铜绿假单胞菌噬菌体的分离筛选和体内外抗菌活性研究

目的:分离筛选针对铜绿假单胞茵的强裂解性噬菌体,并研究其生物学特性和体内外抗菌活性.方法:药敏纸片法筛选铜绿假单胞菌的耐药菌株,以此为宿主菌,采用双层平板法和斑点法分离筛选噬菌体并分析其生物学特性,透射电镜观察噬菌体的微观形态,检测噬菌体和细菌共培养液的OD600值分析体外抗菌活性,建立小鼠全身感染模型评估噬菌体疗效.结果:分离获得3株铜绿假单胞菌噬菌体,从中筛选出一株宽谱的强裂解活性噬菌体PPa24.PPa24属于长尾噬菌体科,其在55℃以下、pH6～10条件下活性稳定,最佳感染复数为0.1,一步生长曲线显示PPa24感染宿主菌的潜伏期为20 min、裂解期为70 min、裂解量为62 PFU· cell-1.噬菌体PPa24可以有效降低细菌培养物的OD600值,用来治疗小鼠全身感染可显著降低血液载菌量(P＜0.01),并使存活率提高至75％ (P＜0.001).结论:筛选得到的噬菌体PPa24在抗击铜绿假单胞菌感染方面初步显示了良好的体内外活性,可能成为治疗铜绿假单胞菌感染的潜在抗菌剂.     

人工合成抗菌肽生物信息学分析及其抑菌活性研究

目的：对溶血性较高的天然抗菌肽Temporin-1Dra进行氨基酸替换,以期获得低毒性、对白色念珠耐药菌株具有抑菌活性的抗菌肽。方法：采用生物信息学相关软件对改造之后的天然抗菌肽Temporin-1Dra进行分析,主要包括抗菌肽形成概率、理化性质、二级结构的预测;测定合成多肽的最低抑菌浓度,杀菌曲线,部分抑菌浓度指数（FIC index）。结果：对天然抗菌肽进行生物信息学分析改造得到多肽[G4、T5、N8K]Temporin-1Dra,对耐氟康唑（FLC）白色念珠菌的MIC值为128 μg·mL-1;MIC范围内溶血率＜5%;3 h内MIC浓度下杀菌效率显著,且呈现浓度依赖性;与FLC联用的FIC index为0.375,与FLC联合用药有协同作用。结论：改造之后的抗菌肽[G4、T5、N8K]Temporin-1Dra（HFLKKLVKLAKKIL-NH2）对白色念珠菌耐药菌株具有抑制作用,体外溶血性低、杀菌效果显著。