基于网络药理学和实验验证探讨香菇多糖抑制三阴乳腺癌的作用机制

目的 基于网络药理学研究香菇多糖抑制三阴乳腺癌（TNBC）的作用机制并采用细胞和动物实验进行验证。方法 通过GeneCards数据库和DisGeNET数据库筛选与TNBC相关基因靶点，利用TCMID、PubChem、SwissTargetPrediction和GeneCards数据库查询香菇多糖相关基因靶点。使用Sangerbox软件进行基因本体论（GO）富集和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。结合STRING数据库与Cytoscape 3.7.0软件将共同靶点进行可视化处理，筛选核心靶点，构建"化合物-靶点-通路"网络。利用Metascape软件进行转录因子及相关调控基因特异富集。体外培养小鼠TNBC细胞4T1和人TNBC细胞MDA-MB-231，磺酰罗丹明B染色法观察香菇多糖（31.25、62.5、125、250、500、1 000μg·mL^-1）对细胞存活率的影响；健康雌性BABLC小鼠sc接种1×10⁶个4T1-Luc细胞构建TNBC模型，通过小动物活体成像系统观察香菇多糖（100、200 mg·kg^-1）对肿瘤生长的影响，实时荧光定量PCR （qRT-PCR）技术检测肿瘤组织信号转导和转录活化因子3（STAT3）和血管内皮生长因子A （VEGFA） mRNA表达。结果 数据库及软件分析得到香菇多糖治疗TNBC关键靶点52个，靶点主要涉及PI3K-Akt、AGE-RAGE、HIF-1、MAPK信号通路和肿瘤蛋白多糖相关通路，PPI分析得到VEGFA、STAT3、MAPK1、IL2、TNF、RELA、AKT1、MAPK3、BCL2L1和HSP90AA1 10个hub基因。与对照组比较，香菇多糖对4T1和MDA-MB-231细胞存活率均有显著抑制作用（P<0.05、0.01），且作用呈浓度相关性；在给药14、21d后，与模型组比较，香菇多糖能够剂量相关性地抑制小鼠TNBC肿瘤的生长，高剂量组差异显著（P<0.05、0.01），21 d抑制率达到（91.9±4.7）%；与对照组比较，香菇多糖给药后能够剂量相关性抑制STAT3和VEGFA的mRNA表达，高剂量组差异显著（P<0.05、0.01）。结论 香菇多糖可通过多靶点、多途径协同作用抑制TNBC的生长。     

药物三联雾化吸入辅助治疗小儿喘息性支气管炎的效果观察

目的探讨药物三联雾化吸入辅助治疗小儿喘息性支气管炎的效果。方法选取2018年1月—2019年8月浙江省中医药大学收治的喘息性支气管炎患儿122例随机分为对照组61例和三联组61例,对照组给予常规抗炎、通气及布地奈德雾化吸入治疗,三联组在其基础上加用硫酸特布他林、沙丁胺醇、异丙托溴铵三联辅助治疗,比较两组患儿治疗效果、症状缓解时间及治疗前后血清炎性因子、肺功能水平。结果治疗前两组白细胞介素-8(IL-8)、IL-4、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及肺功能相关指标差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,三联组治疗有效率、IL-4水平及第1秒用力呼气容积(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FEV1/FVC显著高于对照组,IL-8、TNF-α水平及咳嗽、喘息、肺部啰音、发热、咳嗽缓解时间显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论药物三联雾化吸入辅助治疗小儿喘息性支气管炎能有效提高患儿治疗有效率,缩短其临床症状缓解时间,抑制患儿机体炎症反应,提高其肺功能,具有临床推广意义。     

茯苓多糖对ApoE-/-AS小鼠肝脏脂质沉积及胆固醇逆向转运相关蛋白表达的影响＊

目的 探讨茯苓多糖对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）小鼠肝脏脂质沉积及胆固醇逆向转运的影响。方法 采用随机数字表法将30只ApoE^-/-小鼠随机分为模型组、茯苓多糖组、辛伐他汀组，每组10只，10只C57BL/6J小鼠作为正常组。正常组给予基础饲料喂饲，其余小鼠给予高脂饲料喂饲12周。茯苓多糖组以0.2 g/kg/d灌胃，辛伐他汀组以2.275 mg/kg/天灌胃，正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃，共干预4周。全自动生化分析仪检测小鼠血清三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平，苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠肝脏病理形态学变化，油红O染色观察小鼠肝脏脂质沉积情况，ELISA检测各组小鼠血清载脂蛋白A1 （ApoA1）、对氧磷酶-1（PON1）含量，Real-time RT-qPCR法及Western Blot法检测肝脏胆固醇酯转运蛋白（CETP）、磷脂转运蛋白（PLTP）、卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）mRNA及蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠血清TG、TC、LDL-C含量均明显上升，HDL-C含量明显下降（P<0.01），肝细胞脂肪变性明显，肝脏脂质沉积明显，小鼠血清ApoA1、PON1含量均明显下降（P<0.01），小鼠肝脏CETP、PLTP mRNA及蛋白表达明显上升，LCAT mRNA及蛋白表达明显下降（P<0.01）。与模型组相比，茯苓多糖组血清TG、TC、LDL-C含量均显著下降（P<0.01），HDL-C含量呈上升趋势（P>0.05），肝细胞脂肪变性、脂质沉积程度均有所减轻，茯苓多糖组ApoA1含量明显上升（P<0.01），PON1含量呈上升趋势（P>0.05），茯苓多糖组CETP、PLTP mRNA及蛋白表达有所下降，LCAT mRNA及蛋白表达有所上升（P<0.05，P<0.01）。结论 茯苓多糖可能通过调控血脂水平与胆固醇逆向转运过程，改善ApoE^-/- AS小鼠肝脏脂质沉积，进而发挥防治AS作用。     

黄芪多糖对人鼻咽癌CNE-1细胞的放疗增敏及上皮间质转化的作用

目的:采用黄芪多糖(APS)与放射治疗(IR)联用,研究APS对人鼻咽癌CNE-1细胞的放疗敏感性及上皮间质转化(EMT)的作用机制。方法:采用细胞计数(CCK-8)法检测不同质量浓度APS(0,6.25,12.5,25,50,100,200 g·L-1)对CNE-1细胞的细胞毒性;克隆形成实验计算12.5 g·L-1APS与不同放射剂量(0,2,4,6 Gy)联用后对CNE-1细胞的存活分数(SF),利用线性二次方程数学模型(LQ)根据SF值绘制放射敏感曲线;细胞划痕和transwell小室实验分别检测各组细胞的迁移和侵袭能力;流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞的EMT标记物、凋亡标记物以及蛋白激酶B/细胞外调节蛋白激酶(Akt/ERK)通路蛋白的表达水平。结果:克隆形成实验和放射敏感曲线结果表明,非毒性剂量12.5 g·L-1APS与4 Gy放射剂量联合给药可以明显增加CNE-1细胞的放疗敏感性;与空白组及IR组比较,APS与IR联用可以抑制CNE-1细胞的迁移和侵袭能力(P0.05),明显增加CNE-1细胞的凋亡率(P0.05)。与空白组及IR组比较,APS与IR联用可以显著下调间质型钙黏蛋白(N-cadherin),p-Akt和p-ERK蛋白表达水平,明显上调上皮型钙黏蛋白(E-cadherin),B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平(P0.05)。结论:APS与IR联用可以抑制CNE-1细胞的迁移和侵袭,增加放疗引起的细胞凋亡,其可能通过抑制EMT和Akt/ERK通路有关。     

妥洛特罗贴剂佐治婴幼儿毛细支气管炎的疗效观察

目的 研究妥洛特罗贴剂(阿米迪)佐治婴幼儿毛细支气管炎的临床疗效和安全性分析。 方法 选取2017年11月—2018年2月在蚌埠医学院第一附属医院儿科就诊的毛细支气管炎的患儿共103例,按照就诊日期的单双日分为治疗组52例(单日就诊)和对照组51例(双日就诊)。2组患儿均给予雾化吸入布地奈德混悬液及热毒宁注射液抗病毒治疗,若合并有细菌感染者加用敏感抗菌药物,必要时给予吸氧、镇静、止咳、化痰等对症支持治疗。治疗组患儿在常规治疗的基础上加用妥洛特罗贴剂,而对照组患儿在常规治疗的基础上加用硫酸沙丁胺醇溶液雾化吸入;比较治疗前后2组患儿临床表现改善情况、住院时间,同时通过临床表现及相关实验室检查观察是否出现其他严重不良反应。 结果 治疗组的有效率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组患儿的咳嗽好转时间、喘憋缓解时间、肺部哮鸣音消失时间、患儿住院时间均显著短于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);且治疗组患儿不良反应发生例数较对照组明显少,程度亦相对较轻,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 妥洛特罗贴剂佐治婴幼儿毛细支气管炎疗效显著,安全性较高,使用方便且不良反应相对较少,值得在临床上推广。      

苓桂术甘汤中多糖结构组成及其抗氧化活性考察

目的:研究苓桂术甘汤中多糖的结构,包括单糖组成以及官能团检测,并对其抗氧化能力进行评估,为体外生物测定法运用于苓桂术甘汤的质量评价提供基础。方法:利用高效凝胶色谱对全方多糖分子量进行研究;进一步采用气相色谱-质谱(GC-MS)柱前衍生化法及红外光谱扫描分析全方多糖结构组成;采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)及羟基自由基测定全方粗多糖及精多糖的抗氧化能力。结果:全方多糖由单一峰组成,且相对分子质量为3 689 Da,主要由阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、果糖组成,摩尔比为6. 85∶1. 00∶109. 21∶1. 04∶21. 82,其中葡萄糖和果糖为主要组成成分;红外结果显示聚糖结构中存在吡喃糖及糖醛酸,并且糖苷键存在2种立体异构(α-糖苷键及β-糖苷键);抗氧化研究发现全方多糖有一定清除DPPH自由基及羟基自由基的能力,粗多糖的活性优于精多糖。进一步采用LC-Q-TOF-MS对粗多糖中的其他成分进行定性分析,提示这与甘草中五环三萜类成分的吸附有关。结论:苓桂术甘汤中多糖及五环三萜类物质均是苓桂术甘汤抗氧化作用的物质基础,利用体外生物测定法测定抗氧化活性可作为全面控制苓桂术甘汤质量的评价指标。     

电针推拿配合硫酸氨基葡萄糖治疗腰椎退行性骨关节病临床观察

目的:观察电针推拿配合硫酸氨基葡萄糖口服治疗腰椎退行性骨关节病的疗效。方法:将60例符合纳入标准的患者随机分为观察组和对照组,每组30例,观察组采用电针推拿配合硫酸氨基葡萄糖口服治疗2周,2周后继续口服硫酸氨基葡萄糖至2个月,对照组采用单纯硫酸氨基葡萄糖口服治疗,分别在治疗前、2周后、2月后对两组进行VAS评分、腰椎Oswestry功能障碍指数评定,以对照观察两组临床疗效。结果:两组在治疗前VAS评分、Oswestry指数均无明显差异(P 0.05);治疗2周后,两组的VAS评分、Oswestry指数均比治疗前明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05);治疗2周后两组间VAS评分、Oswestry指数比较均有明显差异(P0.05);治疗2月后,两组的VAS评分、Oswestry指数均比治疗2周后明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05);治疗2月后两组间VAS评分、Oswestry指数比较均有明显差异(P0.05)。结论:电针推拿配合硫酸氨基葡萄糖口服是治疗腰椎退行性骨关节病有效方法,"急者治标,缓则治本",急性期通过以上综合治疗在较短时间内缓解疼痛以"治标";慢性期,需继续口服硫酸氨基葡萄糖维持治疗,保护腰椎关节突关节软骨以"治本"。     

麦芽4个化学部位通过多巴胺D2受体对产后缺乳模型大鼠催乳作用研究

目的基于多巴胺D2受体(DRD2),考察小剂量麦芽4个化学部位的催乳作用,初步探讨小剂量麦芽生物碱对产后缺乳模型大鼠泌乳素(PRL)分泌的调节机制。方法采用ig甲磺酸溴隐亭方法制备缺乳大鼠模型,造模成功后,各给药组均ig给予相应的药物,应用ELISA法检测各组大鼠血清PRL、雌二醇(E_2)、孕酮(P)水平;HE染色观察各组大鼠乳腺组织病理改变;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组大鼠脑垂体中泌乳素受体及DRD2 mRNA表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血清中PRL、P及E_2水平、脑垂体PRL mRNA表达水平显著降低;脑垂体DRD2 mRNA表达水平显著升高。与模型组比较,麦芽总生物碱组大鼠乳腺小叶体积明显增加,导管明显扩张,且导管及腺泡内含有大量乳汁。麦芽总生物碱明显增加模型大鼠血清中PRL、P、E_2水平及脑垂体PRL mRNA表达水平,降低脑垂体DRD2 mRNA表达水平。结论麦芽催乳的主要药效物质为总生物碱,其作用机制可能与促进PRL分泌,增加脑垂体PRL受体、降低DRD2 mRNA表达水平有关。