不同离心力分离外周血单个核细胞的条件优化

目的观察不同离心力对人外周血单个核细胞(PBMC)分离的影响。方法采用聚蔗糖密度梯度离心法分离人外周血中PBMC,不同分离离心力及洗涤离心力获取细胞,利用流式细胞仪检测细胞得率和存活状况,并进行统计学分析。结果分离离心力结果:离心力600g时获取的细胞数最多;24h检测的凋亡细胞数在离心力300～900g分离时差异无统计学意义(P0.05)且相对较少,增加离心力,凋亡细胞数增加;72h检测离心力大于1 200g或低至300g时,存活细胞数显著减少。洗涤离心力结果:离心力150g时细胞得率显著低于300～2 400g时;24h检测细胞凋亡显示离心力大于600g时,凋亡细胞数增加;72h检测显示洗涤离心力大于1 200g时,存活细胞数显著减少。结论分离离心力在600～900g及洗涤离心力在300～600g均可用于PBMC的分离。     

伪石蒜碱抑制活化T细胞增殖与功能的机制研究

目的 探究伪石蒜碱抑制活化T细胞增殖与功能的机制。 方法 密度梯度离心法和免疫磁珠法分离纯化T细胞,抗CD3/CD28或PHA活化T细胞。流式细胞术检测细胞增殖、细胞凋亡、CD25表达及细胞周期;ELISE检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-17A、IFN-γ的分泌水平。 结果 伪石蒜碱抑制抗CD3/CD28或PHA活化T细胞增殖,IC50分别为0.97±0.22 μmol?L-1和0.82±0.07 μmol?L-1。在完全抑制活化T细胞增殖的浓度下,伪石蒜碱不诱导活化T细胞凋亡,且不对静息T细胞的细胞活力产生显著影响。伪石蒜碱不影响活化T细胞表达CD25和分泌IL-2,但阻滞细胞周期于G0/G1期。伪石蒜碱显著抑制IL-6、IL-17A、IFN-γ的分泌。结论 伪石蒜碱不影响T细胞的活化,但通过阻滞细胞周期于G0/G1期抑制活化T细胞的增殖,提示伪石蒜碱有望成为先导化合物用于开发新型免疫抑制剂。     

氮网球花定碱盐酸盐对活化T细胞增殖的抑制作用

目的探究氮网球花定碱盐酸盐(NMHC)抑制活化T细胞增殖的作用机制。方法Ficoll法提取分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠法纯化出PBMC中的T细胞,抗人CD3/CD28抗体活化纯化后的静息T细胞。NMHC 0.125,0.5,2和8μmol·L^-1与静息T细胞作用,用流式细胞术检测细胞毒性(96 h)、活化T细胞增殖(96 h)、T细胞表面活化标志CD25表达(24 h)和活化T细胞细胞周期(72 h)。NMHC 0.125,0.5,2和8 pmol·L^-1与活化T细胞作用24或48 h,用ELISA测定培养上清中白细胞介素2(IL-2)、IL-6、IL-17A和干扰素γ(IFN-γ)水平。结果NMHC 0.125,0.5,2和8μmol·L^-1抑制抗CD3/CD28抗体活化的T细胞增殖,IC₅₀为(0.28±0.04)μmol·L^-1,且与静息T细胞作用96 h无显著细胞毒性。NMHC显著抑制CD25表达,具有浓度效应关系(r=-0.980,P<0.05)。NMHC 2和8μmol·L^-1作用72 h可调节细胞周期,G₀/G₁期细胞增加(P<0.05),S期细胞减少(P<0.05),具有浓度-效应关系(r=0.920,P<0.05);细胞上清液中IL-2,IL-6,IL-17A和IFN-γ水平显著降低(P<0.05)。结论NMHC可抑制T细胞活化标志分子CD25的表达和IL-2的分泌,阻滞细胞周期于G₀/G₁期,同时抑制炎性细胞因子IL-6,IL-17A和IFN-γ的分泌,这可能是其抑制T细胞增殖的作用机制之一。     

水仙环素抑制T细胞增殖的作用机制

目的探究水仙环素抑制T细胞增殖与功能的作用机制。方法密度梯度离心法及免疫磁珠法纯化人外周血T细胞,anti-CD3/anti-CD28抗体活化T细胞。使用流式细胞仪检测细胞增殖、CD25的表达、细胞毒性及细胞周期;酶联免疫吸附试验检测细胞因子IL-2、IL-6、IL^-17及IFN-γ的分泌水平。结果水仙环素抑制anti-CD3/anti-CD28抗体活化的T细胞增殖,IC₅₀为(0.011±0.001)μmol·L^-1,且浓度达0.24μmol·L^-1也不影响静息T细胞的存活。水仙环素抑制活化T细胞表达CD25和分泌IL-2,阻滞T细胞周期于G_0/G_1期。水仙环素对细胞因子IL-6、IL^-17及IFN-γ的抑制作用呈剂量依赖效应。结论水仙环素抑制T细胞增殖活化并显著抑制促炎细胞因子分泌,提示水仙环素有望成为先导化合物开发新型免疫抑制剂。