人内质网分子伴侣BiP的克隆、表达及其在RA患者血清抗体检测中的作用

以类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑膜组织文库cDNA为模板,用PCR方法扩增得到1965 bp人内质网分子伴侣BiP的全长cDNA,将其克隆入OmicsLinkTM表达载体pReceiver-B01a,构建重组表达质粒pReceiver-B01a-BiP。重组表达质粒导入大肠杆菌BL-21(DE3)菌株中诱导表达目的蛋白,表达产物以Ni+-NTA agarose层析柱纯化。SDS-PAGE和免疫印迹法(Western blot)分析发现,表达产物以可溶性蛋白和包涵体形式共同存在,表达量约占菌体蛋白总量的20%~30%。相对分子质量约为80000,纯度达到电泳级。经免疫印迹法鉴定,获得的BiP重组蛋白可以与RA患者血清反应,检测的抗BiP抗体在RA患者血清中的阳性率为75.4%(49/65),明显高于系统性红斑狼疮(systemic lupus erythe-matosus,SLE)患者14.6%(7/48)、原发性干燥综合征(primary Sj gren’s syndrome,pSS)患者7.3%(4/55)及正常人0%(0/71)(P<0.01)。表明,经原核表达获得的BiP全长蛋白,RA患者血清抗体可以很好结合,有望应用于临床血清学诊断。     

采用等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条检测登革热病毒

目的: 探讨等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条用于登革热病毒（DENV）快速检测的可行性。方法: 采用磁珠富集法提取病毒总RNA,并逆转录为cDNA用于等温链置换扩增检测体系;等温链置换扩增用于检测DENV,琼脂糖凝胶电泳用于分析等温链置换扩增产物及其检测的敏感度;采用柠檬酸三钠还原法制备用于试纸条的纳米金颗粒;利用核酸碱基互补配对原理设计纳米金测流层析试纸条的检测线与控制线,建立DENV的检测体系。结果: 等温链置换扩增的敏感度为10 fmol/L。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的敏感度也为10 fmol/L,取其检测样品浓度的对数值进行线性分析,检测浓度范围为10~10¹² fmol/L,符合线性回归方程,线性相关系数（R²）为0.98。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的特异性较高,与其他对照组无交叉。结论: 建立了基于等温链置换扩增反应的纳米金试纸条用于DENV的检测方法,检测结果肉眼可见,敏感度高,可用于DENV的快速检测。     

单硝酸异山梨酯联合尼可地尔治疗2型糖尿病合并稳定型心绞痛的临床研究

目的探讨单硝酸异山梨酯片联合尼可地尔片治疗2型糖尿病合并稳定型心绞痛的临床疗效。方法选取海南省第二人民医院2014年2月—2015年3月收治的2型糖尿病合并稳定型心绞痛患者90例,随机分为对照组和治疗组,每组各45例。两组患者均给予常规降血脂、降血糖等基础治疗。对照组口服尼可地尔片,5 mg/次,3次/d;治疗组在此基础上加服单硝酸异山梨酯片,20 mg/次,2次/d。两组患者均持续治疗4周。比较两组患者治疗前后心绞痛疗效和心电图疗效。记录两组患者治疗前后的心绞痛发作次数、持续时间。同时比较两组患者治疗前后血脂、空腹血糖(FBG)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平情况。结果治疗后治疗组的心绞痛治疗有效率为91.11%,显著高于对照组的75.56%,两组心绞痛有效率比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后治疗组的心电图治疗有效率为91.11%,显著高于对照组的73.33%,两组心电图治疗有效率比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后两组患者的心绞痛发作频率、发作时间较治疗前均显著降低(P0.05),且治疗组这些观察指标的改善程度优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后两组患者的三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)较治疗前均显著降低,高密度脂蛋白(HDL-C)显著升高(P0.05)。治疗后两组患者的SOD、MDA水平较治疗前均显著改善(P0.05),且治疗组这些观察指标的改善程度优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论单硝酸异山梨酯片联合尼可地尔片治疗2型糖尿病合并稳定型心绞痛疗效较好,可显著降低患者心绞痛发作频率、发作时间,改善患者预后,具有一定的临床推广应用价值。     

痰热清对小儿患者感染性惊厥的临床疗效及安全性评价

目的:评价痰热清对小儿患者感染性惊厥的临床疗效及安全性。方法:选取2014年4月—2016年4月间收治的感染性惊厥患儿94例,按照患儿住院的先后顺序分成观察组和对照组,每组47例;观察组患者均给予痰热清治疗,对照组患者均给予抗惊厥常规治疗,评价两组患者治疗后的总有效率和退热止痉时间、惊厥消失时间和惊厥意识恢复时间。结果:观察组患者治疗后的总有效率为95.75%稍高于对照组患者为93.62%,经比较其差异无统计学意义(P>0.05);两组患者治疗后退热止痉时间、惊厥消失时间和惊厥意识恢复时间经比较其差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:小儿感染性惊厥患者给予痰热清治疗,其治疗效果较佳,且退热止痉时间恢复较快。     

性激素、超声及骨龄指数联合监测对女童性早熟的早期诊断价值

目的：探讨性激素、超声及骨龄指数(BAI)联合监测对女童性早熟的诊断价值。方法：选取2020年7月—2022年12月某院收治的性早熟女童100例，根据促性腺素释放激素(Gnrh)激发试验分为中枢性性早熟(CPP)组和外周性性早熟(PPP)组，各50例。2组女童均接受性激素、超声及BAI监测，分析性激素、超声及BAI联合监测诊断女童性早熟的价值。结果：CPP组FSH[(9.43±2.62)mIU/L]、LH[(3.13±0.85)mIU/L]、E2[(64.35±10.16)mIU/L]、子宫容积[(4.35±0.92)mL]、卵巢容积[(3.63±0.82)mL]、BAI(0.27±0.10)均高于PPP组[(3.43±1.06)mIU/L、(1.65±0.67)mIU/L、(24.63±4.73)mIU/L、(3.53±0.85)mL、(2.37±0.69)mL、(0.18±0.07)],差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线结果显示，FSH、LH、E2、子宫容积、卵巢容积、BAI及联合监测诊断女童性早熟的AUC分别为0.818、0.761、0.839、0.755、0....     

优化海藻酸钠-壳聚糖多孔复合支架用于人脐带来源间充质干细胞的体外扩增

目的通过制备及优化海藻酸钠-壳聚糖多孔复合支架用于人脐带来源的间充质干细胞体外扩增,为干细胞在组织工程中的应用与疾病治疗提供实验基础。方法通过制备海藻酸钠-壳聚糖多孔复合支架,并接枝多聚赖氨酸对其优化。然后,从产妇脐带中分离出间充质干细胞,接种在复合支架表面,监控其增殖情况。利用细胞计数法和CCK-8试剂盒,绘制细胞增殖曲线,并用β-半乳糖苷酶衰老检测试剂盒评估干细胞的衰老程度。结果成功制备并优化了海藻酸钠-壳聚糖复合支架,发现在接枝多聚赖氨酸的支架上接种间充质干细胞,细胞能够很好地附着,覆盖在复合支架表面,且能快速增殖。结论优化的海藻酸钠-壳聚糖多孔复合支架能为细胞增殖提供优良环境,具备体外扩增间充质干细胞的可行性,可作为组织工程应用的潜在材料。     

江西地区23例18岁以下儿童2019冠状病毒病临床分析

目的 研究18岁以下儿童2019冠状病毒病（COVID-19）的临床特征。方法 回顾性分析江西地区2020年1月21日至2020年2月29日确诊的23例儿童COVID-19的临床资料（患儿年龄为3个月至17岁8个月）。结果 23例COVID-19患儿中，17例为家庭聚集性发病；无症状感染3例（13%），轻型6例（26%），普通型14例（61%）。发热16例（70%），咳嗽11例（48%），发热伴咳嗽8例（35%），肺部湿啰音8例（35%）。从发病或首次新型冠状病毒SARS-CoV-2核酸阳性至核酸转阴时间为6~24 d（中位数12 d）。3例白细胞总数降低，2例淋巴细胞下降，2例C反应蛋白增高，2例D-二聚体增高。12例肺部CT异常，其中肺内片状磨玻璃影9例。23例均应用了抗病毒治疗，均治愈出院。结论 18岁以下儿童COVID-19多为家庭聚集性发病，临床表现、实验室检查无特异性，症状较轻，预后较好。流行病学史在18岁以下儿童COVID-19诊断中非常重要。     

普米克令舒、爱全乐雾化治疗小儿毛细支气管炎临床观察

目的观察普米克令舒和爱全乐联合氧气雾化吸入治疗毛细支气管炎的疗效。方法将63例毛细支气管炎随机分为2组,对照组31例,在综合治疗基础上单用爱全乐;治疗组32例,联合爱全乐、普米克令舒。观察2组疗效及临床症状、体征改善时间。结果治疗组在缓解临床症状及体征改善时间方面优于对照组,差异有显著性。结论普米克令舒和爱全乐联合氧气驱动雾化吸入具有协同作用,可提高治愈率,缩短住院时间,值得临床推广。     

人内质网分子伴侣BiP抗原表位筛选及其在RA血清学诊断中的作用研究

目的:筛选鉴定人内质网分子伴侣BiP抗原表位多肽,探讨其在类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)血清学诊断中的价值.方法:运用计算机软件分析BiP蛋白的结构特点及抗原决定簇分布,根据结果设计合成系列多肽.比较合成多肽与RA患者血清(BiP抗体阳性)IgG的反应强弱,鉴定抗原抗体反应最强的抗原表位多肽.进一步以获得的BiP抗原表位多肽作为包被抗原,检测79例RA患者、34例系统性红斑狼疮(SLE)患者、66例干燥综合征(SS)患者和173例正常人血清中抗BiP抗原表位多肽IgG抗体水平.结果:筛选到一条与RA患者血清反应最强的多肽(N403),抗N403多肽IgG抗体在RA患者中的阳性率(67%),明显高于SS患者(29%)、SLE患者(0%)、和正常人(0%)(P＜0.01).抗N403多肽IgG抗体在RA血清学诊断中的敏感性为67%,特异性为93%.而且该抗体的检测对于RF、CCP、HRF、RA33、AKA、APF等抗体阴性的RA患者的诊断具有重要意义.结论:筛选获得的BiP抗原表位多肽N403,其检测抗体在RA临床血清诊断中具有很好的应用价值.