血浆外泌体miR-452作为胃癌诊断的生物标志物

目的筛选胃癌血浆外泌体中差异表达的miRNA,分析其对胃癌诊断的敏感性与特异性及与胃癌患者的疾病特点之间的相关性。方法收集南京医科大学第一附属医院消化内科病理确诊为胃癌的住院患者与消化内科及体检中心的无癌健康对照人群的血液样本,离心后试剂盒抽提血浆外泌体及其RNA,通过透射电子显微镜观察、蛋白质印迹分析(Western blotting)鉴定标志蛋白及纳米粒径分析(nanoparticle tracking analysis, NTA)对血浆外泌体进行鉴定,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)鉴定与胃癌发病相关的miRNA。结果共纳入胃癌患者80例和健康对照80名。成功对2例血浆外泌体(GC1和NC1)进行鉴定以证实其相关特性。在初始筛选阶段,对12例胃癌和12名健康对照者的血浆外泌体RNA进行qRT-PCR验证并依据其各自的2~(-△Ct)值,分析受试者的诊断ROC曲线下面积(AUC)。与健康对照者相比,胃癌的血浆外泌体miR-452-5p表达量显著升高(P=0.002),miR-452-5p的AUC值为0.798(95%CI:0.552～0.883)。而后纳入新的68对样本对筛选结果进一步验证,miR-452-5p的表达趋势与初始筛选一致,且诊断AUC值为0.733(95%CI:0.647～0.818)。分析已验证的miR-452-5p表达水平与胃癌病理特征无相关性(P0.05)。结论血浆外泌miR-452-5p可能为检测胃癌的新型潜在生物标志物,然而其对疾病的病理特性的影响仍需更大样本量的实验进一步研究。     

Exendin-4对AD样学习记忆减退的保护作用及其机制的研究

【立论依据】 阿尔茨海默病(Alzheimer's disease AD)是一种慢性神经退行性疾病。异常过度磷酸化的细胞骨架蛋白Tau和神经丝(NFs)是早期病理改变,与胰岛素信号的失调存在密切关系。艾塞那肽Exendin-4是哺乳动物胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide 1, GLP-1)受体的有效激活剂,能够增加葡萄糖的利用和代谢,与脑内GLP-1R结合后有神经保护作用。 【设计思路】 采用胰岛素抵抗的AD动物模型,研究艾塞那肽对AD样认知、记忆减退和神经纤维退行性变的影响;检测动物的学习记忆能力、胰岛素信号分子、NF的糖基化和磷酸化、突触素的表达水平,进一步阐明胰岛素信号和神经纤维退行性变的关系和可能的机制。 【实验内容】 (1)实验分组:本实验采用PS1/APP/Tau三转基因鼠(3×Tg-AD)和c57BL6小鼠(野生鼠),每种小鼠分4组:①、②组高糖高脂饲料饲养8周,腹腔注射STZ一次建立Ⅱ型糖尿病模型;③、④组腹腔注射生理盐水。①、③组皮下注射Exendin-4,给药治疗8周,②、④组不给药,等量注射生理盐水8周。(2)Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力。(3) 处死小鼠,迅速取脑,左半脑置于10%中性甲醛固定,病理切片用于免疫组织化学荧光。右半脑组织裂解匀浆,蛋白质印迹技术检测小鼠脑组织相关蛋白的改变。 ELISA检测各组小鼠脑内Aβ40和42的沉积。 【材料】 动物:PS1/APP/Tau三转基因鼠(3×Tg-AD)、c57BL6小鼠(野生鼠);试剂:链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)、艾塞那肽(Exendin-4 ) 【可行性】 本团队前期Exendin-4对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护性实验,提示Exendin-4的保护作用,给我们后期动物实验打下的基础。 【创新性】 (1)本设计采用的Tau/APP/PS1三转基因小鼠,建立同时具有NFT和SP两种病理改变和学习记忆障碍的动物模型,能更好的模拟临床AD的发病过程和病理特征。(2)本设计建立胰岛素抵抗的AD模型,有利于阐明了胰岛素信号转导途径的失调在 AD的发病的重要作用。(3)本项目所要阐明的实验现象和机制,还没有相关的研究报告,有很好的创新性和前沿性。     

肠道微生态失衡与结肠炎相关肠癌发生发展的研究进展

炎症性肠病（IBD）患者的肠道处于长期慢性炎症状态,可进展为结肠炎相关肠癌（CAC）。CAC 的发生由多种因素共同作用,在肠道慢性炎症过程中机体异常免疫、肠道微生态失衡以及上皮再生等同时发生动态失调。本文拟对IBD 进展为CAC 这一过程中发生改变的主要菌群进行汇总,旨在揭示肠道菌群在这一过程中所起的重要作用,进而从肠道微生态的角度探讨CAC 的防治新策略。     

高效液相色谱法测定人和小鼠粪便中短链脂肪酸

目的建立高效液相色谱测定人和小鼠粪便中短链脂肪酸的方法。方法样品进行衍生化处理,采用高效液相色谱法测定乙酸、丙酸、丁酸以及戊酸。YMC-Pack FA型色谱柱(250 mm×6.0 mm,5μm),流动相甲醇–水(60∶40,0.1%三氟乙酸调节p H值至4.5),检测波长400 nm,体积流量1.0 m L/min,柱温50℃,进样量20μL。结果乙酸、丙酸、丁酸、戊酸分别在0.300~6.005 mg/L(r=0.999 2)、0.370~7.408 mg/L(r=0.998 5)、0.441~8.811 mg/L(r=0.997 3)、0.511~10.210 mg/L(r=0.997 9)线性关系良好;平均加样回收率分别为93.27%、96.40%、95.67%、95.43%,RSD值分别为4.62%、5.42%、3.64%、3.92%。结论方法操作简单,精密度、稳定性、重复性良好,可用于测定人、小鼠粪便中短链脂肪酸。     

自主学习网络虚拟实验设计以及应用

【立项依据】 基础医学实验对于帮助学生理解和掌握理论课所学内容有重要作用,但是许多医学实验如病理生理学酸碱平衡紊乱实验动物模型的复制,操作简单,但血气分析仪和芯片的费用较高,此类实验很难在真实的实验教学中广泛应用。因此,本研究尝试以病理生理学为例开发设计基础医学虚拟实验并应用于网络,方便学生可以随时随地自主学习。 【设计思路】 第一阶段我们选择病理生理学的高钾血症和酸碱平衡紊乱两个虚拟网络实验。每部分包括实验目的与原理、实验录像、虚拟实验操作、思考题和课后练习题五项。采用flash、Photoshop、Dreamweaver等软件设计虚拟实验人机交互的平台。在老师指导下同学们完成脚本的设计,素材的收集,影像的制作和编辑。 【实验内容】 设计和建立自主学习基础医学虚拟实验并应用于网络,方便学生自主学习。目前已尝试开发酸碱平衡紊乱与高钾血症两个病理生理学实验。虚拟实验系统中包括实验目的与原理、实验录像、虚拟实验操作、思考题和课后练习题五项。其中,实验录像部分由老师和学生录制后上传,虚拟实验操作则是基于flash cs5的基础上利用多款软件制作的教学flash,能够完成学生与虚拟的实验器材的互动点击。学生可以根据自己的需求选择需要的学习内容,而老师可以通过对课后习题的提问来完成对学生自主学习的监督。 【材料】 我们进行了三次家兔实验操作,对操作过程对进行拍摄录像,后期学生进行加工后得到虚拟实验制作所需素材。思考题和练习题根据实验的内容在指导教师编辑。 【可行性】 目前我们已完成高钾血症和酸碱平衡紊乱两个虚拟实验并已放到本校网站精品课程部分。学生可随时登陆学校网站进行学习。学生反馈良好。 【创新性】 (1)由我校学生和老师自主开发,更加切合我校教学要求;(2)尚没有学校制作酸碱平衡紊乱虚拟实验;(3)学生能够随时随地登陆网页进行学习;(4)虚拟实验能够补足传统实验中酸碱平衡紊乱的空缺;(5)虚拟实验的开发制作并不局限于病理生理学,基于现有模版能够开发出更多学科的虚拟实验。     

基于16SrDNA扩增子测序探究脱氧胆酸对肠型胃癌模型INS⁃GAS小鼠胃内菌群结构的影响

目的：探究次级胆汁酸脱氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)对肠型胃癌模型INS-GAS小鼠胃内菌群结构的影响。方法：将10只8周龄雄性INS-GAS小鼠随机分为2组,每组5只,一组予以0.2% DCA饮水,另一组饮用生理盐水(normal saline, NS)溶剂。另有5只同窝雄性FVB/N野生型小鼠予以0.2% DCA饮水作为基因型对照组。3个月饮水干预结束后收集各组小鼠胃内容物行16S rDNA扩增子测序,进行胃内菌群相对丰度、α多样性指数、β多样性及差异物种分析。分离胃体和胃窦黏膜组织,qRT-PCR检测肠化标志物cdx2、klf5、vil1和muc2 mRNA表达。结果：与对照组小鼠相比,DCA改变了INS-GAS小鼠胃内优势菌种,属水平上相对丰度最高的菌种由乳杆菌科菌属(61.93%)变为未定义蓝藻细菌属(58.70%)。两组小鼠胃内菌群丰度及多样性均无显著差异(ACE指数P=0.213,Chao1指数P=0.280;Shannon指数P=0.391,Simpson指数P=0.205)。主成分分析发现两组小鼠胃内菌群结构差异度大,组间差异大于组内差异(R=0.368,P=0.032)。DCA饮水促进INS-GAS小鼠胃内蓝藻细菌在门、纲、目、科和属各个水平上显著增高,毛螺菌科Anaerostipes菌属以及两种蓝藻细菌属菌种Lolium perenne和Phaseolus vulgaris丰度也显著增高。此外,DCA饮水同样导致INS-GAS小鼠胃内厚壁菌门、杆菌纲和乳杆菌(目、科和属水平)丰度显著降低,罗伊氏乳杆菌丰度也显著降低。DCA饮水的INS-GAS小鼠胃体及胃窦部黏膜组织muc2 mRNA表达均显著高于NS饮水的INS-GAS小鼠(P均＜ 0.05)。此外,同为DCA饮水的INS-GAS小鼠胃内菌群丰度显著高于FVB/N小鼠(ACE指数P=0.022; Chao1指数P=0.028),两组小鼠组内差异大于组间差异,但尚无统计学意义(R=-0.056,P=0.647)。结论：DCA改变了INS-GAS 小鼠胃内菌群结构,主要为蓝藻细菌属和毛螺菌科Anaerostipes菌属相对丰度增高,乳杆菌属相对丰度降低,且促进了胃黏膜肠化标志物muc2表达。     

结直肠侧向发育型肿瘤包括15例多发性病变的临床病理特征及癌变风险因素分析

目的：分析结直肠侧向发育型肿瘤（laterally spreading tumor,LST）包括15例多发性病变的临床病理特征及癌变风险因素。方法：回顾性分析2010年1月—2020年12月在南京医科大学第一附属医院消化内科经结肠镜检查确诊的209例LST患者的临床资料。结果：共222处LST病灶纳入研究,颗粒均一型LST 30处（13.5%）,结节混合型LST 64处（28.8%）,扁平隆起型LST 118处（53.2%）,假凹陷型LST 10处（4.5%）。其中,多发性LST共15处病灶,好发于右半结肠（80.0%,12/15）,病理以低级别上皮内瘤变为主（66.7%,10/15）,以内镜黏膜下剥离术为主要的治疗手段（60.0%,9/15）,有肠息肉病史的患者更易出现多发性LST,多发性LST以颗粒均一型多见,单发性以扁平隆起型多见。多因素Logistic回归分析表明,病灶长径 > 20 mm和内镜医师年资低（OR=5.074,95%CI：2.011~12.801,P < 0.05）是LST癌变的独立风险因素,其中病灶长径≥40 mm（OR=5.468,95%CI：1.792~16.684,P < 0.05）癌变风险更高。结论：病灶长径 > 20 mm和内镜医师年资低是LST癌变的独立风险因素,有肠息肉病史的患者更易出现多发性LST,且以颗粒均一型多见,单发性则以扁平隆起型多见。     

SRPX1基因在卵巢癌组织的表达和作用

【立论依据】 SRPX1(别名drs/EXT1),在人类的多种肿瘤细胞系(包括结肠、膀胱、睾丸、肺等)以及癌组织中drs mRNA的表达量显著降低,暗示了drs基因在抑制肿瘤形成过程中所发挥的作用。由drs基因介导的细胞凋亡和自我吞噬反应可以作为其肿瘤抑制作用的分子基础。 【设计思路】 以正常卵巢组织为对照进行临床病例分析:设5个实验组:正常卵巢组织、卵巢良性黏液性肿瘤组、卵巢交界性黏液性肿瘤组、卵巢恶性黏液性肿瘤组(腺癌,原发灶)、卵巢恶性黏液性肿瘤组(腺癌,转移灶)。应用免疫组化的方法,检测SRPX1表达状况,探索SRPX1基因与肿瘤发生及患者生存率和复发率等临床参数的关系;采用代表性的HO-8910(低转移性的人卵巢癌细胞株)、HO-8910pm(高转移性的人卵巢癌细胞株)为研究对象,用免疫组化和蛋白质印迹法检测SRPX1蛋白表达情况;采用基因敲除技术,特异性的敲除正常卵巢组织细胞的SRPX1基因,用免疫组化和蛋白质印迹法检测SRPX1蛋白表达情况,并观察正常卵巢组织细胞的生长情况。 【实验内容】 为了阐述SRPX1基因在上皮型卵巢癌的发生、转移中所发挥的作用,本研究通过临床病例分析,细胞培养和特异性的敲除正常卵巢组织细胞的SRPX1基因,检测和分析SRPX1基因在卵巢癌组织的表达和作用。 【材料】 临床病理组织,细胞培养基,试剂,抗体,操作器械,实验仪器。 【可行性】 和正常卵巢上皮组织对比,SRPX1蛋白在人卵巢癌细胞株中表达明显降低,与恶性程度相关,在高转移的细胞系表达减低。 【创新性】 本项目所要阐明的实验现象和机制,即对SRPX1基因在卵巢癌组织的表达和作用分析后,为开发新的肿瘤治疗药物提供理论依据。本课题基于我们最新的发现基础上,目前国际上还没有这方面的研究报告,据有很好的创新性和前沿性。     

内镜切除术后异时性胃癌的研究进展

内镜黏膜下剥离术已广泛应用于早期胃癌的治疗。由于内镜切除几乎保留了完整的胃黏膜,术后异时性胃癌（metachronous gastric cancer,MGC）的发生逐渐引起人们的重视。本文针对MGC的临床病理特征、长期预后和危险因素进行归纳总结,旨在为临床预防和治疗提供借鉴。