何首乌水提物对大鼠肝脏CYP1A2,CYP2E1酶活性及mRNA表达抑制作用研究

大鼠连续灌胃不同剂量的何首乌水提物(1,10g·kg-1)7 d,取肝脏制备肝微粒体,分别用Cocktail体外孵育法和实时荧光定量PCR技术观察何首乌水提物对大鼠肝脏主要CYP450酶活性及mRNA表达的影响.与空白对照组相比,1,10g·kg-1何首乌水提物组大鼠肝脏CYP2E1酶活性和mRNA的表达均受到明显抑制(CYP2E1酶活性,P＜0.01;CYP2E1的mRNA表达1 g·kg-1组P＜0.05,10 g·kg-1组P＜0.01),CYP3A1酶活性虽显示明显升高(P＜0.01),但mRNA的表达没有显著变化;10 g·kg-1何首乌水提物组大鼠肝脏CYP1A2酶活性和mRNA的表达受到明显抑制(P＜0.01).     

柴胡龙骨牡蛎汤高效液相色谱指纹图谱的建立

目的:建立柴胡龙骨牡蛎汤水煎液和正丁醇萃取液的反相高效液相指纹图谱的检测方法。方法:采用高效液相色谱法,Thermo Fisher Hypersil GOLD C18色谱柱,流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,柱温35℃,流速1 m L·min-1,检测波长276,210 nm。结果:分别建立了柴胡龙骨牡蛎汤水煎液和正丁醇萃取液指纹图谱共有模式,并指认其中的共有色谱峰。通过与对照品的保留时间和紫外光谱图比较,水煎液指纹图谱中8,12,14,15号峰分别归属为黄芩苷、肉桂酸、桂皮醛、大黄酸。正丁醇萃取液指纹图谱中16,17,28,29号峰分别归属为人参皂苷Rg1,人参皂苷Re,柴胡皂苷a,柴胡皂苷b2。10批柴胡龙骨牡蛎汤水煎液和正丁醇萃取液的HPLC指纹图谱相似度,均0.88。结论:该方法灵敏度高、稳定性和准确性良好,为柴胡龙骨牡蛎汤质量标准建立提供了可靠的科学依据。     

抗肿瘤雷公藤内酯醇半合成衍生物理化性质及其有关物质的研究

目的研究雷公藤内酯醇半合成衍生物(MC002)的理化性质和有关物质,为剂型设计提供依据。方法采用紫外分光光度法测定MC002在甲醇中的吸收系数;采用红外光谱仪测定MC002的红外吸收光谱;按中国药典2010版二部中溶解度的测定方法测定在不同溶剂中的近似溶解度;采用摇瓶法测定MC002在正辛醇-水、正辛醇-pH=7.4磷酸盐缓冲液中的油水分配系数;用Thiele管测定熔点;采用X-射线粉末衍射法测定其晶型。结果 MC002在甲醇中的吸收系数(E1%)为226.23±29.18;样品红外吸收光谱图与标准品谱图基本一致,易溶于水、甲醇、乙醇、丙酮,微溶于氯仿和乙酸乙酯,在乙醚中极微溶解;在正辛醇-水和正辛醇-pH=7.4磷酸盐缓冲液中的分配系数分别为0.074 0和1.080;熔点为50⁵2℃;X-射线粉末衍射说明MC002为非结晶型粉末。3批有关物质测定均<1%,样品纯度>99%。结论 MC002是一个亲水性很强的盐类药物,本实验确定的MC002部分理化性质和有关物质分析,可为其生物药剂学的研究及剂型设计提供依据。     

吴茱萸次碱对5种黄连生物碱大鼠体外肝代谢的抑制作用

目的 考察吴茱萸主要成分吴茱萸次碱对黄连中5种生物碱肝代谢的抑制作用,为深入研究黄连吴茱萸药对配伍机制提供依据。方法 采用大鼠体外肝微粒体温孵法,考察吴茱萸次碱对黄连中5种生物碱（黄连碱、表小檗碱、小檗碱、巴马汀和药根碱）肝代谢的抑制作用。结果 吴茱萸次碱对黄连碱、表小檗碱、小檗碱、巴马汀、药根碱均存在体外肝代谢抑制作用,半数抑制浓度（IC₅₀）均大于50 μmol/L,表现为体外弱抑制作用;抑制常数（K_i）的差异性具有统计学意义（P<0.05）,抑制作用强弱程度顺序为小檗碱>药根碱>巴马汀>表小檗碱>黄连碱。结论 为了解吴茱萸对黄连生物碱主要作用环节和揭示黄连吴茱萸药对配伍机制提供依据。     

5种黄连生物碱大鼠体外肝代谢特征比较

目的 探讨黄连中5种结构相似异喹啉生物碱大鼠体外肝代谢的选择性。方法 采用大鼠体外肝微粒体温孵方法,通过考察温孵时间、微粒体蛋白浓度以及底物浓度对小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱和药根碱代谢的影响,求得代谢反应动力学参数K_m、V_max和CL_int。结果 5种黄连生物碱成分的体外肝代谢动力学参数K_m和CL_int间差异明显（P＜0.05）。结论 黄连中5种异喹啉生物碱大鼠体外肝代谢存在显著选择性。     

基于标准浸膏-指标成分-药效的多指标综合评分法优化牡蛎散提取工艺

目的 运用基于标准浸膏特征谱图-指标成分-药效的多指标综合评分法确定经方牡蛎散的最佳提取工艺。方法 利用HPLC法建立牡蛎散标准浸膏特征图谱,并建立指标成分毛蕊异黄酮苷的含量测定方法,采用小鼠体外脾淋巴细胞增殖实验评价浸膏的免疫活性;以与标准浸膏特征图谱的相似度、毛蕊异黄酮苷提取率和体外脾细胞增殖率为指标,采用L9（34）正交试验设计法对牡蛎散进行提取工艺优化,运用多指标综合评分法确定最优提取工艺参数。结果 牡蛎散的最佳提取工艺为：药材加8倍量水,浸泡1 h,提取2 h,提取2次。结论 优选的提取工艺合理可靠,适合工业化生产;多指标设计探索将化学与生物活性相结合、特征图谱与指标成分相结合,为经方提取工艺优化研究提供了方法学参考。     

荧光光谱法测定黄芪甲苷及环黄芪醇与牛血清白蛋白相互作用

目的: 采用荧光光谱法研究黄芪甲苷及环黄芪醇与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用机制。 方法: 固定BSA浓度,依次加入不同浓度的黄芪甲苷或环黄芪醇,扫描其荧光猝灭光谱及同步荧光光谱。 结果: 黄芪甲苷和环黄芪醇均能对BSA的荧光发生淬灭,猝灭类型属于静态猝灭;在293 K下,黄芪甲苷和环黄芪醇与BSA的结合常数分别为1.35×10⁴,8.51×10⁴ L·mol^-1,结合位点数n分别为0.726 4,0.731 2,在310 K温度下,二者与BSA的结合常数均略有下降。二者与BSA的结合过程均属于焓变小于零、熵变大于零、吉布斯自由能小于零的自发过程,与BSA的作用力类型为静电作用为主。同步荧光光谱显示二者均对色氨酸残基构象产生影响,对酪氨酸残基构象影响较小。 结论: 本实验阐明了黄芪甲苷和环黄芪醇与牛血清白蛋白的作用机制,为其进一步用药提供了理论依据。     

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊中总黄酮、总皂苷、总木脂素和总多糖的含量测定

目的测定抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN)中总皂苷、总黄酮、总木脂素及总多糖的含量。方法采用紫外可见分光光度法对四种成分进行含量测定。结果 K-CoxB-JN中总皂苷含量为64.98mg·g-1,总黄酮含量为11.48 mg·g-1,总木脂素含量为21.99 mg·g-1,总多糖含量为21.60 mg·g-1。结论所使用的检测方法简单可行、准确可靠,可用于抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊中总皂苷、总黄酮、总木脂素及总多糖的含量测定。     

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊质量标准

目的:建立抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN)定性和定量检测方法,为其提供质量控制手段.方法:采用薄层色谱法对方中西洋参、麦冬、莱菔子、王不留行4味药物进行定性鉴别;采用HPLC-ELSD法测定西洋参中人参皂苷Rg1,Re,Rb1含量.以Agilent ZORBAX XDB C18(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱,流动相乙腈-0.2％甲酸(梯度洗脱),柱温为室温;ELSD参数:漂移管温度50℃,载气流速200 L·min-1,增益l.结果:薄层色谱专属性强,分离度好,图谱斑点清晰,阴性对照无干扰;人参皂苷Rg1,Re,Rb1质量分别在0.75～3.75,4.5 ～30,6～ 40μg对数值与相应峰面积对数值呈良好的线性关系(r ＞0.999),平均回收率分别为97.10％(RSD 3.96％),95.15％(RSD 2.21％),95.60％(RSD 3.00％).结论:该方法简便、准确、重复性好且无干扰,可用于K-CoxB-JN中主要药材的鉴别以及人参皂苷Rg1,Re,Rb1的含量控制.     

牡蛎散中含氮类化学成分研究

目的 研究海洋中药经方牡蛎散的含氮类化学成分及其药材来源。方法 运用色谱和光谱法分离鉴定化合物,利用UPLC-QE-Focus-MS技术分析化合物的药材来源。结果 分离鉴定5个含氮类化合物：鸟嘌呤核苷(1),腺嘌呤核苷(2),2? -脱氧腺嘌呤核苷(3),zarzissine(4)和色氨酸(5)；化合物1-3和5来源于黄芪、麻黄根和浮小麦,化合物4来源于煅牡蛎、麻黄根和浮小麦。结论 首次从牡蛎散中分离鉴定化合物1-5；源自不同药材的共同成分在药材配伍组成复方后含量加合,集合力而发挥药效,这可能是牡蛎散配伍的机制之一。