糖指纹图谱技术的速生黄芪与野生黄芪的鉴别

目的建立黄芪单糖指纹图谱,找出速生黄芪与野生黄芪糖谱专属性差异,为不同生长方式黄芪鉴别和品质评价提供依据。方法采用单糖指纹图谱技术,对24批不同生长方式的黄芪药材,以黄芪细胞质中游离糖、多糖和糖缀合物为研究对象,建立速生黄芪与野生黄芪的单糖指纹图谱,并对不同生长方式的黄芪中单糖的种类与量进行主成分分析和聚类分析。结果野生黄芪中不同糖类成分的量明显高于速生黄芪,且2种黄芪可按指标成分的比例进行鉴别(速生黄芪中甘露糖-阿拉伯糖3.5∶1,葡萄糖-阿拉伯糖4∶1;野生黄芪中甘露糖-阿拉伯糖3.5∶1,葡萄糖-阿拉伯糖4∶1)。结论该结果不仅为黄芪品质评价指标的筛选提供了依据,同时为以糖类化合物为主要活性物质的中药材质量评价标准的研究提供了思路与方法。