补骨脂酚通过MAPK途径诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究

目的:研究补骨脂酚对人肝癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:应用噻唑蓝法（MTT法）和倒置显微镜技术考察补骨脂酚对HepG2细胞生长的影响；采用荧光显微镜观察补骨脂酚处理后细胞凋亡；利用蛋白免疫印迹法检测补骨脂酚对HepG2细胞中凋亡相关蛋白及MAPK家族蛋白表达的影响；引入MAPK家族蛋白抑制剂考察生长抑制率和凋亡相关蛋白表达的变化。结果:补骨脂酚可以剂量依赖性地抑制人肝癌HepG2细胞增殖，其生长抑制作用明显强于临床上常用的抗肿瘤药5-氟尿嘧啶，并且补骨脂酚对人正常肝L02细胞具有较低的毒性。进一步研究发现，补骨脂酚可以诱导HepG2细胞发生凋亡。此外，MAPK家族参与到补骨脂酚诱导的HepG2细胞凋亡过程中，补骨脂酚可以剂量依赖性激活JNK的表达发挥促凋亡的作用，同时抑制了ERK促存活通路，然而对p38无明显影响。结论:本研究首次阐明了补骨脂酚诱导人肝癌HepG2细胞生长抑制作用机制，为进一步的临床应用提供了理论依据。     

小链霉菌HCCB10043中鸟氨酰脂类物质的鉴定及其生物合成基因的研究

目的对首次从达托霉素产生菌小链霉菌(Streptomyces parvus)HCCB10043发酵液中分离得到的2个同系物,并进行结构鉴定,并研究其生物合成基因lyw A的功能。方法利用制备型液相色谱仪制备化合物1和化合物2,经质谱比对分析鉴定2个化合物的结构;采用同源重组方法敲除lyw A基因,并进行发酵验证。结果鉴定化合物1和化合物2为2个鸟氨酰脂类物质的前体,分别为N-α-3-hydroxy palmitoyl ornithine和N-α-3-hydroxy heptadecanealkanoyl ornithine;而缺失突变株的发酵液中不含化合物1和化合物2。结论 lyw A基因为小链霉菌中鸟氨酰脂类物质的合成基因。     

去氢毛钩藤碱在大鼠体外肠道菌群中代谢产物的鉴定

目的研究去氢毛钩藤碱在大鼠体外肠道菌群中的代谢途径,阐明肠道菌群对去氢毛钩藤碱吸收和代谢的影响。方法采用UPLC/Q-TOF MS技术,鉴定并推测了去氢毛钩藤碱在大鼠体外肠道菌群培养液中的代谢产物。采用HSS C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以乙腈(A)-体积分数0.2%甲酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱,流速为0.5 m L·min-1,采用ESI离子源,正离子模式下检测。结果通过色谱保留时间及质谱碎片等信息,在大鼠肠道菌群中鉴定了原型化合物去氢毛钩藤碱,以及经还原、氮氧化和羟基化反应后得到的3个微量代谢产物。结论建立了采用UPLC/Q-TOF MS技术鉴定去氢毛钩藤碱在大鼠体外肠道菌群中代谢产物的方法,为吲哚类生物碱在体内吸收和代谢机制的研究提供试验依据。     

酒石酸美托洛尔四种时间依赖型延迟释药片的制备

目的比较四种酒石酸美托洛尔时间依赖型延迟释药片(time-dependent delayed release tablets,TDDT)体外释放性质,为时间依赖型经口给予延迟释药片的应用提供理论依据。方法四种时间依赖型延迟释药片片芯以羧甲基淀粉钠和Na Cl为基础,采用聚乙二醇骨架片增加膜溶解物质聚乙二醇,采用蜡质膨胀骨架片增加膨胀剂半合成脂肪酸酯,采用有机酸基质片增加膜溶解物质酒石酸。均以Eudragit~NE 30D作为片芯控释包衣。结果固定片芯中羧甲基淀粉钠和Na Cl的用量,TDDT和蜡质膨胀骨架TDDT突释效果较明显,聚乙二醇TDDT和有机酸TDDT突释效果不明显,但后三者释药时滞稳定且批内溶出相似因子较高。聚乙二醇TDDT批内溶出相似因子略低于蜡质膨胀骨架TDDT和有机酸TDDT。结论增加蜡质骨架膨胀基质药物可突释且批内释药相似;增加控释膜溶解成份聚乙二醇和有机酸,药物无明显突释,但批内释药相似。     

中药材中血管紧张素转化酶抑制剂的筛选及其有效成分预测

目的以金银花等16味中药材为研究对象,建立毛细管区带电泳法用于血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)中药抑制剂的快速筛选,并采用分子对接技术对产生抑制活性的有效成分进行预测。方法采用毛细管区带电泳法检测酶孵育产物的质量浓度,通过与空白组比较,确定中药水提液对ACE的抑制活性。采用Autodock软件对酶抑制效果较好的中药提取液主要化学成分进行分子对接,预测产生酶抑制作用的有效成分,并采用文献报道的实测数据与预测结果进行比较,对试验的可行性进行佐证。结果建立的测定ACE活性的毛细管区带电泳法可用于16种中药水提液对ACE抑制剂的筛选。试验结果显示所研究的中药提取液中金银花的活性最强,并且分子对接结果表明,金银花中可能有7种化学成分对ACE有抑制作用,其中4种成分的抑制活性已有文献报道。结论将毛细管区带电泳法结合分子对接技术用于从中药成分中高通量筛选ACE抑制剂是一种有效的途径。     

酿酒葡萄多酚含量及抗氧化活性分析

目的建立简单、高效的葡萄多酚分析方法,从多酚含量和抗氧化活性方面综合评价酿酒葡萄品种特性。方法以酿酒葡萄美乐、赤霞珠、康贝尔为研究对象,采用比色法测定总含量,HPLC法测定16种单体酚含量,DPPH、ABTS和FRAP三种方法测定葡萄多酚抗氧化活性。结果三种酿酒葡萄中,美乐多酚种类最多且含量均较高,原花青素单体及二聚体含量均大于102.70μg·g~(-1)FW;赤霞珠中总花色苷含量最高,牵牛花色素-3-O-葡萄糖苷含量高达979.90μg·g~(-1) FW;酚酸和黄酮类化合物在康贝尔中含量较高。抗氧化结果表明,美乐多酚抗氧化性最强,赤霞珠最弱,活性的强弱是各多酚组分共同作用的结果。结论本研究所建立的多酚含量分析和抗氧化测定方法,为酿酒葡萄品种特性的综合评价提供了理论依据。     

注射用丹参多酚酸UPLC的指纹图谱与组分分析

目的建立注射用丹参多酚酸的UPLC指纹图谱分析方法,并结合Q-TOF-MS法及IT-TOFMS法对其化学成分进行定性分析。方法采用水(含体积分数0.2%甲酸)-乙腈(含体积分数2%甲醇)为流动相,梯度洗脱,采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C_(18)(150 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,同时采用LC-Q-TOF-MS法提供的化合物准确相对分子质量和LC-Q-TOF-MS法分析获得的化合物多级质谱信息对注射用丹参多酚酸进行成分分析。建立了注射用丹参多酚酸的UPLC指纹图谱集与共有模式,并以夹角余弦与相关系数对21批注射用丹参多酚酸样品进行相似度评级。结果鉴定酚酸类化合物23个;21批样品的相似度均大于0.960,确立了指纹图谱共有模式中的23个特征吸收峰。结论本方法可用于注射用丹参多酚酸的质量控制。     

HPLC法同时测定神康宁丸中4种成分的含量

目的建立RP-HPLC法同时测定神康宁丸中斯皮诺素、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B 4种成分的含量。方法采用高效液相色谱法(HPLC),以Platisil ODS(250mm×4.6mm,5mm)为分析柱,乙腈-体积分数为0.1%的磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速:1.0mL·min-1,柱温:40℃,检测波长:340nm,进样量:20μL。结果斯皮诺素、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B的质量浓度分别在1.032~10.32、0.460 0~4.600、1.736~17.36和21.12~211.2mg·L-1内与峰面积呈良好的线性关系(r≥0.999 6,n=6)。斯皮诺素、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B平均回收率分别为100.9%、101.3%、100.4%和99.8%(RSD≤1.5%,n=9)。结论所建立的HPLC法可用于神康宁丸的质量控制。     

角类药材组织切片方法的改进

目的改进制作角类药材组织切片的技术方法。方法采用滑走切片对角类药材进行常规切片取材,用质量分数为1%的番红溶液染色,用蒸馏水冲洗,用无水乙醇-冬青油(体积比为1∶1)溶液透明,最后用加拿大树胶封藏。结果采用此方法制片并在显微镜下观察发现,切片组织结构完整、细胞形态清晰、染色效果好,药材皮层组织、间质组织以及髓腔都清晰可见。结论该方法可为角类药材的真伪鉴别及教学质量的完善提供参考。     

京大戟醋制前后UPLC指纹图谱及含量测定的比较

目的建立京大戟、醋大戟的超高效液相色谱指纹图谱,并同时测定其中胡萝卜苷和大戟二烯醇的含量。方法采用UPLC-DAD法,Kromat Universil XB C8色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.8μm),检测波长:203 nm,柱温:30℃,以乙腈-水为流动相进行二元梯度洗脱,流速为0.2 m L·min~(-1)。建立京大戟、醋大戟指纹图谱,采用国家药典委员会颁布的"中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件"(2009)对来源全国10个产地的京大戟、醋大戟进行分析评价,并对其中2个色谱峰进行指认及含量测定。结果 10批京大戟指纹图谱中标定了23个共有色谱峰,相似度值为0.910~0.993。10批醋大戟指纹图谱中标定了18个共有色谱峰,相似度值为0.900~0.987。胡萝卜苷和大戟二烯醇质量浓度分别在6.8~68.0 mg·L~(-1)和5.8~58.0 mg·L~(-1)内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率分别为98.2%和98.4%。结论该法所建立的指纹图谱可为京大戟石油醚部位的质量评价和京大戟醋制减毒研究提供一定参考。