miR-374a-3p靶向Syk对ox-LDL诱导内皮细胞损伤及炎症反应的影响

目的探讨miR-374a-3p对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤及炎症反应的影响及作用机制。方法实验分为ox-LDL组、对照(Con)组、miR-NC组、miR-374a-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-374a-3p组、ox-LDL+miR-NC组、ox-LDL+miR-374a-3p组、ox-LDL+si-NC组、ox-LDL+si-Syk组、ox-LDL+miR-374a-3p+pcDNA3.1组、ox-LDL+miR-374a-3p+pcDNA3.1-Syk组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-374a-3p表达水平;蛋白质印迹(Western Blot)检测脾酪氨酸激酶(Syk)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量水平;荧光素酶报告实验检测miR-374a-3p和Syk的靶向关系。结果 ox-LDL作用的HUVEC中miR-374a-3p低表达,Syk高表达;细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,TNF-α、IL-6含量显著升高(P<0.05)。过表达miR-374a-3p和抑制Syk表达抑制ox-LDL作用的HUVEC凋亡和炎症因子TNF-α、IL-6的释放。miR-374a-3p靶向调控Syk,过表达Syk逆转了miR-374a-3p对ox-LDL作用的HUVEC损伤及炎症因子释放的抑制作用。结论过表达miR-374a-3p可抑制HUVEC凋亡和炎症因子的释放,保护ox-LDL引起的HUVEC损伤及炎症反应,其机制可能与Syk有关。     

siRNA介导低表达VEGF、SDF-1对 血管内皮细胞增殖和凋亡的影响研究

目的 研究小干扰RNA(siRNA)介导低表达基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)对血管内皮细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用体外实验培养人血管内皮细胞,细胞分别经siRNA介导下调表达SDF-1、VEGF处理,随机分为空白对照组(未进行任何转染)、阴性对照组(转染非特异性对照)、转染SDF-1-siRNA组、转染VEGF165-siRNA组。各组分别经相应处理。通过免疫印迹法测定细胞SDF-1和VEGF165蛋白的表达水平,用MTT实验测定人血管内皮细胞增殖情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 空白对照组与阴性对照组SDF-1和VEGF165蛋白表达水平的比较,无显著差异(P 0. 05);相比空白对照组和阴性对照组,转染SDF-1-siRNA组细胞中SDF-1蛋白的表达水平显著下调(P 0. 01),VEGF165蛋白表达并无显著差异(P 0. 05);相比空白对照组和阴性对照组,转染VEGF165-siRNA组SDF-1和VEGF165蛋白表达水平均显著下调(P 0. 01);转染VEGF165-siRNA组SDF-1蛋白表达水平显著高于转染SDF-1-siRNA组,VEGF165蛋白表达水平显著低于SDF-1-siRNA组(P 0. 01)。空白对照组与阴性对照组细胞细胞凋亡率的比较,并无显著差异(P 0. 05);转染SDF-1-siRNA组、转染VEGF165-siRNA组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均显著高于空白对照组和阴性对照组(P 0. 01),转染VEGF165-siRNA组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均显著高于转染SDF-1-siRNA组(P 0. 01)。结论 SDF-1和VEGF165基因均可增强人血管内皮细胞增殖能力,阻滞细胞凋亡,从而参与糖尿病血管病变的病理过程,同时该病理过程中VEGF165具有调节SDF-1表达水平的作用。     

血管内皮生长因子及低氧诱导因子 -1α与糖尿病合并动脉狭窄病人支架植入术后再狭窄的关系研究

目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)与糖尿病合并动脉狭窄病人支架植入术后再狭窄关系.方法 选取2016年9月至2018年2月华中科技大学同济医学院附属梨园医院糖尿病合并动脉狭窄病人188例,均行动脉支架植入治疗,支架植入前检测病人血清VEGFA及HIF-1α,糖、脂代谢指标及血清C反应蛋白(CRP),对病人追踪随访6个月,按是否发生冠脉再狭窄分为再狭窄组98例,未再狭窄组90例,比较两组病人VEGF及HIF-1α,糖、脂代谢指标及血清CRP水平差异,采用logistic分析糖尿病合并动脉狭窄病人支架植入术后再狭窄的风险因素.采用Pearson检验分析VEGF、HIF-1α与CRP的相关性.绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),分析VEGFA及HIF-1α对糖尿病合并动脉狭窄病人支架植入术后再狭窄的预测效能.结果 再狭窄组及未再狭窄组病人血清糖化血红蛋白(HbA1c)≥7.2％、总胆固醇(TC)≥5.7 mmol/L、VEGF≥106.4 pg/mL、HIF-1α≥217.4 ng/mL、小而密低密度脂蛋白胆固醇(sLDLc)≥3.4 mmol/L、CRP≥11.6 mg/L、病变在分支动脉,支架植入长度≥3.4 cm、支架数目为2个及以上、支架直径<4.2 mm所占比例差异有统计学意义(63/98比34/90,64/98比31/90,61/98比31/90,63/98比27/90,62/98比40/90,62/98比17/90,71/98比41/90,62/98比34/90,26/98比10/90,71/98比31/90,均P<0.05).多因素logistic回归分析结果显示,VEGF、HIF-1α、HbAH1c、CRP水平是动脉支架植入术后再狭窄的独立风险因素,支架直径是保护性因素(P<0.05).相关分析结果显示,VEGF、HIF-1α与CRP水平呈现正相关关系(P<0.05).VEGF、HIF-1α、CRP对糖尿病合并动脉狭窄病人支架植入术后再狭窄的评估效能:ROC-AUC(95％CI)分别为0.665(0.412～0.916)、0.761(0.552～0.971)、0.636(0.323～0.944).结论 糖尿病合并动脉狭窄病人血清VEGF、HIF-1α水平与支架植入术后再狭窄密切相关,检测血清VEGF、HIF-1α水平对冠脉再狭窄的发生具有较好的预测价值.