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1.
目的从中国南海独特芋螺中克隆新的A-超家族芋螺毒素基因,并分析其内含子的遗传进化关系。方法以独特芋螺基因组DNA为模板,根据A-超家族芋螺毒素基因的信号肽保守序列和3’-非翻译区(3’-UTR)保守序列设计特异性引物,通过PCR方法扩增出目的基因片段,并将其连接到pMDTM19-T载体,转化到DH5α感受态细胞并测序,同时对新的A-超家族芋螺毒素基因内含子进行遗传进化分析。结果从海南产独特芋螺基因组DNA中克隆到4条新的完整A-超家族芋螺毒素基因。CaI-M1a,CaI-M1b,CaI-M1c是编码同一种芋螺毒素CaI-M1的3个基因,它们的内含子序列存在较大的差异,特别是其中的GT重复不同。CaXXVII-M2编码产生的成熟肽含有5个半胱氨酸,与传统的属于A-超家族的α-芋螺毒素含有4个半胱氨酸的模式不同。结论首次在独特芋螺中克隆到4个新的含有完整内含子的A-超家族芋螺毒素基因,并表明其内含子的多样性与物种进化和捕食习性有一定的联系。  相似文献   
2.
目的:探讨重组溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1A(ATV)对荧光素酶标记人肺癌细胞(A549-luc)和人肺癌细胞(A549)的体外抑制作用差异。方法:利用ATV分别感染A549 细胞和A549-luc 细胞,通过WST-1 和结晶紫染色法确定ATV的抑制作用的差异性,通过Hoechst 和Annexin V-FITC/PI 染色验证ATV的抑制方式。结果:ATV对A549 和A549-luc 细胞均具有明显抑制作用(P<0.05)。ATV在24、48、72 h 对两种细胞均有明显抑制作用(P<0.05 或P<0.01),且72 h 抑制率最强;剂量分别为1、10 和100 MOI的ATV对两种细胞均有抑制作用,且100 MOI抑制率最高。A549 细胞和A549-luc 细胞感染ATV后,均呈现核碎裂典型浓染和边集的凋亡现象,且凋亡率随时间的增加而增大,具有显著的时间效应(P<0.05 或P<0.01),且凋亡率均在72 h 达到峰值。结论:荧光素酶的插入没有明显改变ATV对A549-luc 细胞的抑制作用和抑制方式,ATV是通过诱导A549-luc 细胞和A549细胞凋亡从而达到对其显著性体外抑制作用.  相似文献   
3.
目的探讨双特异性溶瘤腺病毒ATV引起人肺癌A549细胞凋亡与活性氧含量之间的关系。方法应用本实验室构建的双特异性溶瘤腺病毒ATV,通过CCK-8法检测ATV对A549细胞增殖的抑制作用;通过Hoechst和Annexin V-FITC/PI流式检测法检测A549细胞的凋亡情况;通过人活性氧Elisa试剂盒测定A549细胞内活性氧水平。结果 CCK-8法检测结果表明,ATV感染剂量为10 MOI和50 MOI作用时间为48 h和72 h时,对A549细胞具有显著性的抑制作用。Hoechst染色结果显示,感染ATV的A549细胞呈现核碎裂典型的浓染和边集现象,具备细胞凋亡的典型特征;Annexin V-FITC/PI流式检测结果表明ATV在12、24、48、72 h均能诱导A549细胞不同程度的凋亡,并且凋亡率随时间增长而提高;胞浆活性氧检测结果表明,ATV感染A549细胞12、24、48、72 h,A549细胞活性氧水平随时间的增长而提高,具有时间效应。结论 ATV对A549细胞有抑制作用且该作用具有明确的时效与剂效关系;ATV通过使A549细胞内活性氧含量增加引起细胞凋亡进而发挥对A549细胞的抑制作用。  相似文献   
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