人肝细胞癌抗原HCA661 DNA疫苗的构建

目的：构建人肝细胞癌特异性抗原HCA661的DNA疫苗。方法：通过PCR从SMMC7721中获得编码肝细胞癌特异抗原HCA661的基因组DNA序列,插入pGEM-T easy载体后测序,并将目的基因定向亚克隆进入真核表达载体pCI-neo,以PCR和酶切方法鉴定构建的重组真核表达质粒pCI-neo-HCA661。结果：PCR产物为 1 040 bp,测序结果与Gene Bank登记完全相同;PCR和酶切结果表明,构建的重组真核表达质粒中含有正确编码的目的基因片段。结论：成功地构建了含有HCA661基因的DNA疫苗。     

丙种球蛋白对格林-巴利综合征患者白介素12与白介素18表达的影响及其相关性研究

目的探讨丙种球蛋白治疗对格林-巴利综合征(GBS)对患者体内白介素12(IL12)和白介素18(IL18)的表达的影响。方法用ELISA方法对静脉注射丙种球蛋白(IVIG)治疗GBS前后的血清、脑脊液IL12和IL18表达,同时用RT-RCR法检测血淋巴细胞白介素12受体(IL12R)mRNA与IL18RmRNA的表达。结果17例GBS治疗前血清IL12含量为45.6±12.2pg/ml,治疗后为17.1±4.74pg/ml(P<0.01);IL18治疗前为157.5±39.3pg/ml,治疗后为126.2±22.6pg/ml。5例GBS治疗前脑脊液IL12为25.2±5.8pg/ml,治疗后为16.7±3.6pg/ml。IL-18治疗前为121.8±27.9pg/ml,治疗后为53.6±15.6pg/ml。17例GBS治疗前血淋巴细胞表面受体IL-12RmRNA的表达强度为0.2948±0.098,治疗后为0.1507±0.087,与治疗前比显著降低(P<0.05)。治疗前血淋巴细胞IL18RmRNA表达强度为0.5352±0.1134,治疗后为0.2843±0.1127,与治疗前比显著降低(P<0.05)。IL12与IL18蛋白在血清中的表达呈显著正相关;IL12与IL18淋巴细胞表面受体mRNA的表达呈显著正相关。结论丙种球蛋白治疗能够下调GBS患者IL12与IL18的表达。     

人肝细胞癌相关抗原661基因在大肠杆菌中的克隆、表达及产物纯化

目的构建人肝细胞癌相关抗原661(Hepatocellular carcinoma-associated antigens 661,HCA661)原核表达载体并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白.方法人肝细胞癌SMMC7721细胞基因组DNA经PCR扩增HCA661基因,克隆到pGEM-T easy中进行酶切、PCR和测序鉴定;构建重组质粒pQE-HCA661,并转化大肠杆菌M15[pREP4],经IPTG诱导表达目的蛋白;镍离子亲和层析柱(Ni2 -NTA)纯化靶蛋白后进行Western blot鉴定.结果目的基因经酶切和PCR鉴定结果与预期相符,测序结果显示目的基因与GeneBank登录的序列完全一致;工程化大肠杆菌M15[pREP4]经IPTG诱导表达约39 kD的目的蛋白.Western blot鉴定结果显示,纯化重组蛋白能够分别与抗His单克隆抗体和抗HCA661多克隆抗体特异性结合.结论本实验成功地构建了重组原核表达质粒pQE-HCA661,工程菌表达的重组HCA661带有6×His标签,并具有免疫原性,可以用于制备单克隆抗体,或用于检测患者血清中肝细胞癌抗体以预测肿瘤恶性程度.     

基因佐剂结核杆菌HSP70增强HCA661基因疫苗免疫应答

目的：评价结核分枝杆菌HSP70（Mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,mtHSP70）羧基端作为基因佐剂对HCA661（Hepatocellular carcinoma associated antigens 661）基因疫苗免疫效果的影响。方法：将HCA661及与mtHSP70羧基端的串联体分别克隆到pCI-neo中构建基因疫苗;将eGFP及与mtHSP70羧基端的串联体分别克隆到pCI-neo,体外转染φA细胞,根据eGFP的表达评价重组质粒中靶基因的转录表达效率。基因疫苗免疫BALB/c小鼠,SABC、Western blot检测免疫血清中特异性HCA661抗体;流式细胞术、ELISA法检测免疫血清中特异性HCA661抗体水平。结果：重组质粒构建成功;80%φA细胞转染eGFP后呈现绿色荧光;单基因和融合基因疫苗组动物均产生了针对HCA661的特异性抗体,融合疫苗组诱导的抗体水平较单基因疫苗组显著增高,融合基因疫苗组未产生针对mtHSP70的抗体。结论：mtHSP70羧基端作为基因佐剂增强机体对HCA661融合基因疫苗的特异性免疫应答。     

天麻及其酚类化合物对小鼠的抗焦虑作用

天麻Gastrodia elata Blume的抗焦虑作用研究鲜有报道。因此,作者进行了以下试验,研究该植物根茎水提取物(AEGE)以及所含的酚类化合物4-羟基苄醇(HA)和4-羟基苯甲醛(HD)对小鼠在高架十字迷宫实验中的抗焦虑作用,并观察了AEGE与氟马西尼或WAY 100635同服对AEGE抗焦虑作用的影响。选用雄性ICR小鼠。在开场实验中,小鼠给以AEGE50、100、200、400 mg/kg,HA或HD5、10、25、50、100 mg/kg,记录给药1h后小鼠5min内水平运动能力。在高架十字迷宫(EPM)实验中,记录给以试药(剂量同上)1h后,小鼠5min内进入开臂或闭臂的次数与停留时间,以…     

缬草提取物Ze911通过激活大鼠皮层神经元的腺苷A_1受体抑制突触后电位

腺苷有4个G-蛋白耦联受体A1、A2A、A2B和A3腺苷A1受体(A1Rs)在CNS广泛存在,并在大脑皮质、脑干和骨髓中高水平表达,其激活后具有诱导睡眠和EEG同步效应。缬草提取物Ze911具有A1Rs激动剂活性。因此,作者通过大脑切片技术评价了缬草提取物Ze911对阿糖腺苷A1受体介导的大鼠扣带皮质膜电位及锥体细胞突后电位(PSPs)的影响。将雄性Wistar大鼠大脑制备5个冠状薄片(30μm),处理1h后,开始进行电生理记录。通过去极化电脉冲注射(0.4~0.6nA,95ms,2.5Hz)鉴定额叶和扣带回皮质锥体细胞,每个薄片上选择一个细胞用于记录膜电位。为测定试药对膜…     

稀土对大鼠胃粘膜抗氧化能力的影响

目的　探讨大鼠短期服用硝酸稀土对胃粘膜抗氧化能力的影响。方法　按分组给药 30d后检测胃粘膜超氧化物歧化酶 (SOD)和过氧化脂质 (LPO)含量。结果　硝酸稀土 2 .0mg/kg和混合稀土 0 .1mg/kg组SOD含量显著升高 ;硝酸稀土 2 0 .0mg/kg组LPO含量显著升高 ,混合稀土 2 .0mg/kg和 0 .1mg/kg组LPO显著降低。结论　短期口服 2 0 .0mg/kg硝酸稀土可促进胃粘膜内脂质过氧化过程 ,0 .1、2 .0mg/kg的硝酸稀土可增强胃粘膜抗氧化能力 ,并抑制脂质过氧化过程     

017 经厌氧处理的桑叶能提高其对缺血损伤的神经保护作用

几种神经疾病，如阿尔茨海默病、帕金森病与脑内γ-氨基丁酸（GABA）的耗竭有关。作者开发了一种经多种厌氧处理，增加桑Morus alba L．叶中GABA的方法，并研究了这种桑叶对局部缺血损伤的神经保护作用。     

经厌氧处理的桑叶能提高其对缺血损伤的神经保护作用

几种神经疾病,如阿尔茨海默病、帕金森病与脑内γ-氨基丁酸(GABA)的耗竭有关。作者开发了一种经多种厌氧处理,增加桑Morus alba L.叶中GABA的方法,并研究了这种桑叶对局部缺血损伤的神经保护作用。桑叶干粉用85%甲醇于85℃提取1h,过滤,真空蒸干溶剂的所得物(ML)过筛;粉末用3倍体积的1%谷氨酸钠混合(MSG),溶液用氮气在乙烯袋中进行厌氧处理。该乙烯袋于40℃培养3h,然后于100℃水浴中加热5min,以使酶变性。分离的粉末过滤,干燥,用85%甲醇提取1h,再过滤,真空干燥富含GABA的桑叶提取物(GAML)。分别检测了ML、GAML和神经生长因子(NG…     

pIRES2-EGFP-Aβ42重组质粒的构建及其在N2a细胞中的表达

目的构建重组质粒pIRES2-EGFP-Aβ42,转染小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞,建立稳定表达Aβ42的Neuro-2a细胞系,为体外研究阿尔茨海默病提供新的途径。方法将质粒pGEMT-Aβ42上的Aβ42基因酶切后,与真核表达质粒pIRES2-EGFP连接,构建重组质粒pIRES2-EGFP-Aβ42。酶切鉴定正确后,采用脂质体介导法转染Neuro-2a细胞,800mg/L G418筛选4w,后续培养G418浓度维持在200mg/L。扩增细胞以低密度培养,HE染色观察细胞形态,免疫组织化学染色法检测Aβ42的表达。结果酶切鉴定显示重组质粒pIRES2-EGFP-Aβ42构建正确;pIRES2-EGFP-Aβ42转染Neuro-2a细胞,经G418筛选后扩增的细胞均表达绿色荧光蛋白,呈现绿色荧光;免疫组织化学染色显示经G418筛选后的细胞表达Aβ42;HE染色结果显示低密度培养条件下,细胞内表达的Aβ42未引起对细胞形态和增殖能力的明显改变。结论成功构建重组质粒pIRES2-EGFP-Aβ42,获得稳定表达Aβ42的细胞系。