星点设计-效应面法优化壳聚糖微球对凝血酶的固定化作用研究

目的 考察壳聚糖微球对凝血酶的固定化作用。方法 本研究以壳聚糖微球为载体,以戊二醛为交联剂将凝血酶固定于空白微球上,以固定化凝血酶的活性回收率为指标,采用星点设计-效应面法优化固定凝血酶的条件。结果 试验结果表明,壳聚糖微球固定凝血酶的最优条件是：凝血酶浓度69.32 U·mL^-1、戊二醛浓度0.18%、固定化时间1.88 h、固定化pH 7.08,凝血酶的活性回收率为81.55 %。结论 壳聚糖微球对凝血酶的固定化效果良好。     

酪蛋白抗凝血肽的分离纯化及其抗凝血活性测定

本实验通过比较混合酶解和复合酶解酪蛋白的水解液活性,获得抗凝血活性最高的组合,为“菠萝蛋白酶+胰蛋白酶+中性蛋白酶+木瓜蛋白酶”复合酶解酪蛋白组。然后选择截留分子量为1 kD和3 kD的超滤膜对抗凝血活性最高的组合进行超滤,实验结果表明截留分子量为1 kD的超滤浓缩液抗凝血活性最高。对超滤浓缩液进行抗凝血实验,实验结果表明,兔血︰1 kD浓缩液（V︰V）= 6︰4和兔血︰1kD浓缩液（V︰V）=1:1组合都是48 h后血液没有凝固;体外溶栓实验表明,置于浓缩液中的血栓条24 h后红色褪去,证明1 kD超滤浓缩液具有较好的溶栓和抗凝血作用。对1 kD超滤浓缩液进行脱盐,然后采用凝胶色谱法进行分子量分布测定,由数据分析可知分子量主要集中在500～180、1 000～500、2 000～1 000范围。     

等鞭金藻多肽IEC对脂多糖诱导血管内皮炎症的保护作用研究

目的 探究氨基酸序列为Ile-Ile-Ala-Val-Glu-Ala-Gly-Cys的等鞭金藻多肽IEC对LPS诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）炎症反应的保护作用。方法 用噻唑蓝（MTT）法确定细胞活力,DCFH-DA探针法和DAF-FM DA探针法分别测定活性氧（ROS）和NO的表达情况,蛋白免疫印迹法检测细胞间Toll样受体（TLR4）、一氧化氮合酶（NOS-2）和环氧合酶（COX-2）蛋白的表达水平,酶联免疫吸附法测定白细胞介素-6 （IL-6）和肿瘤坏死因子（TNF-α）的释放量以及分子对接分析IEC与COX-2、TLR-4蛋白的相互作用。结果 MTT法证明IEC对HUVEC细胞无明显毒性作用(P>0.05);与对照组相比,随着实验组多肽浓度增加,可以明显降低ROS和NO的释放(P<0.05),炎症相关细胞因子TLR-4、COX-2、NOS-2和IL-6、TNF-α的表达也明显逐渐减少(P<0.000 1);分子对接结果表明,IEC与COX-2、TLR4能形成稳定的化学键,说明存在相互作用的可能性。结论 IEC具有良好的抑制ROS和NO生成效果,并可明显抑制TLR-4/NOS-2/COX-2信号通路的激活以及抑制炎症因子的表达,是潜在的炎症抑制剂。     

褐藻苷苔多酚7-Polyphenol-Ecklonia抑制肿瘤转移和血管新生的研究

目的 探究海洋褐藻苷苔(Ecklonia cava)多酚7-polyphenol-ecklonia(7PE)对肿瘤侵袭转移和血管生成的影响。方法 采用细胞毒性实验检测7PE分别对人成纤维肉瘤细胞(HT-1080)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的毒性作用;划痕实验检测7PE对HT-1080细胞的迁移能力影响;明胶酶谱法和ELISA检测HT-1080细胞的金属基质蛋白酶-2/9(MMP-2/9)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达水平;成管实验检测7PE对HUVEC成管的作用;分子对接模拟7PE与MMP-2/9和HIF-1α蛋白的相互作用。结果 7PE明显抑制HT-1080的迁移和MMP-2、MMP-9、VEGF和HIF-1α蛋白的表达;且能明显抑制HUVEC成管能力;此外与MMP-2/9和HIF-1α能形成稳定的相互作用。结论 7PE可抑制肿瘤细胞转移和血管新生,可作为研发抗肿瘤药物的活性物质。     

酪蛋白抗凝血肽的分离纯化及其抗凝血活性测定

目的 本论文采用复合酶解法制备酪蛋白抗凝血肽,然后对其进行了分离及抗凝血活性测试。方法 本实验通过比较混合酶解和复合酶解酪蛋白的水解液活性,获得抗凝血活性最高的组合,为“菠萝蛋白酶+胰蛋白酶+中性蛋白酶+木瓜蛋白酶”复合酶解酪蛋白组。然后选择截留分子量为1 kD和3 kD的超滤膜对抗凝血活性最高的组合进行超滤,实验结果表明截留分子量为1 kD的超滤浓缩液抗凝血活性最高。结果 超滤浓缩液进行抗凝血实验,实验结果表明,兔血︰1 kD浓缩液(V︰V)=6︰4和兔血︰1kD浓缩液(V︰V)=1︰1组合都是48 h后血液没有凝固;体外溶栓实验表明,置于浓缩液中的血栓条24 h后红色褪去,证明1 kD超滤浓缩液具有较好的溶栓和抗凝血作用。1 kD超滤浓缩液进行脱盐,然后采用凝胶渗透色谱法进行分子量分布测定,由数据分析可知分子量主要集中在500～180、1 000～500、2 000～1 000范围。结论 按照本实验方法制备的酪蛋白抗凝血肽具有较好的溶栓和抗凝血作用。     

瘢痕疙瘩的治疗研究进展

瘢痕疙瘩因其治疗存在一定的复发性，是世界医学领域上的一大难题。尽管有大量关于瘢痕疙瘩的研究，但至今仍未有完全有效的治疗方法，而且对瘢痕疙瘩的形成机理还未完全掌握。本文就瘢痕疙瘩治疗方法的主要研究进展进行简要的综述。     

星点设计-效应面法优化复合酶解酪蛋白制备抗凝血肽的工艺研究

目的 本文利用星点设计-效应面法优化复合酶解酪蛋白制备抗凝血肽的工艺条件,并测定其体外抗凝血活性与溶栓效果。方法 首先运用星点设计-效应面法来确定菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、胰糜蛋白酶和木瓜蛋白酶这四种酶各自酶解酪蛋白的最佳反应条件,然后在各酶的最佳反应条件下对酪蛋白进行复合酶解,制得酪蛋白复合酶解液,再运用凝血酶滴定改进法来测定其体外抗凝血活性,并用抗凝血活性最高的酪蛋白复合酶解液进行体外溶栓实验。结果 四种酶酶解酪蛋白的最佳反应条件分别如下:菠萝蛋白酶:pH为6.50、温度为60.00 ℃、酶用量为12 000.00 U/(g底物)、时间为3.00 h、料水比为1:7(m/V);胰蛋白酶和胰糜蛋白酶均为:pH为8.00、温度为50.00 ℃、酶用量为6 000.00 U/(g底物)、时间为3.00 h、料水比为1:7(m/V);木瓜蛋白酶:pH为6.50、温度为60.00 ℃、酶用量为4 000.00 U/(g底物)、时间为3.00 h、料水比为1:7(m/V)。结论 本实验条件下,加酶组合为“菠萝蛋白酶-胰蛋白酶-胰糜蛋白酶-木瓜蛋白酶”的复合酶解制备的酪蛋白酶解液具有最高的体外抗凝血活性,为100.0 ATU/mL;新西兰大白兔的血栓线用100.0ATU/mL的酶解液浸泡24 h后全部溶解,且兔血与100.0 ATU/mL酪蛋白酶解液的比例(V/V）为1:1和4:6的样品组放置48 h仍不凝固。     

积雪草苷-海藻酸钠修复贴的制备及其创伤修复作用研究

目的制备积雪草苷-海藻酸钠修复贴(As-SA RP)并评价其对皮肤创伤修复的效果。方法利用海藻酸钠与Ca2+交联成膜的特点,以积雪草苷为药物模型,通过与海藻酸钠共混的方式成功制备了As-SARP,采用扫描电子显微镜及红外光谱考察共混膜的相容性,并用新西兰大耳兔背部脊柱两侧的全层皮肤建立创伤模型,通过观察各组家兔受损皮肤的愈合状况并测定其受损皮肤组织中胶原(羟脯氨酸作为指标)和促炎症因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)的表达水平以考察外敷As-SA RP对皮肤创面的修复效果。结果积雪草苷与海藻酸钠具有良好的相容性,可成功制备As-SA RP修复贴。相较于其他组,As-SA RP处理后皮肤受损处的红肿、出血、感染、渗出液情况明显减少,创面愈合率也相对升高。病理结构显示As-SA RP组家兔皮肤中炎性细胞浸润较少、新生的毛细血管较多、创面皮肤结构较完整且胶原纤维排列相对紧密有序。同时,生化分析结果显示As-SA RP能有效抑制受损皮肤组织中促炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的高表达,并可明显增高其中羟脯氨酸及胶原纤维含量。结论 As-SARP可在一定程度上提升皮肤对积雪草苷的吸收,进而表现出比活性组分更好的皮肤损创伤修复效果。