基于网络药理学和分子对接技术探讨生脉注射液抗新型冠状病毒肺炎的作用机制

目的采用网络药理学与分子对接技术探讨生脉注射液的活性成分和治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的潜在作用机制。方法利用TCMSP及BATMAN-TCM数据库筛选生脉注射液的活性化合物,通过TCMSP及Targetnet在线数据库预测作用靶点,通过Cytoscape3.7.1构建活性成分-作用靶点网络图;在GeneCards及OMIM数据库中以"coronavirus pneumonia"为关键词搜索冠状病毒肺炎相关疾病靶点,与生脉注射液化合物靶点进行交集筛选出共同靶点作为研究靶点,将共同靶点导入STRING数据库获取数据后在Cytoscape 3.7.1软件中构建蛋白质-蛋白质相互作用网络图;利用R语言进行GO(gene ontology)功能、KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路富集分析,预测其作用机制,并构建"成分-靶点-通路"网络图;通过DiscoveryStudio 2.5软件对关键靶点进行分子对接分析。结果生脉注射液筛选得到22个活性化合物,分别为邻苯二甲酸二辛酯、β-谷甾醇、当归酰基戈米辛O、戈米辛A、戈米辛R、五味子丙素、内南五味子酯乙、长南酸、南五味子内酯、香蒲木脂素B、新杜松烷酸A、新杜松烷酸B、新杜松烷酸C、新南五味子木脂宁、五味子内酯A、五味子内酯E、五味子酸、尿苷、薯蓣皂苷元、鸟嘌呤核苷、N-反式阿魏酰酪胺、豆甾醇。相应作用靶点224个,与COVID-19的共同靶点16个,分别为CASP3、CASP8、PTGS2、BCL2、BAX、PRKCA、PTGS1、PIK3CG、F10、NOS3、DPP4、NOS2、TLR9、ACE、ICAM1、PRKCE,关键靶点涉及CASP3、PTGS2、NOS2、NOS3、ICAM1。GO功能富集分析得到生物过程(BP)条目771个,细胞组成(CC)条目11个,分子功能(MF)条目79个。KEGG通路富集分析筛选得到67条(P0.05)信号通路,主要涉及糖尿病并发症AGE-RAGE信号通路、凋亡通路、P53信号通路、小细胞肺癌通路等。分子对接结果显示与关键靶点对接较好的成分有五味子内酯E、豆甾醇、N-反式阿魏酰酪胺。结论生脉注射液中的活性化合物五味子内酯E、豆甾醇、N-反式阿魏酰酪胺等能作用于CASP3、PTGS2、NOS2、NOS3等靶点调节多条信号通路发挥抗炎、免疫调节、抗休克、增加血氧饱和度等作用,从而可能发挥对COVID-19的治疗作用。     

女贞子多糖联合布地奈德在哮喘幼鼠模型中的免疫调节及抗氧化作用研究北大核心CSCD

目的:探讨女贞子多糖(LVFP)与布地奈德联用对哮喘幼鼠免疫调节、气道炎症及氧化应激的影响。方法:从女贞子中提取LVFP,并采用傅里叶变换红外光谱、高压离子色谱及高效凝胶过滤色谱技术对LVFP表征进行鉴定。40只BALB/c幼年小鼠随机分为对照组(Control)、哮喘组(OVA)、OVA+布地奈德组(OVA+budesonide)及OVA+LVFP+布地奈德组(OVA+LVFP+budesonide),每组10只,OVA致敏、激发哮喘症状构建哮喘幼鼠模型,激发周期内OVA+budesonide及OVA+LVFP+budesonide组分别给予布地奈德(3μg/d,吸入)或LVFP[(400 mg/(kg·d),灌胃]+布地奈德(3μg/d,吸入),第28天监测气道反应性,第29天处死幼鼠,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子表达,血细胞计数仪、Wright-Giemsa染色法进行炎症细胞计数,流式细胞术检测BALF中炎症细胞比例变化。Western blot测定肺组织氧化应激及线粒体融合、分裂相关蛋白表达。结果:与OVA组相比,OVA+LVFP+布地奈德组支气管高反应性显著降低(P<0.05),BALF中总炎症细胞数和嗜酸性粒细胞数显著减少(P<0.05),哮喘状态下树突状细胞比例显著降低(P<0.05),而抗炎自然杀伤细胞及调节性T细胞比例升高(P<0.05),炎症因子IL-4、IL-5、IL-9、IL-10、IL-13及TGF-β水平降低(P<0.05)。LVFP与budesonide联用还可抑制氧化相关蛋白硝基络氨酸、超氧化物歧化酶2(SOD2)及线粒体融合和分裂相关蛋白OPA1、线粒体融合蛋白2、动力蛋白相关蛋白1及线粒体分裂蛋白1表达(P<0.05)。结论:LVFP与布地奈德联用可降低支气管高反应性,调节免疫细胞数量,减轻肺部炎症反应,抑制氧化应激,有望用于哮喘治疗。     

当归补血汤对宫颈癌荷瘤小鼠抑瘤效果及对免疫调节作用的研究

目的:探讨当归补血汤对宫颈癌荷瘤小鼠抑瘤效果及免疫调节作用。方法:以宫颈癌荷瘤小鼠为实验模型(小鼠宫颈癌U14细胞接种于Balb/c小鼠双侧大腿内侧皮下),共40只,将其分成两组,每组20只,A组喂药当归补血汤,B组给与等量的蒸馏水灌胃,持续16周,测量治疗前后肿瘤大小,计算肿瘤生长率。在免疫抑制模型基础建立宫颈癌荷瘤小鼠40只,分成两组,每组20只,C组喂药当归补血汤,D组予以等量蒸馏水灌胃,2周后断颈,取胸腺、脾脏称量,计算胸腺指数和脾脏指数。结果:灌胃16周后,A组存活10只,B组存活3只,A组与B组相比,体重较B组明显增加,生存时间明显延长,根据生存状态评分两组综合评分具有统计学差异(P<0.05)。A组用药4周、8周、12周后肿瘤体积均明显小于B组(P<0.01),A组用药4周、8周后肿瘤生长率明显低于B组(P<0.01),用药12周后肿瘤生长率比较差异无统计学意义(P>0.05)。C组的胸腺指数和脾脏指数显著高于D组,差异比较有统计学意义(P<0.01)。结论:当归补血汤对宫颈癌荷瘤小鼠抑瘤效果明显,对免疫状态有调节作用。     

红芪免疫调节作用现状探究

目的:探讨红芪免疫调节作用及红芪免疫应答的现代药理作用。方法:在"中国知网"和"万方数据库"中查阅2000年到2017年与"红芪""免疫"相关的研究文献,对其进行整理和综述。结果:红芪提取液能够通过增强免疫器官、免疫细胞和免疫因子的作用而起到免疫调节作用;与红芪醇提液相比,红芪水煎液免疫调节能力更强。     

新型冠状病毒肺炎免疫治疗药物托珠单抗的作用机制及安全性风险分析

目的分析托珠单抗的安全性风险,为临床合理用药提供参考。方法对世界卫生组织药品不良反应监测数据库、我国药品不良反应监测数据库、国内文献数据库中的不良反应报告情况及国外药监机构风险控制措施等相关资料进行整理与分析。结果应重视托珠单抗临床使用中可能发生的肝功能异常、皮肤损害、过敏反应、胃肠道损害、感染、血液系统损害等不良反应。结论托珠单抗临床使用中,应加强对严重感染及肝功能损害等严重不良反应的安全性监测,促进药品的临床合理使用。     

调衡方对Lewis肺癌荷瘤体巨噬细胞吞噬功能的影响＊

目的 研究调衡方对Lewis肺癌荷瘤小鼠巨噬细胞形态、 数量及活性的影响，探讨调衡方对荷瘤体巨噬细胞作用的免疫调节机制。方法 将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于小鼠右腋皮下建转移肺癌模型；灌胃给药8 d后，从小鼠腹腔分离抽取巨噬细胞并培养；调衡方各组巨噬细胞培养48 h后，在显微镜下观察活细胞的形态，墨汁吞噬试验以及金葡菌吞噬试验观察巨噬细胞的吞噬能力，细胞酶化学染色观察巨噬细胞胞内酸性磷酸酶的变化，用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各培养组M?上清中IL-1、IL-6、TNF-α表达水平。结果 调衡方小、中、大剂量各组巨噬细胞培养48 h后，与对照组比较，巨噬细胞体积显著增大，对墨汁和金葡菌的吞噬能力均显著提升，酸性磷酸酶的活性也明显增强，且能抑制炎性因子IL-1、IL-6、TNF-α分泌，这均与给药浓度呈正相关。结论 调衡方能增强巨噬细胞的吞噬功能，进而提高胞内酸性磷酸酶等的活性，通过抑制巨噬细胞分泌炎性因子（IL-1、IL-6、TNF-α）有控制巨噬细胞向M2型极化的可能，并减轻肿瘤浸润程度，降低肿瘤发展及转移，而发挥抗肿瘤免疫调节的作用。     

胡蜂毒提取物对胶原诱导性类风湿性关节炎大鼠的作用研究

目的建立胶原诱导性类风湿关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠模型来探讨胡蜂毒提取物对大鼠类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的治疗作用。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(注射用蜂毒冻干粉,1.25 mg·kg^-1)和胡蜂毒提取物低、中、高剂量(0.125、0.25、0.5 mg·kg^-1)组,除正常组外,其余各组采用多点注射鸡Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂的方法来诱导大鼠RA模型,每7 d一次,共14 d。造模结束后,各给药组于足趾皮下注射对应剂量的药物,连续给药14 d。分别于造模前、造模第14天和给药第14天测量大鼠踝关节直径和周长,并进行AI评分;观察大鼠脏器指数和踝关节组织HE染色的变化;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清中相关炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-8、前列腺素(PG)E-2、环氧化酶(COX)-2和类风湿因子免疫球蛋白(Ig)G、Ig A、Ig M的含量变化;利用流式细胞术检测大鼠脾脏T细胞亚群的变化。结果与模型组比较,胡蜂毒提取物对CIΑ大鼠的关节肿胀(直径及周长)抑制效果显著(P<0.01),能明显降低其AI评分(P<0.01或P<0.05),能不同程度恢复大鼠的脏器指数(P<0.01或P<0.05),改善踝关节组织病理学结构病变,降低大鼠血清中各炎症因子和类风湿因子的表达(P<0.01或P<0.05),调节和改善T细胞亚群比例的紊乱(P<0.01或P<0.05)。结论胡蜂毒提取物对CIA大鼠具有较好的治疗作用,这与其对炎症细胞因子网络的调控和对免疫的调节有关系。     

三尖杉提取物对脓毒症小鼠T细胞行为及免疫的影响

目的研究三尖杉提取物对脓毒症小鼠T细胞行为及免疫的影响。方法 SPF级雄性BALB/c小鼠40只,其中10只作为正常对照组,其余30只建立脓毒症模型,建模成功后分为模型组、阳性对照组、三尖杉提取物组,阳性对照组使用血必净干预,三尖杉提取物组使用三尖杉酯碱干预,正常对照组与模型组腹腔注射等剂量的生理盐水。对四组小鼠T细胞增殖、细胞周期变化进行检测,观察小鼠病理组织变化,测定小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、皮质醇含量、胸腺指数、中性粒细胞(PMN)吞噬功能、白细胞移行抑制指数。结果三尖杉提取物组小鼠T细胞CD_(25)、CD_(69)、CD_(71)表达、T细胞增殖率、TNF-α、白细胞移行抑制指数(MII)低于阳性对照组,皮质醇含量、PMN吞噬率、胸腺指数高于阳性对照组(P<0.05)。三尖杉提取物组S、G2/M期T细胞低于阳性对照组(P<0.05)。结论三尖杉提取物通过调节下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴,抑制T细胞的活化和增殖,改善机体免疫功能。     

母乳能抗致病菌

母乳含有抗菌化合物和免疫调节活性物质,是母亲给孩子最好的礼物。美国研究人员在最新一期《科学报告》杂志撰文称,人类母乳中的一种化合物月桂酸单甘油酯能对抗有害细菌造成的感染,同时不会影响有益细菌,为母乳有益于婴儿健康再添佐证。     

淫羊藿、巴戟天中药提取物对恒河猴M0、M1型单核衍生巨噬细胞基因表达的影响

【目的】探讨中药淫羊藿、巴戟天提取物(中药注射液喘可治的组成)对恒河猴单核衍生的巨噬细胞在未极化(M0)、M1极化条件下基因表达的影响,分析其可能的免疫调节的作用机制。【方法】采用密度梯度离心法分离中国恒河猴外周血单个核细胞(PBMCs),采用贴壁法纯化出单核细胞,并以粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激5 d以使单核细胞分化成巨噬细胞;然后不加入极化因子(M0)或以干扰素γ(IFN-γ,继续培养2 d)诱导巨噬细胞极化为M1表型,同时分别加入淫羊藿、巴戟天提取物进行干预;然后提取m RNA并逆转录后,采用实时荧光定量PCR检测CCR5、CD4、CTLA-4、Fox P3、IDO、IL-10、TGF-β等基因表达量。【结果】与空白对照组比较,加入巴戟天提取物培养的M0巨噬细胞基因表达上调不明显;经淫羊藿提取物培养的M0巨噬细胞,CCR5基因表达量上调4.21倍,TGF-β上调7.66倍,Fox P3、IL-10轻度上调,而CD4、CTLA-4、IDO等基因表达改变倍数无明显变化。经巴戟天提取物刺激的M1型巨噬细胞,CTLA-4基因表达量上调3.22倍,Fox P3上调3.69倍,CCR5、CD4、IL-10、IDO基因改变倍数均无明显变化,TGF-β未测出;而由淫羊藿提取物刺激的M1型巨噬细胞,IL-10的表达量上调11.83倍,Fox P3上调4.55倍,IDO、CCR5、CD4、CTLA-4基因改变倍数无明显变化,TGF-β未测出。【结论】巴戟天和淫羊藿提取物培养能够上调M1型巨噬细胞IL-10、Fox P3、CTLA-4等抑炎基因表达,淫羊藿提取物能够上调M0巨噬细胞CCR5和TGF-β等基因表达,促进病原体清除和组织修复,从而发挥多效免疫调节作用。