乏氧诱导的A549细胞外泌体特征及其对放射抗拒性的影响

目的 收集乏氧和常氧条件下人肺腺癌A549细胞产生的外泌体,观察常氧下A549细胞与外泌体共培养后对X射线敏感性及侵袭性的变化。方法 分别在乏氧（1% O₂）和常氧条件下（21% O₂）培养A549细胞,超高速离心法收集在细胞分泌的常氧外泌体（N-EXO）和乏氧外泌体（H-EXO）。NanoSight检测外泌体数量,扫描电镜观察外泌体的外观和大小。蛋白印迹检测外泌体蛋白CD63。CCK8检测细胞对X射线的耐受性。荧光显微镜观察A549细胞对PKH67标记的外泌体的摄取。细胞划痕实验和Transwell实验观察加入不同的外泌体后细胞侵袭和侵袭性变化,ELISA方法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶2（MMP2）和基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达变化。细胞克隆形成实验观察二种外泌体对细胞放射抵抗性的改变。结果 每ml细胞培养液中H-EXO的数量增多。H-EXO和N-EXO均呈现出典型的环饼状,H-EXO直径变小,粒径分布在30~200 nm,小于N-EXO的粒径（50~220 nm）。H-EXO和N-EXO的CD63表达无明显差别。乏氧条件培养的A549细胞接受2 Gy X射线后,细胞的增殖水平在4和6 d时远高于常氧条件下的细胞。PKH67绿色荧光标记的外泌体分布在细胞内部。12、24、48 h后,H-EXO组细胞划痕宽度远小于N-EXO组（t=2.96、6.76、3.35,P<0.05）。H-EXO组细胞穿膜细数量大于N-EXO组和对照组（t=4.84、7.88,P<0.01）。H-EXO组上清液中MMP2（t=4.70、3.21,P<0.05）和MMP9（t=5.61、3.76,P<0.05）表达水平较对照组和N-EXO组均明显增高。对照组、N-EXO和H-EXO的D₀值分别为2.614、2.552、4.850。H-EXO较N-EXO可以明显增强A549细胞的放射抵抗性。结论 乏氧条件下,A549细胞释放的外泌体数量增多、粒径变小,乏氧外泌体可以促进常氧细胞的侵袭性,并且能够增强细胞对X射线的耐受性。     

新型纳米金材料的合成及其对HepG2细胞放射增敏的影响

目的 合成新型纳米金复合物GAL-PEG-GNPs,探讨其体外放射增敏效应及增敏机制。方法 制备GAL-PEG-GNPs并进行表征。将HepG2细胞分为对照组、GNPs组和GAL-PEG-GNPs组。CCK-8法检测GAL-PEG-GNPs的细胞毒性,并计算IC₅₀值;TEM和ICP-MS检测细胞对2种纳米材料的摄取;克隆形成实验检测放射增敏水平;流式细胞术分析细胞周期的变化;免疫蛋白印迹分析细胞凋亡相关蛋白变化;酶标仪检测细胞内过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、总还原型谷胱甘肽（GSH）的表达水平。结果 GNPs和GAL-PEG-GNPs溶液的紫外可见吸收峰分别位于520和530 nm,GNPs和GAL-PEG-GNPs的直径分别为（22.6±2.12）和（32.0±1.41）nm。GAL-PEG-GNPs的细胞毒性与GNPs类似（P>0.05）,IC₅₀值分别为5.001和4.997 μg/ml。GAL-PEG-GNPs被HepG2细胞的摄取量高于GNPs。GNPs和GAL-PEG-GNPs的放射增敏比（SER）分别为1.46和1.95。细胞经过处理后,处于G₂/M期的比例明显提高（t=14.20,P<0.05）。GNPs组和GAL-PEG-GNPs组Cytochrome C、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达水平较对照组明显提高,而Bcl-2的表达呈现降低趋势。GAL-PEG-GNPs组CAT、SOD、总GSH较对照组均明显减少（t=12.34、29.39、12.85,P<0.05）。结论 GAL-PEG-GNPs对HepG2细胞具有较好的放射增敏效应,增敏机制可能与GNPs诱导大量自由基产生,进而启动凋亡基因程序有关。     

循环肿瘤细胞评估转移性结直肠癌微波消融治疗的初步研究

目的:利用循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）评估转移性结直肠癌微波消融治疗及其预后的相关性。方法:研究分析了2015年1月至2018年4月在东南大学附属第二医院因转移性结直肠癌行肺部或肝脏病灶微波消融治疗的34例患者的临床资料。术前及术后均进行CTCs检测,并搜集患者临床特征。应用统计方法进一步分析研究。结果:微波消融术后,患者的CTCs测量值较术前升高,差异具有统计学意义(P=0.003)。对性别、年龄、微波治疗部位（同转移部位）、微波术前后CTCs变化状况、微波术后CTCs数目与随访截止时期患者生存状态进行分析后得出:女性患者在随访截止时期的生存状态优于男性,差异具有统计学意义（P=0.011）;微波术后CTCs数目＜7个/ml的患者生存状态优于术后CTCs数目≥7个/ml者,差异具有统计学意义（P=0.030）。而年龄（P=0.274）、微波治疗部位（同转移部位）（P=0.271）、微波术前后CTCs变化状况（P＝0.214）与随访截止时期患者的生存状态之间无统计学差异。结论:转移性结直肠癌的患者CTCs数目在微波消融术后会增加;女性患者在随访截止时期的生存状态优于男性;微波术后CTCs数目＜7个/ml的患者生存状态优于术后CTCs数目≥7个/ml者;年龄、微波治疗部位（同转移部位）、微波术前后CTCs变化状况与随访截止时期患者疾病状态不相关。     

纳米金颗粒的基本特性及其对肿瘤放射增敏作用的研究进展

纳米金颗粒以其独特的理化性质在医学领域越来越受到重视。近年许多研究证实了纳米金在肿瘤治疗中可以减少组织受照剂量,减轻放射治疗对正常组织的伤害,在放射增敏方面有重要作用,本文从纳米金的基本特性、生物学毒性、放射增敏机制、在细胞和动物模型中增敏实验以及在临床前应用等几方面进行综述。     

盐酸羟考酮控释片不同给药方式治疗中重度癌性疼痛的疗效比较

癌性疼痛是晚期癌症患者常见的症状,据WHO统计,60%～90%的晚期癌症患者伴有不同程度的疼痛,其中有50%为中至重度疼痛,严重影响患者的生存质量。盐酸羟考酮为阿片受体纯激动剂,对脑和脊髓的阿片受体具有亲和力,镇痛作用类似吗啡,镇痛作用无封顶效应,口服后出现双吸收时相,不仅能持续延长疼痛控制时间,还能在服药后1h内快速起效,其生物利用度达60%～87%,但临床上有大量因各种原因不能口服用药的晚期癌症患者多采用注射疗法止痛,给患者带来痛苦和不便。因此我科从2007年10月至2009年01月间,对癌症疼痛患者经直肠给予盐酸羟考酮控释片,并与口服患者进行止痛治疗的对比研究,取得满意效果,现报告如下。1资料与方法1.1临床资料参加观察的患者均为我科2007年10月至2009年1月间的住院患者,共51例,所有病例均确诊为恶性肿瘤,并伴有中重度疼痛,1周内未使用任何阿片类药物,未合并其他镇痛药及辅助用药。无严重心、肺、肝、肾等脏器功能损害,所有患者都是不能或拒绝进行化疗和放疗的晚期癌症患者,依从性较好,能配合评价和观察疗效。疼痛类型:内脏痛23例,骨痛17例,神经痛23例,部分病例合并多部位多种类型疼痛。随机分为A组(口...     

CT引导下经皮微波消融治疗膈顶部复发性小肝癌15例疗效观察

目的:回顾性分析经肝脏CT引导下经皮微波消融（CT-MWA）治疗膈顶区域复发性小肝癌的临床疗效及安全性。方法:对2009年8月至2015年2月共15例位于膈顶部位复发性小肝癌患者的小病灶（<3 cm）进行CT引导下经皮微波消融术治疗的临床资料进行回顾性分析。分析总结微波消融治疗膈顶复发性小肝癌的1、3年生存率、完全消融率、局部进展率、术中及术后并发症、不良反应。结果:本研究15个小病灶进行CT-MWA治疗成功率和完全消融率分别为93.33%(14/15)和86.67%(13/15)。术中疼痛发生率为46.67%(7/15)。术后常见不良反应为肝区疼痛(33.33%)、胃肠道反应(46.67%)、发热(13.33%)、肝功能异常(13.33%),无肝功能衰竭、胆瘘、感染、出血等严重并发症,无围手术期死亡病例。15例患者平均存活时间为42个月。术后3个月、6个月、1年及1年以上的肿瘤局部进展率分别为6.67%(1/15)、6.67%(1/15)、13.33%(2/15)、13.33%(2/15)。1、2、3年生存率分别为86.67%(13/15)、66.67%(10/15)、46.67%(7/15)。结论:经皮CT-MWA 治疗膈顶区域复发性小肝癌是一种安全有效的微创治疗方法,值得扩大样本量进一步研究。     

XAF1基因对顺铂诱导肺腺癌A549细胞凋亡作用的研究

目的:通过顺铂诱导人肺腺癌细胞A549的凋亡,研究X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(X-linked inhibitor of apoptosis protein associated factor-1,XAF1)基因在A549细胞中的表达情况,初步探讨该基因在凋亡中的作用。方法:采用4μg/mL浓度的顺铂处理A549细胞,MTT法检测细胞的增殖抑制率;AnnexinⅤ/7-AAD检测A549细胞凋亡情况;RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测A549凋亡后XAF1mRNA和蛋白的表达;Caspase-3试剂盒检测A549细胞凋亡后Caspase-3的活性。结果:用4μg/mL浓度顺铂处理A549细胞2、12和24h后,A549细胞增殖抑制率分别为(3.40±0.65)%、(8.31±0.73)%和(14.72±0.24)%,与对照组(1.03±0.28)%相比均明显增高,P值分别为0.004、0.000和0.000,细胞增殖抑制率随时间增加而增强;A549细胞凋亡率分别为(4.35±0.95)%、(9.69±2.60)%和(22.35±1.24)%,与对照组(1.39±0.21)%相比均明显增加,P值分别为0.006、0.005和0.000,细胞凋亡率随顺铂作用时间延长而增加;实验组XAF1mRNA表达水平分别为(0.199±0.029)、(0.654±0.093)和(1.216±0.101),对照组为(0.091±0.020),XAF1mRNA表达水平随作用时间的延长呈增加趋势,P值分别为0.006、0.001和0.000;实验组XAF1蛋白表达水平分别为(0.322±0.041)、(0.508±0.014)和(0.901±0.014),对照组为(0.124±0.007),XAF1蛋白表达水平随作用时间的延长呈增加趋势,P值分别为0.001、0.000和0.000;Caspase-3活性(A405nm)分别为(34.745±3.781)、(69.524±3.096)和(94.787±5.429),对照组为(21.914±1.962),Caspase-3活性随顺铂作用时间的延长而增加。结论:顺铂诱导A549细胞凋亡可以引起XAF1表达增加,且随细胞凋亡水平的提高而增加,提示XAF1可能参与顺铂诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡过程。     

GEMOX方案联合高强度超声聚焦治疗晚期胰腺癌23例临床观察

目的:探讨高强度超声聚焦（HIFU）联合GEMOX方案治疗晚期胰腺癌的疗效和安全性。方法:23例经病理证实的转移性胰腺癌患者,予GEMOX方案（奥沙利铂135mg/m2,静脉滴注,d1,吉西他滨1.0g/m2,静脉滴注,d1,8）化疗,21天为1个周期。同时应用FEP-BY02型高能聚焦超声肿瘤治疗机治疗,根据肿瘤大小、转移数目、部位决定治疗次数,每次治疗时间约30-50分钟,每次间隔1-2天。治疗后定期随访观察0.6-2年。通过治疗有效率、疾病控制率、CA199水平的变化及不良反应进行评价,并分析生存状况。结果:23例患者接受治疗,全部可评价疗效,治疗有效率（RR）17.39%,疾病控制率（DCR）56.52%,中位无疾病进展生存时间（mTTP）3.3个月,中位总生存时间（mOS）7.9个月,1年生存率8.69%。12例患者CA199出现下降。总获益率(CBR)43.48%。Ⅲ级以上不良反应共5例（21.74%）。最常见的不良反应为疲乏,共15例。结论:对于晚期胰腺癌患者,GEMOX方案联合高强度超声聚焦是一种有效的治疗手段,不良反应可以耐受,值得扩大样本量进一步研究。     

联合检测血清GP73,AFP,AFP-L3及AFU在原发性肝癌诊断中的作用

目的探讨联合检测血清高尔基体糖蛋白GP73,AFP,AFP异质体（AFP-L3）以及α-L-岩藻糖苷酶（AFU）在肝癌诊断中的意义。方法收集原发性肝癌81例,肝硬化72例,慢性乙型肝炎28例,健康对照27例,分别检测每例的血清GP73,AFP,AFP-L3及AFU,并对统计结果进行分析。结果单项检测中AFP-L3特异度最高为88.8%,AFP灵敏度、准确度最高分别为60.5%、73.2%,而联合检测组中,特异度、灵敏度、准确度分别为89.2%、60.5%及77.03%,高于各单项检查组;ROC曲线分析提示联合检测组的线下面积最大为0.765,大于各单项检测组;联合检测的阳性检出率与各单项检测相比,均高于单项检测,有统计学差异。结论联合检测血清血清GP73,AFP,AFP-L3及AFU有助于提高原发性肝癌的检出率,并与肝硬化、慢性肝炎相鉴别。