前交叉韧带黏液样变性的研究进展

前交叉韧带黏液样变性是由葡萄糖胺聚糖聚集在前交叉韧带胶原纤维间质引起膝关节疼痛、活动受限的一种疾病。Kumar等于1999年首次描述了这种疾病的症状及影像学表现,并初步采用韧带切除缓解症状。之后存在多例类似情况的报道,但由于其病理生理学机制尚不明确,早期对疾病分类不清,缺乏足够多可靠的病理学证据,此病经常与前交叉韧带黏液样囊肿混淆。近年来,随着对前交叉韧带黏液样变性认识和研究的深入,对本病的整体认识、诊断及治疗等方面又有了更加完善的标准,本文对前交叉韧带黏液样变性的发病机制及病因、临床表现、诊断、治疗等方面综述如下。     

扇贝糖胺聚糖对OX-LDL诱导血管内皮细胞氧化应激损伤的抑制作用机制研究

目的:研究扇贝糖胺聚糖(SS-GAG)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤的抑制作用机制。方法:试验分为阴性对照组、模型组与SS-GAG高、中、低浓度(质量浓度分别为200、100、50 mg/L)组,后3组以不同质量浓度SS-GAG培养细胞12 h后,以50μmol/L氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)培养细胞24 h。以MTT法检测细胞活力;测定乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞仪测定活性氧(ROS)水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)m RNA表达;Western blot测定NOX4蛋白表达。结果:与阴性对照组比较,模型组细胞活力减弱,LDH活性增强,ROS水平升高,LOX-1 m RNA表达增强,NOX4蛋白表达增强,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,SS-GAG高、中、低浓度组细胞活力增强,LDH活性减弱,ROS水平降低,LOX-1 m RNA表达减弱,NOX4蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:SS-GAG有一定的保护血管内皮细胞作用,其机制可能与经LOX-1/NOX4途径抑制ROS产生、减轻氧化应激损伤有关。     

仿刺参糖胺聚糖对健康人和肺癌患者外周血单个核细胞体外增殖活性的影响

目的探讨不同浓度的仿刺参糖胺聚糖(HGAG)对健康人和肺癌患者外周血单个核细胞(PBMC)体外增殖活性的影响。方法采用Ficoll密度梯度离心法分别从健康人和肺癌患者外周血分离PBMC,在体外与0、0.1、1、10、50、100μg/m L的HGAG共同培养,CCK-8法检测PBMC增殖的光密度(OD)值。结果 HGAG在1~50μg/m L浓度范围内健康人PBMC的OD值均增高,与0μg/m L相比P均<0.05,浓度为10μg/m L时OD值最高(P均<0.05),0.1、100μg/m L与0μg/m L相比差异无统计学意义;HGAG在10~100μg/m L浓度范围内肺癌患者PBMC的OD值均增高,与0μg/m L相比P均<0.05,且HGAG浓度越高其OD值越高(P均<0.05)。结论HGAG在一定浓度范围内均能够促进健康人和肺癌患者PBMC的增殖,从而有助于提高机体的免疫功能,发挥抗肿瘤作用。     

糖胺聚糖结合细胞因子与肿瘤

糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)是一类含有糖醛酸和氨基糖残基的重要生物大分子。在细胞表面和细胞外基质中存在着一些高亲和力的GAG结合细胞因子,如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、中期因子(midkine,MK)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、肝素酶(heparanase,HPA)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)。它们除了具有多种生物学作用外,还与肿瘤发生、发展有着密切联系。GAG结合细胞因子在肿瘤分子诊断、靶向治疗方面的研究和应用已越来越受关注。     

扇贝裙边糖胺聚糖对SH-SY5Y细胞氧化及凋亡影响

目的探讨扇贝裙边糖胺聚糖（SS-GAG）对6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导的SH-SY5Y细胞丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）含量及凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-9表达的影响。方法体外培养SH-SY5Y细胞,随机分为对照组、6-OHDA损伤组和SS-GAG（200、400和800mg/L）处理组,测定各组细胞中MDA含量、LDH活性,实时荧光（real-time）PCR检测细胞Bcl-2、Bax mRNA表达的变化,流式细胞技术（FCM）检测活化Caspase-9蛋白表达。结果与对照组相比较,6-OHDA损伤组的MDA含量、LDH活性增加,Bcl-2mRNA表达降低,Bax mRNA表达升高,表达活化Caspase-9蛋白的细胞数增加,差异均有统计学意义（F=27.699-280.567,P〈0.01）。与6-OHDA损伤组比较,各浓度SS-GAG处理组SH-SY5Y细胞中MDA含量、LDH活性降低,Bcl-2mRNA表达升高,Bax mRNA表达降低,活化的Caspase-9蛋白表达量减少,并且呈剂量依赖性,差异均有显著意义（F=27.699-280.567,P〈0.01）。结论 SS-GAG能降低6-OHDA诱导的氧化应激水平,保护生物膜的完整性。SS-GAG通过上调Bcl-2基因的表达和下调Bax基因的表达,抑制Caspase-9蛋白的活化,从而抑制6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞凋亡。     

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中低聚仿刺参糖胺聚糖的浓度及初步药物动力学研究

目的 建立大鼠血浆中低聚仿刺参糖胺聚糖（DAHG-1W）的LC-MS/MS测定方法,研究大鼠单次静脉注射DAHG-1W后的血浆药物动力学。方法 大鼠血浆样品经灰色链霉菌蛋白酶预处理、温和酸水解脱除岩藻糖支链、硫酸软骨素ABC酶降解成主链二糖并用2-氨基吖啶酮衍生后,进行液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）分析。色谱分离采用Cortecs UPLC T3色谱柱（2.1mm×150 mm, 1.6 μm）,流动相为10 mM乙酸铵水溶液-甲醇,梯度洗脱。质谱检测采用加热电喷雾离子源（H-ESI）,以负离子方式检测,AMAC标记的CS-4S6S和CS-2S4S（内标）的多反应监测（MRM）离子对均为m/z 732.0→652.4,保留时间分别为9.0和7.4 min。应用上述LC-MS/MS方法测定大鼠尾静脉注射DAHG-1W（5 mg·kg-1）后的血浆药物浓度,采用WinNonLin 6.0版软件计算药代动力学参数。结果 大鼠血浆中DAHG-1W在3.91-125.00 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好;日内和日间精密度均小于15%,准确度为102.60%-111.17%;回收率为89.16%-103.35%;无明显基质效应且血浆样品稳定性好。大鼠静脉注射给药后DAHG-1W的血药峰浓度（Cmax）为（36.73±2.10）μg·mL-1,半衰期（t1/2）为（277.31±56.22）min,清除率（Cl）为（0.82±0.09）mL·min-1·kg-1,0-300 min药时曲线下面积（AUC0-t）为（3638.30±45.84）min·μg·mL-1。结论 本研究建立了大鼠血浆中DAHG-1W的LC-MS/MS分析方法,可应用于DAHG-1W在大鼠体内的药物动力学研究。     

硫酸软骨素在促进成骨中的研究与应用

骨缺损的修复是临床和基础研究的热点问题,近年来关于如何促进骨形成成为生物医学领域关注焦点。硫酸软骨素是结缔组织中蛋白聚糖的重要组成成分,是细胞外基质的主要成分,已被广泛应用于医学各领域。本文仅就硫酸软骨素在促进成骨方面的研究进展做一综述。     

平颏海蛇皮中新型硫酸皮肤素的分离纯化和结构表征

目的 从平颏海蛇皮中提取分离糖胺聚糖(GAGs),并对其结构进行初步表征。方法 对海蛇皮进行脱脂处理后,采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶联合酶解提取粗多糖,采用氯代十六烷基吡啶(CPC)沉淀和Q-Sepharose Fast Flow离子交换树脂对粗多糖进行分离纯化。运用醋酸纤维素薄膜电泳分析其GAGs种类,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生高效液相色谱(HPLC)法分析其单糖组成,利用硫酸软骨素酶降解结合质谱和强阴离子交换色谱(SAX-HPLC)法分析其2糖组成。结果 获得了2种GAGs纯化组分,并对其中1种含量较高的纯化组分(HSAP-2)进行了初步结构表征。HSAP-2中含有4种2糖,主要为单硫酸化2糖(4S和6S)和少量2硫酸化2糖(46S)、非硫酸化2糖(0S);单糖组成中含有葡萄糖醛酸(GlcA)和乙酰氨基半乳糖(GalNAc);是1种高度杂合的新型硫酸皮肤素(DS)。结论 从平颏海蛇皮中分离纯化获得了1种结构新颖的DS,为平颏海蛇多糖结构与生物活性的深入研究提供了基础。     

野生与养殖全蝎酶解后主要成分含量及抗肿瘤作用的对比研究

目的观察比较野生与养殖全蝎酶解后主要成分变化及抗肿瘤作用效果。方法分别采用改良Lowrry法测定蛋白质含量;阿利新蓝法测定糖胺聚糖含量;半微量凯氏定氮测定水解度;MTT法测定对A549和Hep-2细胞的抑制率。结果对所得含量用t-检验:双样本等方差假设分析所得实验数据,比较两者间差异,其中蛋白质含量、糖胺聚糖含量差异均无统计学意义;野生全蝎的水解度为16.87%,养殖全蝎为16.46%;两者对A549细胞和Hep-2细胞的抑制作用均成剂量关系,随药物浓度的升高抑制率呈现上升趋势,且养殖全蝎酶解后其抑制效果总体优于野生全蝎酶解后的效果。结论经过两者间几个主要成分含量的比较以及对肿瘤抑制作用的比较,野生与养殖全蝎酶解后主要化学成分含量变化不大,但养殖全蝎酶解后肿瘤细胞的抑制作用优于野生全蝎。     

刺参糖胺聚糖对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg影响的研究

目的：研究刺参糖胺聚糖对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用。方法：培养中的HepG2.2.15细胞可持续分泌HBV。用MTT法检测药物的细胞毒性,用ELISA法检测培养上清中的HBsAg和HBeAg。结果：刺参糖胺聚糖对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用存在时间和浓度依赖性。给予4种不同浓度的刺参糖胺聚糖作用3天后,8mg/ml、4mg/ml、2mg/ml组能明显抑制HBsAg和HBeAg的分泌（P＜0.05）;经药物处理6天后,对细胞外HBsAg和HBeAg分泌的抑制率呈显著差异（P＜0.01）。结论：刺参糖胺聚糖具有一定的抗HBV活性。