一株抗膀胱癌单克隆抗体的产生和初步鉴定

我国膀胱癌的死亡率在泌尿系肿瘤方面占首位。应用单克隆抗体进行膀胱癌的诊断和治疗是一个有广泛应用前景的新手段。本文首次在国内报告用杂交瘤技术制备特异性较好的抗人膀胱癌表面抗原的单克隆抗体。     

流式细胞术脱石蜡技术在泌尿系统肿瘤研究中的应用

流式细胞仪(Flow Cytometer)是一种现代生物学与计算机技术结合的产物,它能快速、大量、准确地分析许多肿瘤参数。肿瘤细胞DNA含量即细胞倍性的分析,正是这一系列肿瘤研究中重要的部分。现有研究资料表明,DNA非整倍体肿瘤较同期DNA含量正常(二倍体)肿瘤更易发生浸润和复发。因此,DNA含量的分析是研究肿瘤产生、发展、预后和疗效的重要指标,目前,流式细胞仪只能对单细胞悬液进行检查,常采用新鲜肿瘤组织制备悬液,故在许多研究中受到限制。近年来,采用流式细胞术脱石蜡技术,为肿瘤回顾性研究开辟了新领域。     

CRISPR/Cas 9介导的基质Gla蛋白基因敲除对破骨细胞分化的影响

目的利用 CRISPR/Cas 9基因编辑技术,构建基质 Gla蛋白(MGP)基因敲除的 RAW264.7巨噬细胞系,明确 MGP基因在破骨细胞分化过程中的作用。方法利用在线软件分析并筛选出 3个针对 MGP基因外显子区的单链向导 RNA(gRNA)人工合成 gRNA寡核苷酸序列,并将其插入线性化的 LentiCRISPRv2质粒中,构建成 LentiCRISPRv2?MGP?gRNA重组质粒。将重组,质粒与 psPAX2、VSVG包装质粒一同转染 293?T细胞,包装并收集重组慢病毒,将其感染 RAW264.7细胞。经嘌呤霉素筛选得到稳定 RAW264.7细胞系,实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western Blot)验证 MGP mRNA及蛋白表达水平。 qPCR检测破骨细胞分化标志分子的表达情况。结果成功构建了 LentiCRISPRv2?MGP?gRNA重组质粒,成功包装了含有 MGP?gRNA的重组慢病毒,筛选得到了稳定低表达 MGP的 RAW264.7细胞系。 qPCR及蛋白质印迹法检测显示,MGP mRNA、蛋白表达显著性下调(P＜0.05)。 qPCR结果显示,最具有代表性的 LentiCRISPRv2?MGP?gRNA1细胞破骨标志分其子 Itgb3(2.29±0.17)、 Acp5(2.86±0.15)、 Ctsk(2.07±0.13)的 mRNA水平均显著上调(P＜0.05)。结论利用 CRISPR/Cas 9基因编辑技术成功构建了 MGP基因敲除的 RAW264.7细胞系,敲除 MGP后 RAW264.7细胞破骨分化能力增强。