角质细胞生长因子及其防护作用的研究

角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor, KGF)是在1989年由Rubin等[1]从人胎肺成纤维细胞的培养上清中分离并纯化的,并发现具有促进小鼠角质细胞有丝分裂的作用,故将其定名为角质细胞生长因子.KGF是具有肝素结合特性的成纤维细胞生长因子超家族中的成员,又称为FGF-7[2].     

羟基红花黄色素A对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1表达的影响

目的观察羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HYSA)对四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)大鼠肝组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法清洁级雄性SD大鼠60只,体质量(180±30)g,采用CCl4灌胃,制作大鼠肝纤维化模型。将大鼠随机分为A组(正常对照组)、B组(HF模型组)、C组(红花组)、D组(HYSA组)、E(秋水仙碱组),各组从CCl4造模第2周起,腹腔注射给药,8周后取材,HE染色,镜下观察肝组织形态学改变,免疫组化SP法检测TGF-β1在大鼠肝脏中的表达。结果大鼠肝组织HE染色C、D组可见肝细胞水肿较小、体积增加不明显,胞浆疏松化轻,肝纤维化程度明显低于B组,和E组比较无明显差异;免疫组化染色显示C、D组大鼠肝脏中TGF-β1阳性细胞数与E组相近,明显低于B组。结论 HYSA能够保护肝组织,减轻肝细胞水肿程度,抑制其纤维化程度,促进损伤肝组织的修复。     

大鼠腹主动脉平滑肌细胞的培养与鉴定

目的 探讨一种简单、经济获取腹主动脉血管平滑肌细胞的方法,为相关研究提供实验材料.方法 应用改良组织贴块法进行原代培养,胰酶消化传代,运用自然纯化法进行细胞纯化,并使用相差显微镜和SP试剂盒对细胞进行形态学观察以及免疫组化鉴定.结果 90%的组织块接种存活,培养细胞呈典型的"谷峰状"生长,免疫荧光化学技术检测显示胞浆内α平滑肌肌动蛋白阳性表达.结论 本法简便可靠,短期内可获大量高纯度、功能良好的血管平滑肌细胞.     

谷胱甘肽与顺铂合用对肝癌细胞HepG_2增殖及凋亡的影响

目的 探讨谷胱甘肽 (GSH) 与顺铂 (CDDP) 联合应用对人肝癌细胞HepG_2细胞增殖及凋亡的影响.方法 应用酸性磷酸酶法 (APA) 检测细胞生长抑制率;用倒置显微镜观察经CDDP、GSH处理后的细胞形态学改变;采用流式细胞术研究GSH与CDDP合用对细胞周期的影响;AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞凋亡率;罗丹明123染色检测线粒体膜电位 (Δψm) 变化.结果 GSH与CDDP联合应用可以明显抑制HepG_2细胞增殖,癌细胞出现凋亡形态变化,其作用明显高于GSH组与对照组细胞,且不低于CDDP单独给药组;GSH与CDDP联合应用引起Δψm更明显地下降.结论 GSH与CDDP联合用药不降低CDDP对肝癌细胞的作用,其诱导肝癌细胞HepG_2凋亡的作用可能是通过线粒体通路实现的.     

发育中小鼠肾淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1+细胞的研究

目的 探讨淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(LYVE-1)阳性细胞在发育中小鼠肾内的分布及形态特点.方法 胚胎期第13～16天(E13～16)的胎鼠和出生后第1、4、14和21天(P1～21)及成年的小鼠肾,震动切片后进行LYVE-1免疫组织化学和免疫荧光染色.结果 LYVE-1+细胞在小鼠胚胎期第13天的肾髓质开始表达,这种细胞的数量逐渐增多直到出生后第4天,然后逐渐减少,直到出生后第21夭完全消失.这些细胞有粗而不规则的突起,出生后这些突起逐渐变细变长.免疫荧光证实其为巨噬细胞.结论 LYVE-1+细胞为巨噬细胞,并在淋巴管的发生中起一定的作用.     

Shh、Ptch、Gli1与CyclinB1-CDK1在肝癌发生发展过程中的改变

目的观察大鼠诱发肝癌过程中Shh信号通路相关蛋白及细胞周期蛋白的表达变化,探讨其在肝癌发生发展过程中的作用。方法利用二乙基亚硝胺(DEN)制备诱发性大鼠肝癌模型,通过HE染色观察肝组织的形态学变化,应用免疫组织化学方法检测Shh、Ptch、Gli1、CyclinB1、CDK1蛋白在诱发性肝癌发生过程中的表达变化。结果根据HE染色结果将实验动物分为正常对照组、肝细胞损伤期、肝细胞增生-硬化期和肝细胞癌变期。Shh、Ptch、Gli1蛋白阳性表达细胞主要分布在增生结节、癌结节、小叶间胆管上皮细胞和癌周组织中,其阳性表达率均随肝癌发生发展过程逐渐增高的趋势;CyclinB1和CDK1阳性表达的细胞主要分布于门管区、肝小叶的周边及癌结节内,在肝细胞增生-硬化期和肝细胞癌变期大鼠肝组织中表达均高于正常对照组。结论 Shh信号通路被激活后,可通过影响CyclinB1和CDK1蛋白的表达促进细胞G2/M期转变,完成有丝分裂,导致细胞失控性增殖,促进肝癌的发生发展。     

Shh、Ptch、Glil与CyclinB1-CDK1在肝癌发生发展过程中的改变

目的 观察大鼠诱发肝癌过程中shh信号通路相关蛋白及细胞周期蛋白的表达变化,探讨其在肝癌发生发展过程中的作用.方法 利用二乙基亚硝胺(DEN)制备诱发性大鼠肝癌模型,通过HE染色观察肝组织的形态学变化,应用免疫组织化学方法检测Shh、Ptch、Gli1、CyclinB1、CDk1蛋白在诱发性肝癌发生过程中的表达变化.结果 根据HE染色结果将实验动物分为正常对照组、肝细胞损伤期、肝细胞增生一硬化期和肝细胞癌变期.shh、Ptch、Gli1蛋白阳性表达细胞主要分布在增生结节、癌结节、小叶间胆管上皮细胞和癌周组织中,其阳性表达率均随肝癌发生发展过程逐渐增高的趋势:CyclinB1和CDK1阳性表达的细胞主要分布于门管区、肝小叶的周边及癌结节内,在肝细胞增生一硬化期和肝细胞癌变期大鼠肝组织中表达均高于正常对照组.结论 Shh信号通路被激活后,可通过影响CyclinB1和CDK1蛋白的表达促进细胞G2/M期转变,完成有丝分裂,导致细胞失控性增殖,促进肝癌的发生发展.     

Hedgehog信号通路与肿瘤

Hedgehog基因最早是在果蝇里被发现,是美国霍普金斯大学毕淇实验室在20世纪90年代初克隆的。Hedgehog基因编码一种分泌性信号蛋白,最早在果蝇中作为体节极性基因被发现。果蝇和其他动物一样身体分成多个节段,幼虫的每个节段内一部分有毛、一部分无毛,Hedgehog基因突变使无毛部分变成有毛部分,所以又被戏称为“刺猬”基因。果蝇只有一个Hedgehog基因,哺乳动物中发现其同源基因有3个,分别为Sonic hedgehog(Shh)、Ind ianhedgehog(Ihh)和Desert hedgehog(Dhh)。经典的Shh信号通路是由Shh配体、2个跨膜蛋白质受体Patched(Pt     

羟基红花黄色素A对小鼠肝癌移植瘤NF-κB信号通路的影响

目的 研究羟基红花黄色素A(HSYA)对小鼠H22肝癌移植瘤NF-κB信号通路的影响.方法 建立H22移植性肝癌小鼠模型50只,随机分为HSYA高剂量组(4.5 mg/kg)、HSYA中剂量组(2.25 mg/kg)、HSYA低剂量组(1.125 mg/kg)、阳性对照组(50 mg/kg)和生理盐水对照组,给药14 d.免疫印迹检测核转录因子-κB(NF-κB)p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκB-α)及NF-κB抑制蛋白(IκB-α)的水平.结果 HSYA高、中、低剂量组能够下调细胞核p65蛋白的表达,抑制活化p65核移位,抑制IκB-α的磷酸化和胞质内IκB-α的降解即降低NF-κB的转录活性,尤以中剂量组效果最显著.结论 HSYA能抑制小鼠肝癌移植瘤NF-κB的转录活性.     

大鼠肝癌发生过程中肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体及核转录因子-κB的表达

目的:探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)及核转录因子κB(NF-κB)在大鼠肝癌发生过程巾的表达及意义.方法:应用免疫组织化学SP法,对二乙基亚硝胺(DEN)诱发的大鼠肝癌发生过程中TRAIL及NF-κB的动态表达进行检测.结果:二乙基亚硝胺诱发的肝癌为肝细胞癌,大鼠肝癌癌变过程大致经过肝细胞损伤期、肝细胞增生-硬化期和肝细胞癌变期3个阶段.在正常大鼠肝、损伤期及增生硬化期偶见少量肝细胞呈TRAIL阳性表达,进入癌变期,TRAIL阳性细胞数量增多,主要位于癌结节内.在正常大鼠肝,偶见少量肝细胞呈NF-κB阳性表达,随着肝癌发生发展,阳性表达细胞逐渐增多,至诱癌晚期,可见大量NF-κB阳性表达细胞,均比正常肝组织表达高.结论:TRAIl及NF-κB可能与肝癌的发生发展密切相关.