放射性肺纤维化基质重构与肌成纤维细胞凋亡抵抗的相关性

目的肌成纤维细胞(MFB)凋亡抵抗是肺纤维化进行性发展的关键原因,但MFB发生凋亡抵抗的机制尚未明确。MFB的状态与微环境-细胞外基质密切相关,而纤维化时细胞外基质呈现硬化、重构的特征。前期研究发现,体外3D拟基质不能诱导MFB凋亡抵抗。本研究通过制作去细胞基质(DM)而真实呈现肺基质结构特征,以探讨放射性肺纤维化(RIPF)基质重构与MFB凋亡抵抗的相关性。方法 C57BL/6小鼠全肺照射(总剂量18 Gy)形成RIPF模型;照射后2个月收取肺组织,采用化学加酶学方法制备DM;将分离获得的肺原代纤维细胞分别培养于不同组的DM切片上,TUNEL法比较细胞凋亡情况,组学技术比较转录水平的差异,Western印迹和免疫荧光法检测FAK,AKT和Bcl-2水平。结果 (1)小鼠胸部照射后2个月收集肺组织样本,免疫荧光染色显示,MFB(α-SMA+)表达Bcl-2增强,表现抗凋亡特征。(2) HE染色、电镜检测显示肺组织DM在体外重现肺纤维化基质紊乱、重构的原貌。(3)分别收集培养在正常组DM切片(C-DM)和RIPF组DM切片(RIPF-DM)上的肺纤维细胞,发现RIPF-DM上的MFB凋亡比例低于C-DM,活化胱天蛋白酶3/胱天蛋白酶3下调;KEGG通路富集发现,RIPF-DM可诱导MFB中PI3K-AKT-CREB通路水平上调。(4) Western印迹结果证实,RIPF-DM可上调pFAK/FAK,p-AKT/AKT和Bcl-2水平。结论 RIPF基质重构可诱导MFB凋亡抵抗,其机制与AKT通路上调有关。     

生长抑素及其类似物联合质子泵抑制剂应用于急性非静脉曲张性上消化道出血的循证分析

目的 系统评价生长抑素及其类似物联合质子泵抑制剂（proton pump inhibitor，PPI）治疗急性非静脉曲张性上消化道出血（acute non-variceal upper gastrointestinal bleeding，ANVUGIB）的有效性和安全性，并分析其用药经济性。方法 采用循证医学方法搜集生长抑素及其类似物联合PPI治疗ANVUGIB的RCT、队列研究进行meta分析，得到相应的有效性及安全性分析结果，并进行成本-效果分析。结果 最终纳入6个RCT均未接受内镜治疗，共610例受试者。Meta分析结果显示，生长抑素及其类似物联合高、中、低剂量PPI治疗在以下方面均优于单用高、中、低剂量PPI治疗，差异有统计学意义，总有效率[OR=3.34，95%CI（2.03，5.47），P<0.000 01]、止血时间[MD=-9.04，95%CI（-11.69，-6.38），P<0.000 01]、输血量[MD=-1.10，95%CI（-1.46，-0.74），P<0.000 01]；在不良反应发生率方面，2组差异无统计学意义[OR=0.49，95%CI（0.11，2.12），P=0.34]。ANVUGIB患者予生长抑素联合高、中、低剂量奥美拉唑与单用高、中、低剂量奥美拉唑进行成本-效果分析，增量成本效果比分别为172.28，217.26，330.37，敏感性分析后显示结果稳定。而接受内镜治疗后应用生长抑素及其类似物联合PPI治疗仅1个队列研究，研究结果显示内镜治疗成功后联合治疗并不优于PPI单药治疗。结论 现有证据表明，生长抑素及其类似物联合PPI治疗未经内镜治疗的ANVUGIB患者为较有效的方案，两者安全性相当、耐受性较好，从药品直接成本考虑，高剂量PPI组联合治疗较中、低剂量PPI组联合治疗更具有成本效果性。而对于经内镜下止血治疗的患者两者疗效相当，可考虑单用PPI。     

基于血药浓度监测的美罗培南药物利用评价探索与实践

目的:建立美罗培南药物利用评价方法,评价治疗药物监测(therapeutic drug monitoring,TDM)对临床用药的影响。方法:依据国家卫健委2018版《碳青霉烯类抗菌药物临床应用评价细则》及相关资料,制定美罗培南临床应用评价标准。采用层次分析法(AHP)评估各项评价指标的重要性,并运用逼近理想解排序法(TOPSIS)进行数据处理。对厦门大学附属中山医院2020年6月至10月未开展美罗培南TDM的病例(对照组)和2021年6月至10月开展TDM的病例(监测组)进行对比评价。比较2组临床有效率和细菌学有效率、合理性指标符合率和改善情况以及与最优方案的相对接近度(C_i)。结果:监测组中,ICU患者的血药浓度达标率为70.2%,非ICU患者的血药浓度达标率为42.7%。与对照组相比,监测组临床有效率、细菌学有效率、合理性指标符合率均显著提高(P＜0.05);临床用药不合理(C_i＜0.6)的病例数显著减少(P＜0.05),达到用药基本合理以上水平的病例数增加(C_i≥0.6)。结论:应用TDM有助于提高美罗培南用药的合理性和有效性。     

噬菌体文库与计算机模拟筛选H1N1 流感病毒血凝素结合位点的比较

目的:对H1N1 流感病毒血凝素HA 的抗原表位初步筛选。方法:用噬菌体展示文库对2 株抗体的结合位点进行筛选,将筛选的抗原位点结合HA 序列进行多肽合成,免疫小鼠制备单克隆抗体,通过分子生物学手段对4 株抗体的轻链和重链可变区基因进行调取,通过计算机模拟抗体序列结合的抗原的结构域,推测抗体结合的氨基酸位点。结果:噬菌体文库筛选得出抗体的结合序列富含组氨酸和精氨酸,将针对多肽的单克隆抗体的序列和前期获得的2 株抗HA 单克隆抗体的序列比对分析,发现A1-8 和anti-14p 结合的HA 抗原序列相一致,H1-13 和anti-11p 结合的HA 抗原序列相一致。结论:通过将噬菌体展示文库技术和计算机模拟预测抗原抗体结合,可以有效筛选抗原表位,为流感病毒HA 抗原表位预测方法的完善提供理论基础。     

雷公藤内酯醇抑制小鼠肾小球系膜细胞表达IP-10及其机制研究

目的探讨雷公藤内酯醇(TPL)对γ干扰素(IFN-γ)诱导的小鼠肾小球系膜细胞(MMC)表达γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)的影响及其调控机制,为TPL应用于狼疮肾炎的治疗奠定理论基础、提供实验数据。方法将MMC随机分为空白组、IFN-γ刺激组、TPL干预组,用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测各组中IP-10 m RNA相对表达量;用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞培养上清液中IP-10分泌量;用蛋白印迹法(Western blot)检测各组中JAK/STAT1信号通路相关蛋白JAK1、JAK2、STAT1及其磷酸化蛋白p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1,以及IFN-γ受体(IFN-γRβ)和JAK/STAT1信号通路负反馈调节蛋白SOCS1的表达情况。结果 1)MMC经不同质量浓度(2、4、8、10 ng/ml)TPL预处理2 h后再加入IFN-γ共同作用24 h,IP-10 m RNA相对表达量与刺激组相比分别下降45.35%、65.40%、89.76%和94.72%(P均<0.01);IP-10蛋白分泌量分别下降了5.21%(P=0.531)、54.70%(P<0.01)、87.17%(P<0.01)和92.45%(P<0.01)。2)MMC经TPL预处理40 min后再加入IFN-γ共同作用20 min,JAK1、JAK2、STAT1蛋白磷酸化水平与刺激组相比明显降低(PJAK1<0.01、PJAK2<0.01和PSTAT1<0.05)。3)MMC经IFN-γ刺激后,IFN-γRβ蛋白表达水平与空白组相比明显增加(P<0.01);经TPL干预后,IFN-γRβ蛋白表达水平与刺激组相比明显减少(P<0.01)。4)IFN-γ刺激MMC后,SOCS1蛋白表达水平与空白组相比小幅升高(P<0.05);而经TPL刺激后,SOCS1蛋白表达与刺激组相比明显增加(P<0.01)。结论 TPL可能通过抑制JAK/STAT1信号通路,从而下调IFN-γ诱导的MMC表达IP-10;抑制IP-10表达,减轻或阻止炎症反应,有望成为TPL治疗狼疮肾炎的新靶点。     

植物油中氯丙醇酯和缩水甘油酯测定方法的验证结果

目的首次组织全国省级食品安全风险监测机构,开展氯丙醇酯和缩水甘油酯监测方法的验证,以评价测定结果的可比性及监测方法的可靠性。方法参加培训的24个实验室统一领取植物油质控样品,任选2017版国家食品安全风险监测手册中两个方法之一,测定氯丙醇酯和缩水甘油酯的含量,并在规定时间内提交方法验证报告。结果剔除异常值后,采用Z值法评价测定结果,3-氯-1,2-丙二醇酯(3-MCPD-Es)、2-氯-1,3-丙二醇酯(2-MCPD-Es)和缩水甘油酯(Gly-Es)测定结果满意的实验室分别占87.5%、95.8%和100.0%。结论自2017年来,我国省级疾控中心在此领域的检测能力已有明显提高,除个别实验室外,整体满足质控要求。     

灵芝多糖肽对培养乳大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的研究灵芝多糖肽(GLPP)对培养乳大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用。方法用出生1~3 d的SD乳大鼠进行心肌细胞原代培养,取培养3~4 d的心肌细胞分为正常对照组、H/R组和GLPP给药组(12.5,25,50和100 mg·L-1)。MTT法检测细胞存活率;电镜检测细胞形态改变和线粒体损伤;用AnnexinⅤ-FITC/PI双标记细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率;以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,用激光扫描共聚焦显微镜观察心肌细胞内钙离子荧光强度变化;以活性氧(ROS)敏感的荧光探针2,7-二氢二氯荧光素(DCFH-DA)标记细胞,激光共聚焦显微镜下观察ROS含量变化。结果与正常对照组比较,H/R组细胞存活率降低(P<0.05);GLPP 12.5,25,50和100 mg·L-1组细胞存活率与H/R组比较明显增加(P<0.01)。与正常对照组比较,H/R组可见线粒体损伤,GLPP给药组可以减轻线粒体损伤。流式细胞仪检测结果表明,与正常对照组比较,H/R组细胞凋亡率增加(P<0.01);GLPP组与H/R组比较细胞凋亡率明显减小(P<0.01)。与正常对照组比较,H/R组[Ca2+]i增加,细胞内ROS含量增高(P<0.01);与H/R组比较,GLPP给药组细胞[Ca2+]i减少,细胞内ROS含量降低(P<0.01)。结论GLPP对H/R损伤的乳大鼠心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与减少细胞内自由基含量和减轻细胞内钙超负荷有关。     

双波长HPLC法测定酸性龙胆合剂中龙胆苦苷和橙皮苷的含量

目的:建立双波长高效液相色谱(HPLC)法同时测定酸性龙胆合剂中龙胆苦苷和橙皮苷的含量。方法:采用HPLC法。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),检测波长为270 nm(龙胆苦苷)、283 nm(橙皮苷),柱温为30℃,进样量为10μl。结果:龙胆苦苷和橙皮苷的质量浓度分别在14.4~100.8μg/ml(r=0.999 7)、8.0~104μg/ml(r=0.999 7)范围内与峰面积呈良好线性关系;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均<2%;平均加样回收率分别为99.92%、102.55%,RSD分别为0.41%、1.84%(n均为9)。结论:该方法简便、快速、灵敏,适用于酸性龙胆合剂中龙胆苦苷和橙皮苷的含量测定。     

姜黄素衍生物C085对K562细胞的作用及机制研究

目的研究姜黄素衍生物C085对K562细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法采用MTT法观察C085对细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双荧光染色后流式细胞仪检测C085对细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹探讨C085引发K562细胞凋亡的机制,检测其对BCR-ABL及其下游信号转导通路蛋白的磷酸化及对其他凋亡相关蛋白表达的影响;JC-1荧光染色法检测C085对细胞线粒体膜电位的影响。结果 C085在低浓度下抑制K562细胞,IC50只有其母体姜黄素的1/5甚至更低;在24h即对K62细胞有较强的诱导凋亡作用,主要是中、晚期凋亡。与阳性对照药IM相比,诱导凋亡作用明显。对其作用机制研究发现,C085可下调BCR-ABL的自磷酸化和下游信号转导通路蛋白Stat 5和Crkl的磷酸化水平,作用均强于IM。JC-1荧光染色法结果表明,C085通过直接作用于线粒体的PT孔使其开放,下调Bcl-2、上调Bax,诱导细胞凋亡,促凋亡作用强于IM。结论C085可抑制BCR-ABL+K562细胞的生长,与其抑制BCR-ABL蛋白激酶活性,下调相关信号通路;直接作用于线粒体的PT孔使其开放,激活凋亡相关蛋白,诱导细胞凋亡有关。     

探讨金线莲对非酒精性脂肪肝病血脂的影响

目的探讨金线莲鲜草汁对高脂饮食所致小鼠脂质代谢紊乱的治疗作用。方法将60只C57小鼠随机分成5组:正常组,模型组,金线莲高剂量组,金线莲中剂量组,金线莲低剂量组,测定小鼠血清TC、TG、LDL等生化指标,观察金线莲对该模型的影响。结果金线莲鲜草可以显著降低由高脂饮食引起的小鼠血清胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)水平,对甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)效果不明显。结论金线莲鲜草汁对高脂饮食所致小鼠胆固醇及低密度脂蛋白的升高具有明显的保护作用。