聚乙二醇化海葵神经毒素的稳定性考察

目的 考察聚乙二醇(PEG)修饰海葵神经毒素(rhk2a)所得产物mPEG-rhk2a的稳定性.方法 制备和纯化PEG化的修饰产物mPEG-rhk2a,并采用RP-HPLC法分别考察rhk2a和mPEG-rhk2a在4、25、37℃条件下的稳定性.结果 在4℃下,mPEG-rhk2a和rhk2a在放置24 d后,含量分...     

聚乙二醇化海葵神经毒素的修饰反应条件及药效研究

目的优化聚乙二醇(PEG)修饰海葵神经毒素rhk2a(rhk2a)的反应条件,并考察修饰后产物PEG化海葵神经毒素rhk2a(mPEG-rhk2a)的药效性质。方法本研究选用分子量为5 000的PEG丙醛(mPEG-ALD)对rhk2a的N-末端氨基进行修饰;通过单因素考察和正交试验筛选出最佳的修饰反应条件。同时,采用HPLC检测修饰后产物中mPEG-rhk2a的纯度,并通过建立急性心力衰竭豚鼠模型,考察mPEG-rhk2a对豚鼠的强心作用。结果优选出的mPEG-ALD对rhk2a的N-末端氨基的修饰反应条件是:当pH为5.0、rhk2a与mPEG反应摩尔比1∶20、还原剂氰基硼氢化钠为30μL、反应时间为12 h时,所得修饰产物mPEG-rhk2a的得率较高。采用SP-650S强阳离子交换层析法对修饰反应后产物进行分离,纯化后产物中mPEG-rhk2a占83.287%。对于心衰豚鼠,给mPEG-rhk2a溶液后,左心室收缩压、左心室压力最大下降速率明显增加,20 min后呈持续的平稳状态。其强心作用虽然不如rhk2a强,但波动起伏较小,而且强心效果明显高于乙酰毛花苷注射液。结论优选出mPEG修饰rhk2a反应的适宜条件,所得的mPEG-rhk2a强心作用较为理想。     

海葵液眼损伤11例

我科诊治由海葵液引起的眼损伤患者11例，取得较好的效果，现报告如下。     

海葵目动物化学成分及生物活性的研究概况

从海葵目动物中分离出许多化学成分，包括多种多样结构新颖的肽类化合物及倍半萜，类脂等成分，许多具有独特的生物活性，本文对其中代表性的化学成分及其生物活性进行了概述并提出研究展望。     

巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因的原核表达比较

目的：探讨巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因hmGFP的生物学特性及应用的可能性。方法：构建了hmGFP的两个原核表达载体并进行诱导表达。结果：低温下hmGFP获得了功能性表达而发光。深入比较了重组巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因hmGFP在两个表达体系中的表达差异，其中pETTFRX-hmGFP的重组蛋白表达水平和可溶性均比pET21b—hmGFP高。结论：对pETTFRX—hmGFP的表达条件进行了优化，为下一步hmGFP成熟重组蛋白的纯化及其荧光波谱分析奠定了良好基础。     

渤海红海葵的生物医学研究

本文在1983～1987年对渤海潜水员皮炎防治的初步研究的基础上,分别从生物分类学、病理生理学以及毒理学角度对该皮炎的致病生物——渤海红海葵形态学特征,红海葵刺丝囊致病的医学有关特征,以及玫瑰红海葵(Sagartia rosea)活性蛋白特征进行分析研究,进一步阐明渤海红海葵皮炎的发病机理,以探索防治刺胞皮炎的新途径和新方法。     

岩沙海葵毒素人工抗原的合成及鉴定

目的制备岩沙海葵毒素(PTX)的人工抗原和抗血清,为建立PTX的酶联免疫检测方法提供技术基础。方法用小分子succinimidyl3-(2-pyridyldithio)propionate(SPDP)将PTX巯基化成半抗原PTX-PDP,用2-iminothiolane将大分子载体蛋白质匙眼血蓝蛋白(KLH)巯基化成KLH-SH,再将PTX-PDP和KLH-SH反应合成人工抗原PTX-PDP-KLH免疫雌性6~8周龄Balb/c小鼠,进行多抗的制备。用同样的方法制备酶联免疫反应之包被抗原PTX-PDP-BSA,用于检测血清抗体效价。结果根据紫外检测图谱,PTX的最大吸收波长在264nm处,KLH及BSA的最大吸收波长在278及279nm处,而合成的人工抗原PTX-PDP-KLH和PTX-PDP-BSA的最大吸收波长分别在267和273nm处。抗血清经间接酶联免疫吸附法检测,效价达到1∶3200,且与正常Balb/c小鼠、昆明种小鼠及兔血清间无交叉反应。结论合成的人工抗原纯度高,具有较好的免疫原性。     

岩沙海葵毒素单克隆抗体的制备及其鉴定

目的建立岩沙海葵毒素（Palytoxin,PTX）高特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株。方法将PTX偶联成具有免疫功能的PTX-PDP-KLH完全抗原,免疫雌性6—8周龄Balb／c小鼠,利用传统杂交瘤技术制备PTX单克隆抗体。并通过间接酶联免疫吸附测定（ELISA）方法筛选克隆阳性杂交瘤细胞株。结果获得能稳定分泌抗PTX单克隆抗体的杂交瘤细胞株B8,与载体蛋白没有发生交叉反应。SDS—PAGE分析表明,McAb B8在50KD和25KD处各出现一条条带,与IgG的重链和轻链的大小相符。结论研究制备了特异性单克隆抗体PTX,为进一步建立快速检测、鉴定海产品中岩沙海葵毒素的方法,奠定有效的实验基础。     

重组海葵溶细胞素及平颏海蛇磷脂酶A2对血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的观察重组海葵溶细胞素(rSrc)及平颏海蛇磷脂酶A2(rPLA2)对成纤维细胞增殖的影响。方法体外培养成纤维细胞,应用不同浓度的rSrc和rPLA2分别进行作用并设立对照进行比较,采用非放射性的MTS/PES法确定成纤维细胞的增殖状态。结果各组细胞增殖率分别为:对照组0.840±0.061、rSrc 100 μg/ml组0.263±0.044、rSrc 10 μg/ml组0.418±0.054、rSrc 1 μg/ml组0.605±0.063、rSrc 100 ng/ml组0.772±0.054、rSrc 10 ng/ml组0.906±0.072、rPLA2 100 μg/ml组0.498±0.076、rPLA2 10 μg/ml组0.937±0.112、rPLA2 1 μg/ml组0.978±0.145。统计分析显示,低至1 μg/ml的rSrc仍能明显抑制大鼠成纤维细胞的增殖(P<0.01),并呈现剂量依赖性(P<0.05)。rPLA2 100 μg/ml组与对照组相比细胞增殖率有显著差异(P<0.05);rPLA2 10 μg/ml和rPLA2 1 μg/ml组与对照组相比均无显著差异(P>0.05)。结论rSrc和rPLA2分别对血管外膜成纤维细胞增殖有一定的抑制作用。