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目的 探究风湿性心脏病病人干扰素调节因子4(IRF4)去泛素化与去泛素化酶USP4互相作用的分子机制,为风湿性心脏病提供新的治疗策略。方法 来自安徽医科大学第一附属医院2015年7月至2016年1月20例风湿性心脏病病人,均行体外循环下瓣膜置换手术,均顺利出院。10例健康对照来自于健康志愿者。分别抽取以上参与实验人员5 mL的外周血,经过细胞培养与转染;通过免疫共沉淀实验观察IRF4的DNA结合结构域以及和配体结合结构域是否可以和USP4互相结合;通过NI-NTA镍螯合树脂纯化实验观察IRF4蛋白针对48位和63位赖氨酸相关的去泛素化是否可以被USP4介导;应用荧光素酶检测技术观察白细胞介素(IL)-4是否可以在IRF4、活化T细胞核因子(NFATC2)和USP4共同促进下表达;利用基因沉默方法在人源Th2细胞中下调USP4。结果 下调USP4后Th2细胞相关细胞因子的转录水平也明显减少;利用流式细胞术检测经USP4抑制剂处理后的Th2细胞表达的IRF4和IL-4均减少;以流式细胞技术测得风湿性心脏病中IL-4表达增高,IRF4表达也增高。结论 风湿性心脏病病人血中IRF4的蛋白稳定表达可以通过USP4去泛素化的作用而实现;IL-4在IRF4表达增加协同NFATC2的情况下可增加表达。 相似文献
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目的：研究负载仙茅苷的三维复合支架的理化特性,并评估其对人脐带静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）和小鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC）促进血管化和骨诱导方面的潜在作用。方法：采用乳液/溶剂蒸发技术制备负载仙茅苷（curculigoside,CUR）的聚己内酯微球（CUR-PM）,借助3D生物打印技术成功构建了由羟基磷灰石（hydroxyapatite,HA）、明胶（gelatin,GEL）和海藻酸钠（sodium alginate,SA）组成的三维复合（hydroxyapatite gelatin sodium alginate,HGS）支架的基础上,制备了负载仙茅苷的聚己内酯微球（hydroxyapatite gelatin sodium alginate curculigoside,HGSC）支架。通过扫描电镜、红外光谱、流变学、力学性能、药物释放和降解性等实验对支架进行表征;通过CCK-8、EdU荧光染色实验以验证支架的生物安全性;通过HUVEC细胞... 相似文献
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目的：探究miR-27b-3p对骨肉瘤（osteosarcoma,OS）细胞生长的影响及其潜在的分子机制。方法：(1)采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析miR-27b-3p在骨肉瘤细胞系中的表达；(2)CCK-8实验、集落形成实验及流式细胞术检测miR-27b-3p以及SSRP1对骨肉瘤细胞生长的影响；(3)使用在线数据库预测miR-27b-3p的靶基因并进行筛选，使用双荧光素报告酶实验测定miR-27b-3p与结构特异性识别蛋白1(structure-specific recognition protein-1,SSRP1)的关系；(4)干扰效率以及过表达效率使用Western blot实验验证。结果：(1)miR-27b-3p在骨肉瘤细胞和临床样本中低表达，过表达miR-27b-3p会抑制骨肉瘤细胞的生长；(2)生物信息学分析和双荧光素报告酶实验证实SSRP1为miR-27b-3p的靶基因，SSRP1表达受miR-27b-3p的直接调控；(3)干扰SSRP1的表达会抑制骨肉瘤细胞的增殖，促进凋亡；(4)过表达SSRP1会部分逆转miR-27b-3p对骨肉瘤细胞生长的抑制效... 相似文献
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