白芍总苷通过抑制内质网应激减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的研究

目的 探讨白芍总苷（TGP）对大鼠脑缺血再灌注（I/R）损伤的保护作用及其机制。方法 将240只实验用SD大鼠随机分为假手术组,模型组,TGP低（50mg/kg）、中（100mg/kg）、高（200mg/kg）剂量组和尼莫地平（NMP,15mg/kg）组,每组40只。采用线栓法阻断大脑中动脉2h复制大鼠脑I/R模型,造模前7d开始1次/d灌胃给药（假手术组和模型组灌胃给予生理盐水）。24h后,采用mNSS评分法评价大鼠神经功能,伊文思蓝渗透法检测血脑屏障（BBB）通透性,TTC染色法检测脑组织梗死体积,HE染色法和TUNEL染色法分别检测脑组织病理学改变和神经细胞凋亡,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）水平,Western blot法检测葡萄糖调控蛋白78（GRP78）、磷酸化胰腺内质网激酶（p-PERK）、C/EBP同源蛋白（CHOP）、核因子-?B（NF-?B）、激活型半胱胺酸蛋白酶-12（Cleaved Caspase-12）、激活型半胱胺酸蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）蛋白表达。结果 与模型组比较,TGP中、高剂量组和NMP组mNSS评分降低[(9.98±1.07)分、(6.41±0.83)分、(8.26±0.95)分比(14.63±1.52)分,P均<0.01]、伊文思蓝渗透量降低[(7.76±1.50)μg/g、(5.49±1.13)μg/g、(7.31±1.20)μg/g比(12.71±2.04)μg/g,P均<0.01]、脑梗死体积降低[(24.93±4.12)%、(16.52±3.05)%、(19.08±3.71)%比(39.48±5.16)%,P均<0.01];大脑皮质神经细胞形态结构损伤和凋亡明显改善,凋亡指数（AI）降低[(43.51±6.27)%、(22.34±4.85)%、(37.29±5.36)%比(68.15±8.43)%,P均<0.01];TNF-α水平降低[(1.77±0.24)ng/mL、(1.61±0.19)ng/mL、(1.89±0.26)ng/mL比(2.26±0.31)ng/mL,P均<0.01]、IL-1β水平降低[(41.76±6.21)pg/mL、(36.98±5.73) pg/mL、(41.15±6.40)pg/mL比(52.64±7.02)pg/mL,P均<0.01]、IL-6水平降低[(15.72±3.14)pg/mL、(9.84±2.63)pg/mL、(13.07±2.91)pg/mL比(21.34±3.85) pg/mL,P均<0.01];GRP78表达量降低[(0.41±0.09)、(0.18±0.05)、(0.27±0.08)比(0.96±0.21),P均<0.01]、p-PERK表达量降低[(0.75±0.14)、(0.24±0.05)、(0.38±0.09)比(0.94±0.19),P<0.05或P<0.01]、CHOP表达量降低[(0.14±0.04)、(0.07±0.03)、(0.19±0.05)比(0.44±0.10),P均<0.01]、NF-?B表达量降低[(0.67±0.15)、(0.67±0.15)、(0.58±0.13)比(0.89±0.18),P均<0.01]、Cleaved Caspase-12表达量降低[(0.74±0.16)、(0.52±0.11)、(0.61±0.15)比(0.95±0.22),P<0.05或P<0.01]、Cleaved Caspase-3表达量降低[(0.18±0.06)、(0.12±0.03)、(0.35±0.08)比(0.64±0.13),P均<0.01]。与NMP组比较,TGP高剂量组mNSS评分降低[(6.41±0.83)分比(8.26±0.95)分,P<0.01]、伊文思蓝渗透量降低[(5.49±1.13)μg/g比(7.31±1.20)μg/g,P<0.01];神经细胞形态结构损伤明显改善,AI降低[(22.34±4.85)%比(37.29±5.36)%,P<0.01];TNF-α水平降低[(1.61±0.19) ng/mL比(1.89±0.26)ng/mL,P<0.05]、IL-6水平降低[(9.84±2.63)pg/mL比(13.07±2.91)pg/mL,P<0.05];GRP78表达量降低[(0.18±0.05)比(0.27±0.08),P<0.01]、p-PERK表达量降低[(0.24±0.05)比(0.38±0.09),P<0.01]、CHOP表达量降低[(0.07±0.03)比(0.19±0.05),P<0.01]、NF-?B表达量降低[(0.67±0.15)比(0.58±0.13),P<0.05]、Cleaved Caspase-3表达量降低[(0.12±0.03)比(0.35±0.08),P<0.01]。结论 TGP对大鼠脑I/R损伤具有保护作用,其机制可能与抑制内质网应激相关炎症和凋亡通路有关。     

针刀联合补肾壮骨方治疗骨质疏松性椎体压缩骨折PKP术后腰部残余痛临床观察

目的 探讨针刀联合补肾壮骨方治疗骨质疏松性椎体压缩骨折经皮球囊扩张椎体成形术（percutaneous kyphoplasty,PKP）术后腰部残余痛的临床疗效。方法 选取2018年1月至2021年12月就诊于浙江中医药大学附属宁波中医院骨伤科的PKP术后残留腰部疼痛患者77例,随机分为对照组和观察组。对照组患者采用骨化三醇软胶囊和碳酸钙D3片治疗,观察组患者采用针刀联合补肾壮骨方治疗,比较两组患者的疼痛程度、腰椎功能、生活自理能力。结果 经治疗后两组患者的疼痛程度、腰椎功能、生活自理能力较治疗前均改善。与对照组比较,观察组患者的视觉模拟评分法（visual analogue score,VAS）评分、Oswestry功能障碍指数（Oswestry disability index,ODI）下降更明显,差异有统计学意义（P<0.05）;观察组患者的Barthel指数在早期（治疗后3d、1个月）上升更明显,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后3个月,两组患者的Barthel指数比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 针刀联合补肾壮骨方治疗骨质疏松性椎体压缩骨折PKP术后腰部残余痛临床疗效满意,可明显减轻患者的疼痛、改善腰椎功能,缩短患者生活自理能力的恢复时间,提高患者的生活质量,有效促进患者的康复。     

葛根素通过抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路诱导人肾癌786-O细胞凋亡的研究

目的 研究葛根素对人肾癌786-O细胞凋亡的影响及其机制。方法 分别以DMSO(空白对照组)、不同浓度葛根素10、20、40 mg/L和LY294002(PI3K抑制剂)15 mg/L干预对数生长期人肾癌786-O细胞48 h，采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡水平，Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(Tyr317) [p-PI3K(Tyr317)]、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(Ser473)[p-Akt(Ser473)]、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β (Ser21)[p-GSK-3β(Ser21)]、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、激活型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax）表达。结果 与空白对照组比较，葛根素10、20、40 mg/L组和LY294002 15 mg/L组786-O细胞增殖抑制率升高[(17.04±2.92)%、(26.48±4.77)%、(42.79±6.81)%、(35.73±6.12)%比(3.47±0.53)%，P<0.01]、凋亡率升高[(13.72±2.38)%、(30.41±4.05)%、(55.39±6.72)%、(36.08±4.32)%比(2.64±0.51)%，P<0.01]；。与空白对照组比较，葛根素20、40 mg/L组和LY294002 15 mg/L组786-O细胞p-PI3K(Tyr317)、p-Akt(Ser473)、p-GSK-3β(Ser21)、Bcl-2表达下调[p-PI3K(Tyr317)：(0.58±0.13)、(0.32±0.07)、(0.38±0.08)比(1.03±0.24)；p-Akt(Ser473)：(0.25±0.06)、(0.09±0.03)、(0.11±0.03)比(0.51±0.12)；p-GSK-3β(Ser21)：(0.12±0.03)、(0.07±0.02)、(0.09±0.03)比(0.58±0.13)；Bcl-2：(0.31±0.08)、(0.18±0.05)、(0.21±0.07)比(0.48±0.12)，P均<0.01]，Caspase-9、Cleaved Caspase-3、Bax表达上调[Caspase-9：(0.37±0.08)、(0.66±0.13)、(0.58±0.11)比(0.17±0.04)；Cleaved Caspase-3：(0.25±0.06)、(0.72±0.16)、(0.43±0.12)比(0.11±0.03)；Bax：(0.36±0.08)、(0.62±0.12)、(0.20±0.05)比(0.08±0.02)，P均<0.01]，PI3K、Akt、GSK-3β磷酸化率降低[PI3K磷酸化率：(0.55±0.15)、(0.29±0.08)、(0.34±0.09)比(0.92±0.28)；Akt磷酸化率：(0.24±0.07)、(0.09±0.03)、(0.11±0.04)比(0.53±0.14)；GSK-3β磷酸化率：(0.14±0.04)、(0.08±0.03)、(0.10±0.04)比(0.62±0.15)，P均<0.01]，Bax/Bcl-2比值升高[(1.16±0.27)、(3.41±0.65)、(0.95±0.22)比(0.17±0.04)，P<0.01]。与LY294002 15 mg/L组比较，葛根素40 mg/L组786-O细胞增殖抑制率升高[(42.79±6.81)%比(35.73±6.12)%，P<0.05]、凋亡率升高[(55.39±6.72)%比(36.08±4.32)%，P<0.01]，Cleaved Caspase-3、Bax表达上调[Cleaved Caspase-3：(0.72±0.16)比(0.43±0.12)；Bax：(0.62±0.12)比(0.20±0.05)，P均<0.01]，Bax/Bcl-2比值升高[(3.41±0.65)比(0.95±0.22)，P<0.01]，两组间其他指标比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 葛根素具有诱导人肾癌786-O细胞凋亡的作用，其机制可能与抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路有关。