κ-卡拉胶酶CgkX高效重组表达菌株的构建和发酵优化?

目的 CgkX是一种高活性、高稳定性的κ-卡拉胶酶,但产量低。本文旨在构建多种重组表达菌株,并进行发酵条件优化,以提高κ-卡拉胶酶CgkX的产量。方法 在分析了κ-卡拉胶酶CgkX基因序列中稀有密码子和氨基酸序列中含硫氨基酸的基础上,构建多种CgkX表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组表达和酶活测定,筛选其中最高效的表达菌株,并对发酵起始pH、诱导温度、IPTG浓度、装液量以及甘氨酸浓度等因素进行优化。结果 构建了4种重组表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3),发现E. coli BL21(DE3)/pET-22b-CgkX酶产量最高,是以前菌株的8倍。通过优化确定了最佳发酵条件为：发酵起始pH 7.5,IPTG浓度为0.05 mmol?L-1,诱导温度20 oC,装液量为75 mL,甘氨酸浓度为1 g?L-1。优化后酶产量达到32 U/mL,是优化前的7倍。结论 经过重组表达载体筛选和发酵优化,CgkX产量提高到最初的56倍,为酶解制备κ-卡拉胶寡糖提供了足量的工具酶。