抗GPC3/CD3双特异性重链抗体的制备及其抗肝癌作用评价

目的:设计并制备抗GPC3/CD3双特异性重链抗体(BiHcAb),分析其与双特异性T细胞衔接子(BiTE)在体内外抗肿瘤活性的差异。方法:通过全基因合成抗GPC3和抗CD3单域抗体(sdAb)序列,克隆至携带IgG4 Fc段的表达载体中,同时利用KIH技术形成稳定的双特异性重链抗体。2种质粒共转染HEK-293F细胞,悬浮摇瓶培养获得目的抗体。SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色确定相对分子质量。通过流式细胞术检测与GPC3阳性肿瘤细胞和外周血单个核细胞(PBMC)的结合能力。通过共培养检测BiHcAb介导的细胞杀伤效果及细胞因子释放;采用裸鼠异体移植模型实验检测BiHcAb的体内抑制肿瘤活性。结果:成功构建并表达抗GPC3/CD3 BiHcAb,相对分子质量约为100 000,BiTE相对分子质量约为50 000。抗GPC3/CD3 BiHcAb较BiTE对表达GPC3的肿瘤细胞具有更强的杀伤活性,同时促进释放更多的细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6),差异有统计学意义(P0.05)。裸鼠体内实验显示抗GPC3/CD3 BiHcAb比BiTE具有更强的体内抑制肿瘤生长的作用,差异有统计学意义(P0.05)。结论:成功制备的抗GPC3/CD3 BiHcAb较BiTE在体内外具有更强的抗肝癌作用。     

苦参碱衍生物抗关节炎作用研究

目的 研究苦参碱衍生物M19对二型胶原诱导性大鼠关节炎（CIA）的治疗作用。方法 将60只大鼠随机分为6组,分别为空白组,模型组,吲哚美辛治疗组,M19低、中、高剂量（2.5、5、10 mg/kg）组。采用二型胶原诱导建立关节炎模型,分别对大鼠足趾肿胀和体重进行测定并对关节炎进行评分,HE染色观察大鼠关节软骨及滑膜组织病理变化,Micro-CT观察大鼠骨关节组织损伤情况。结果 苦参碱衍生物M19各剂量组均能不同程度降低大鼠关节炎足趾肿胀程度,增加体重,抑制大鼠关节炎性细胞浸润和滑膜增生,并对骨组织具有一定的保护作用。结论 苦参碱衍生物M19对二型胶原诱导的关节炎具有一定的治疗作用。