海绵共附生真菌Penicillium chrysogenum次级代谢产物的化学成分及生物活性研究

目的 对分离自西沙隋氏蒂壳海绵共附生真菌Penicilliumchrysogenum的次级代谢产物进行化学成分及其生物活性研究,以期发现结构特异并且活性良好的次级代谢产物。方法 对隋氏蒂壳海绵共附生真菌Penicilliumchrysogenum用真菌2号培养基发酵,发酵后的菌丝体采用溶剂提取、萃取和现代色谱分离纯化手段,再运用现代核磁波谱技术并结合高分辨质谱鉴定化合物结构。基于微阵列技术的表面等离子体共振成像（SPRi）系统,检测化合物与肿瘤相关蛋白的相互作用,并提供化合物与肿瘤相关蛋白的结合动力学数据。结果 通过分离隋氏蒂壳海绵共附生真Penicilliumchrysogenum的菌丝体提取物,从中分离鉴定了7个单体化合物,鉴定结果为conidiogenone（1）、2-acetylquinazolin-4(3H)-one（2）、15β-hydroxyl-(22E,24R)-ergosta-3,5,8,22-tetraen-on（3）、ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one（4）、 2-((2E,4E)-hexa-2,4-dienoyl)-5,6-dihydroxy-4,6-dimethylcyclohex-4-ene-1,3-dione（5）、(22E)-5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol（6）、2-(1-hydroxyethyl)quinazolin-4(3H)-one（7）。结论 化合物3和6是从Penicillium属内第一次分离得到,化合物4是从真菌Penicilliumchrysogenum中第一次分离得到,化合物5与肿瘤蛋白VEGFR-1、FGFR有亲和作用,KD的数值分别为7.78×10-3和1.44×10-1 μmol/L。     

比格犬体内FGFC1药物代谢动力学特征及组织分布的研究

目的用高效液相色谱法(HPLC)对海洋新型纤溶化合物FGFC1(fungi fibrinolytic compound 1)的药物代谢动力学和组织分布进行成药性的初步评价。方法分析柱HPC18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);柱温为40℃;流动相为乙腈-水(0.1%三氟乙酸)45∶55(V/V)和85∶15(V/V),流速1 m L·min-1;检测波长265 nm。前肢静脉给予比格犬3种剂量(7.5、5.0、2.5 mg·kg-1)的FGFC1,于不同的时间点取血,用HPLC测定血浆和组织中FGFC1的浓度并计算其药物代谢动力学参数和组织分布情况。结果 FGFC1的消除半衰期(T1/2β)分别为(49.035±2.171)、(48.422±2.113)及(48.811±2.372)min;达峰浓度Cmax分别为(56.48±6.23)、(48.63±5.53)、(13.64±2.76)mg·L-1;机体总消除率(CL)分别为(0.006 2±0.000 4)、(0.007 1±0.000 8)、(0.009 2±0.000 6)L·min-1·kg-1;平均保留时间(MRT)分别为(28.17±1.16)、(26.23±0.35)、(28.66±0.84)min。组织分布研究结果表明FGFC1在静脉给药后迅速分布到全身各处,最高药物浓度水平在肝脏中检出。结论FGFC1在比格犬体内呈现良好的药代动力学特性和组织分布特点,表现出较高的成药性特征,值得进一步研究。     

传言“袋泡茶的原料是茶渣” 专家：袋泡茶的安全性不输散装茶

袋泡茶；中泡方便卫生、清洗简单，因此广受年轻白领的欢迎。但国人干百年来的饮茶传统对茶叶的形状要求极高，近期网络上传言称：“袋泡茶都是用茶渣烘干制成的，不少品牌袋泡茶使用回收茶和二次茶……”这些负面消息让袋泡茶“躺着中枪”。究竟袋泡茶的茶叶是如何加工而成？平日里饮用又是否安全、健康？带着这样的疑问，我们请教了上海海洋大学食品学院教授周培根。     

电子自旋共振波谱法对鲍鱼的辐照鉴定研究

目的建立检测鉴定辐照鲍鱼的电子自旋共振(ESR)波谱法。方法采用电子自旋共振波谱法研究辐照鲍鱼ESR波谱特征和定量特征峰。结果未经辐照和辐照鲍鱼ESR图谱差异明显;未经辐照鲍鱼的g值范围:g=2.0055～2.0060;辐照鲍鱼的g1值范围:g1=(2.0027±0.0001),g2值范围:g2=(1.9994±0.0001);在0.5～10kGy范围内,ESR特征峰信号强度与吸收剂量成正相关,左侧峰为定量特征峰,检测限≤0.5kGy;吸收剂量高于10kGy时则难以定量;ESR特征峰和g值可定性判定鲍鱼是否经过辐照处理。结论 ESR波谱法是鉴定辐照鲍鱼的有效方法。     

鲢鱼小清蛋白的分离纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗鲢鱼主要过敏原小清蛋白的单克隆抗体,并对其基本特性进行鉴定。方法:采用硫酸铵盐析、离子交换柱层析和凝胶过滤柱层析等方法纯化鲢鱼小清蛋白;以纯化的小清蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗鲢鱼小清蛋白单克隆抗体;通过ELISA法确定抗体亚型;通过腹水诱生法大量制备单克隆抗体;以Protein G Sepharose亲和层析柱纯化制备的单克隆抗体;运用Western blot鉴定单克隆抗体的特异性;以ELISA法分析单克隆抗体的结合位点。结果:从100 g鲢鱼肌肉中可获得约30 mg高纯度小清蛋白;SDS-PAGE结果表明,得到的抗小清蛋白单克隆抗体(A4-C1)纯度较高,亚类为IgG1;Western blot结果显示,A4-C1只与鱼肉粗提物中的小清蛋白产生反应,特异性良好;ELISA分析表明,制备的抗鲢鱼小清蛋白单克隆抗体与商品化抗蛙小清蛋白单克隆抗体(PARV-19)的结合位点可能具有很大部分的重叠,或者存在较大的空间位阻效应。结论:研究中制备的杂交瘤细胞株能稳定分泌高特异性的抗鲢鱼小清蛋白单克隆抗体,可用于后续淡水鱼类小清蛋白检测方法的建立。     

老有所“养”贵在膳食管理

谁最容易营养失衡 肥胖者在“食不厌精、脍不厌细”的今天,很多人,尤其是肥胖人群早就把“营养不良”四个字抛诸脑后。而事实上,营养不良的准确定义是“营养缺乏、过多或不平衡的总称”。营养低下和营养过剩都是营养不良的范畴。营养低下是指由于长期缺乏一种或多种营养素所造成的严重营养不足情况,并因此出现了相应的临床表现或病症,实为营养缺乏病;而营养过剩则是指由于食物与营养物质的摄入超过了机体的生理需要,而表现在体内过多堆积,造成肥胖等情况。所以很多肥胖人群往往自认为营养不良与自己毫不相关,而事实也恰因为这一观念让这部分人陷入营养不良的陷阱。     

海绵共附生真菌Nigrospora sp.的次级代谢产物及PD-1/PD-L1抑制活性研究

目的 研究海绵Callyspongia sp.共附生真菌Nigrospora sp.中化学成分以及生物活性。 方法 利用正相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备型反相高效液相色谱(RPLC)等方法对该菌株乙酸乙酯提取物进行分离纯化;通过核磁共振谱(NMR)、质谱(MS)等技术并结合文献报道数据分析鉴定化合物结构;采用均相时间分辨荧光(HTRF)法检测化合物的PD-1/PD-L1结合抑制活性。结果 分离得到7个已知化合物,分别为punctaporonin D (1),punctaporonin E (2),punctaporonin F (3),desuccinoylpunctaporonin C (4),(20S, 22E, 24R)-麦角甾-7, 22-二烯-3β, 5α, 6β-三醇 (5),(22E, 24R)-麦角甾-3β-羟基-5α, 9α-环氧-7, 22-二烯-6-酮 (6),麦角甾-7, 22-二烯-6β-甲氧基-3β, 5α-二醇 (7)。在体外生物活性检测中,化合物6显示出PD-1/PD-L1结合抑制活性,其IC50值为22.5 μmol/L。结论 化合物4为新天然产物,化合物1-3和化合物6为首次从该属真菌中分离得到。化合物6显示PD-1/PD-L1结合抑制活性。     

中药单体逆转紫杉醇耐药作用机制的研究进展

紫杉醇是多种癌症的一线化疗药物,但其耐药性的产生使得其后期治疗疗效大大降低,增加了癌症患者的死亡率及复发率,严重限制了其临床应用。目前,临床上的一些中药复方、中成药、中药注射液等辅助化疗药物治疗癌症患者的应用已十分广泛,中药在提高化疗药物疗效、降低化疗不良反应及改善预后等方面均展示出独特的优势,但其发挥逆转化疗药物耐药的作用机制及有效单体成分尚未明确,在不同癌症类型的应用方面也十分局限,值得进一步挖掘和探究。该文总结了近年与紫杉醇联用具备协同抗肿瘤疗效的中药单体成分,并分类列举了其发挥逆转紫杉醇耐药作用的具体机制及药理活性,发现中药单体不仅通过作用于膜转运蛋白促进紫杉醇在肿瘤细胞内的蓄积、抑制多药耐药相关蛋白及代谢酶表达抑制紫杉醇的代谢、调控细胞凋亡基因、因子水平及凋亡相关通路促进紫杉醇发挥细胞增殖抑制作用,还可通过调控微小RNA（microRNA）及长链非编码RNA（lncRNA）表达水平、抑制肿瘤干细胞特性及肿瘤代谢重编程、改善肿瘤微环境、触发肿瘤细胞死亡性自噬及氧化应激反应等方面显著提高紫杉醇的化疗敏感性,为明确中药单体联合紫杉醇抗肿瘤的具体机制提供理论基础,对中药新药开发及临床寻找紫杉醇的联合用药具有重要意义,也对中药与其他化疗药物联合应用的探究具有一定参考价值。     

通关藤中4种C21甾体化合物逆转卵巢癌细胞紫杉醇耐药的作用评价

目的 评价通关藤中4种C₂₁甾体化合物(通关藤苷I、通关藤苷G、通关藤苷H和17β-通关藤苷元B)对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol(A2780/T)耐药的逆转作用及相关机制。方法 将人卵巢癌A2780/T细胞分为对照组、C₂₁甾体单用组、紫杉醇单用组、C₂₁甾体联合紫杉醇组(1:1),MTT法检测细胞增殖能力,中效原理分析两药联用效应(Fa)与合用指数(CI)的关系;划痕实验观察细胞迁移能力;流式细胞术及Hoechst 33258染色检测细胞周期和凋亡情况;RT-PCR、Western blot法分别检测ABCB1、SLC4A2、SLCO1A2 mRNA及P-gp表达水平;药物外排实验检测A2780/T细胞内紫杉醇及罗丹明123的蓄积量。结果 4种C₂₁甾体单用或与紫杉醇联用均能抑制A2780/T细胞增殖,且呈剂量依赖效应。通关藤苷G、通关藤苷H与紫杉醇联用48 h具有协同效应,能够显著抑制A2780/T细胞迁移、阻滞细胞于G2/M期、促进细胞凋亡,显著抑制ABCB1、SLC4A2、SLCO1A2 mRNA水平,下调P-gp表达,显著促进了紫杉醇及罗丹明123在A2780/T细胞内的蓄积。结论 通关藤苷G、通关藤苷H与紫杉醇联用均产生协同效应,可逆转人卵巢癌A2780/T细胞对紫杉醇的耐药性,其机制可能与降低基因ABCB1、SLC4A2、SLCO1A2及P-gp的表达水平,促进紫杉醇在A2780/T细胞内蓄积有关。     

3种食源性致病菌共增菌及三重PCR检测

目的 建立沙门菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌三重PCR检测方法。方法 3株菌在本实验室自行研制的共增菌培养基(SSV培养基)混合培养16 h,分别对沙门菌invA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、副溶血性弧菌collagenase基因设计特异性引物,建立三重PCR体系,通过对引物浓度、退火温度及循环次数进行优化,从而建立最优体系,并从特异性、重复性、灵敏性3个方面对体系进行评价。结果 三重PCR体系中,invA、nuc、collagenase引物浓度分别为10、12.5和12.5 nmol/L;最佳退火温度为55.6℃;目标菌的引物特异性好,且体系的检测灵敏度高,3株菌在三重PCR体系中的灵敏度都在10² CFU/mL以上。结论 建立的三重PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好。