UPLC-MS/MS法测定氘代氯化琥珀胆碱在大鼠体内分布

目的:建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定氘代氯化琥珀胆碱(2H-Suc)在大鼠主要脏器分布。方法:大鼠皮下注射2H-Suc 4 h后,用UPLC-MS/MS法测定血清和相关脏器中2H-Suc含量;色谱柱:Luna NH2色谱柱(2 mm×100 mm,3μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈等度洗脱,流速为0.2 mL/min;正离子扫描模式,多反应监测模式下,电喷雾离子化源进行检测;考察该方法的线性关系与检测限、准确度和精密度、回收率、基质效应和稳定性。结果:血清和肾组织中2H-Suc的检测限分别是0.04 ng/mL和0.05 ng/mL,线性范围分别是0.3~100 ng/mL和0.5~100 ng/mL,日内、日间精密度和准确度均小于15%,回收率在85.30%~96.76%之间,经过处理后的样品不存在明显的基质效应。大鼠皮下注射2H-Suc,在血清及心、肝、肾等主要脏器中均检测到2H-Suc,其中肾脏中含量最高。结论:UPLC-MS/MS法是测定大鼠体内2H-Suc含量的一个有效方法,2H-Suc在大鼠血清及心、肝、肾等中均有分布,肾脏中含量最高。     

3-巯基丙酮酸硫转移酶产生的硫化氢在大鼠脑血管张力和脑血管内皮细胞缺氧损伤中的作用

目的研究 3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,3?MST)产生的硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)在大鼠脑血管张力和血管内皮细胞缺氧损伤中的作用。方法将大鼠脑基底动脉血管按随机数字表法分为 Krebs Henseleit缓冲液对照组、 3MP组、 ASP组、 SIN?1组、 ASP＋SIN?1组、 3MP＋SIN?1组。通过微血管张力仪来测量大鼠脑基底动脉血管的张力,收集张力仪浴槽中的灌注液并测定灌注液中硫化氢含量。原代培养大鼠脑血管内皮细胞,将细胞按随机数字表法分为对照组、模型组、 3MP组、 ASP组、 SIN?1组、 3MP＋SIN?1组。除对照组外,其他 5组建造急性缺氧 4h模型,用药组分别给予相应的药物预处理。然后测定缺氧损伤后内皮细胞活力,上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,以及活性氧的含量。结果 3?MST底物硫基丙酮酸二水合物(3?mercaptopyruvate,3MP)和 3?MST激动剂 5?氨基 ?3?(4?吗啉基)?1,2,3?恶二唑鎓盐酸盐(3?morpholino sydnonimine hydrochloride,SIN?1)能够舒张血栓素 A2受体激动剂 U46619预收缩的大鼠脑基底动脉,最大收缩率为(94.67± 3.99)%;与单独使用 SIN?1相比, 3?MST抑制剂天门冬氨酸(L?aspartic acid,ASP)能够减弱 SIN?1舒张血管的作用,而 3MP能增强 SIN?1的血管舒张作用。同时, 3MP和 SIN?1可以增加血管灌注液中的硫化氢的含量(90.09±5.36)μmol,而 ASP可以减少 SIN?1增加的硫化氢。与急性缺氧组相比, 3?MST抑制剂 ASP能够进一步降低细胞活力,升高 LDH活性;而 3?MST激动剂 SIN?1和底物 3MP能够改善细胞损伤,提高细胞活力,降低 LDH活性(112.63±8.08)U/L,降低活性氧。结论 3?MST产生的硫化氢可介导脑血管舒张,保护脑血管内皮细胞。