液相色谱串联质谱法测定人体血清中的类固醇激素

目的：建立一种能同时测定血清中6种类固醇激素［包括孕酮（P）、17-羟基孕酮（17-OHP）、皮质醇（COL）、去氢表雄酮（DHEA）、双氢睾酮（DHT）、硫酸去氢表雄酮（DHEAS）］的快速、灵敏的高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）方法。方法：血清样本经甲基叔丁基醚液液萃取,高速离心后上清液氮气吹干,加入复溶液后上机检测。采用安捷伦C18（100 mm × 2.1 mm,1.8 μm）色谱柱进行分离,水相A为纯水,有机相B为纯甲醇,质谱采用电喷雾电离（ESI）模式进行离子化,多反应监测模式（MRM）扫描,同位素稀释法进行定量分析。结果：血清中6个类固醇激素检测限（LOD,以信噪比（S/N）≥3为标准）为0.03～1.25 ng·mL-1;定量限（LOQ,以信噪比（S/N）≥10为标准）为0.05～2.50 ng·mL-1;在0.05～4000 ng·mL-1范围内线性关系良好,相关系数（r）≥0.995 0;低浓度样本日内精密度为2.4%～6.2%;中浓度样本日内精密度为2.3%～5.7%;高浓度样本日内精密度为1.3%～5.4%。低浓度样本日间精密度为0.4%～2.6%;中浓度样本日间精密度为0.3%～3.9%;高浓度样本日间精密度为0.2%～4.7%。加标回收率为86%～106%。结论：建立一种能同时测定血清中6个类固醇激素的HPLC-MS/MS方法。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强,可在6.5 min之内完成分离和检测,适用于人体血清中多种类固醇激素含量的定量分析。