Notch信号通路可通过激活Slug调控骨肉瘤上皮-间质转化

目的 探究Notch信号通路对骨肉瘤上皮-间质转化的影响及其机制。方法 通过慢病毒转染技术转染骨肉瘤细胞，利用si-slug敲除Slug基因，采用免疫荧光染色技术、Western blot、qRT-PCR、相差显微镜、划痕实验和TranswellTM实验检测相应骨肉瘤细胞形态、侵袭、转移及上皮间质转化（EMT）情况。动物实验比较各组小鼠成瘤后体积、重量变化；采用qRT-PCR检测离体肿瘤组织中Slug和N-cadherin的表达。结果 成功得到Notch信号通路激活或抑制的骨肉瘤细胞，Notch信号通路激活组E-cadherin表达无明显变化，N-cadherin表达显著升高，骨肉瘤细胞长/短轴比率上调，Slug、Twist1表达上调，侵袭及转移能力增强。动物实验发现Notch信号通路激活可促进体内成瘤，离体骨肉瘤组织中Slug、N-cadherin阳性率增高。Slug被成功敲除后Notch信号激活组骨肉瘤细胞形态、侵袭及转移能力发生逆转。结论 Notch信号通路对骨肉瘤上皮-间质转化过程具有促进作用，其机制可能与激活Slug有关。     

基于生物信息学筛选、分析和验证骨肉瘤差异基因

目的：采用生物信息学的方法筛选出骨肉瘤差异基因,并探讨其与骨肉瘤发生的关系。方法：从Gene Expression Omnibus（GEO）数据库中下载符合标准的数据集,用GEO2R进行差异分析,随后用DAVID进行Gene Ontology（GO）富集分析和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）通路分析,随后利用string数据库和Cytoscape软件做蛋白相互作用图（PPI）,用插件Cytohubb以degree为标准筛选差异基因,最后将得到的基因用HCMDB数据库进行验证。结果：从GSE36001和GSE12865中共筛选出421个差异基因,其中有187基因是上调基因,234个基因是下调基因。GO分析的结果显示在生物进程方面,差异基因参与的生物学过程有调控蛋白激酶活性的激活和正性调控肽基酪氨酸磷酸化;分子功能方面,差异基因的功能有调控蛋白的结合和肝素结合;细胞成分方面,差异基因存在于胞外外泌体和突触前膜中;信号通路方面,差异基因参与了Rap1信号通路的调控。此外,用 Cytohubb筛选出5个关键基因： SMAD2,CD44,CXCL12,UBE2D3和KEAP1。最终用HCMDB数据库进行验证,发现CD44,CXCL12,UBE2D3和KEAP1在骨肉瘤中均下调。 结论：在骨肉瘤中下调的CD44,CXCL12,UBE2D3和KEAP1可能与骨肉瘤的发生发展有关。     

维替泊芬影响骨肉瘤MG63细胞增殖和迁移侵袭的作用机制

目的探讨维替泊芬影响骨肉瘤 MG63细胞增殖及迁移侵袭的的作用机制。方法体外培养骨肉瘤 MG63细胞,采用人胆囊收缩素 /缩胆囊素八肽(CCK?8)检测不同浓度(0、2、4、6、8、10 μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤 MG63细胞增殖影响;流式细胞术分析(0、2、4、6、8 μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤 MG63细胞周期分布及凋亡的影响;划痕实验和 TranswellTM侵袭实验检测(0、2、4、6、8 μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤 MG63细胞迁移及侵袭能力的影响;蛋白质印迹法(Western Blot)检测(0、2、4、6、8 μmol/L)维替泊芬对 Hippo信号通路中 Yes?相关蛋白 1(YAP1)、 TEA转录因子 1(TEAD1)、磷酸化 Yes?相关蛋白 1(pYAP1)的蛋白表达水平。结果 CCK?8结果显示维替泊芬能够抑制骨肉瘤 MG63细胞的增殖, 24、48、72 h的半抑制浓度(IC50)分别为(6.592±0.121)μmol/L、(4.668±0.075)μmol/L、(2.953±0.078)μmol/L,并呈时间、浓度依赖性;流式细胞术结果表明维替泊芬以浓度依赖的方式诱导骨肉瘤 MG63细胞凋亡,使骨肉瘤 MG63细胞周期阻滞于 G0/G1期;划痕实验和 TranswellTM侵袭实验结果表明维替泊芬可抑制 MG63细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法结果显示维替泊芬处理的 MG63细胞中 YAP1、TEAD1蛋白表达水平降低,而 pYAP1蛋白表达水平保持不变。结论维替泊芬能抑制骨肉瘤 MG63细胞增殖、促进细胞凋亡、导致细胞周期阻滞,以及抑制细胞迁移和侵袭,并且下调 YAP1及 TEAD1表达,维替泊芬阻碍 YAP1和 TEAD1相互作用可能是抗骨肉瘤的作用机制。     

基于生物信息学筛选、分析和验证骨肉瘤差异基因

目的：采用生物信息学的方法筛选出骨肉瘤差异基因，并探讨其与骨肉瘤发生的关系。方法：从Gene Expression Omnibus（GEO）数据库中下载符合标准的数据集，用GEO2R进行差异分析，随后用DAVID进行Gene Ontology（GO）富集分析和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）通路分析，随后利用string数据库和Cytoscape软件做蛋白相互作用图（PPI），用插件Cytohubb以degree为标准筛选差异基因，最后将得到的基因用HCMDB数据库进行验证。结果：从GSE36001和GSE12865中共筛选出421个差异基因,其中有187基因是上调基因，234个基因是下调基因。GO分析的结果显示在生物进程方面，差异基因参与的生物学过程有调控蛋白激酶活性的激活和正性调控肽基酪氨酸磷酸化；分子功能方面，差异基因的功能有调控蛋白的结合和肝素结合；细胞成分方面，差异基因存在于胞外外泌体和突触前膜中；信号通路方面,差异基因参与了Rap1信号通路的调控。此外，用 Cytohubb筛选出5个关键基因： SMAD2，CD44，CXCL12，UBE2D3和KEAP1。最终用HCMDB数据库进行验证，发现CD44，CXCL12，UBE2D3和KEAP1在骨肉瘤中均下调。 结论：在骨肉瘤中下调的CD44，CXCL12，UBE2D3和KEAP1可能与骨肉瘤的发生发展有关。     

可注射型磷酸镁骨水泥生物相容性及体外模型中性能表现的评价

目的通过体内外实验评价可注射型磷酸镁骨水泥(MPC)的生物相容性及其强化体外羊经皮椎体后凸成形术(PKP)模型的能力,探讨MPC作为PKP骨替代物的潜能。方法采用酸碱反应原理合成MPC。分别在MPC和聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)骨水泥材料表面接种SD大鼠成骨细胞,经电镜扫描了解不同材料的细胞相容性。使用万能试验机测定MPC固化试样的抗压强度,采用称重法测定MPC膏体的可注射性。将36个羊L4～6椎骨均分为3组:A组椎骨不予处理(阳性对照组),B组和C组椎体行PKP造模,C组椎骨注入MPC填充缺损,B组作为空白对照组,于MPC注入后2、24、48、72h测定3组椎体的轴向最大载荷。使用新西兰兔行双侧股骨髁缺损造模,分别以PMMA骨水泥和MPC填充双侧缺损,术后1、3、6、12周取材,经微CT扫描观察2种材料的生物体内相容性。结果 MPC在细胞接种后4、24h时表面均有细胞黏附,24h时表面黏附细胞伸展,形态学良好;PMMA材料表面黏附细胞数目少,黏附细胞的形态学较差。MPC抗压强度为(30.16±1.22)MPa,可注射性为99.69%±0.32%。体外PKP模型实验结果显示,MPC注入2、24、48、72h时C组椎体轴向最大载荷均显著高于B组椎体[分别为(4.360±0.036)kN对(3.480±0.085)kN、(4.640±0.106)kN对(3.480±0.040)kN、(4.740±0.026)kN对(3.477±0.093)kN、(4.740±0.040)kN对(3.480±0.026)kN,P均0.05]。新西兰兔体内试验微CT扫描结果显示,MPC与PMMA未引发明显的排异反应、炎症和感染征象,在第12周MPC出现一定程度降解,而PMMA无降解征象。结论 MPC表现出良好的力学强度和可注射性,细胞相容性和动物体内相容性良好,体外PKP模型中MPC的机械性能表现良好,具有成为PKP骨替代物的潜能。     

Hippo信号通路在骨肉瘤中的研究进展

骨肉瘤是临床上最常见的原发恶性肿瘤之一,新辅助化疗使患者5年生存率得到提高,但是伴有肺部转移的患者5年生存率亦不足20%,亟需新的治疗方案。Hippo信号通路参与了哺乳动物多种细胞和器官的稳态调控,最近研究表明Hippo信号通路调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和转移等恶性行为,Hippo信号通路可能为骨肉瘤治疗提供新的靶点,本文综述了Hippo信号通路的组成、调节机制及骨肉瘤中Hippo信号通路分子变异情况,以期为骨肉瘤研究和防治提供更广阔的思路。     

吲哚美辛对骨肉瘤143B细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的 观察吲哚美辛对骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 体外培养人骨肉瘤细胞143B,倒置显微镜观察骨肉瘤143B细胞的形态;CCK-8检测骨肉瘤143B细胞增殖情况;流式细胞术分析骨肉瘤143B细胞的凋亡;Transwell检测骨肉瘤143B细胞迁移情况;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白 Bcl-2的表达。结果 CCK-8结果显示吲哚美辛能抑制骨肉瘤143B细胞的增殖,呈时间、浓度依耐性;流式细胞术结果显示吲哚美辛以浓度依赖的形式诱导骨肉瘤细胞凋亡;Transwell结果显示吲哚美辛可以抑制骨肉瘤143B细胞迁移;Western blot法检测结果表明,吲哚美辛下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 吲哚美辛抑制骨肉瘤143B细胞增殖和迁移能力并且促进其凋亡,并呈现时间和浓度依赖性。