重组DNA技术的医学研究思路

重组DNA技术作为医学分子生物学的一门重要技术,目前已经广泛应用于医学各个领域,在生物制药、基因诊断与治疗、遗传病的防治等方面发挥了巨大作用。因此本文就重组DNA技术的概念、过程及医学研究应用和研究思路作一简单总结。     

医学分子生物学教学改革与探索

针对医学生的特点及在医学分子生物学教学过程中出现的问题,对医学分子生物学教学进行了改革和探索,提出了适合医学生的有针对性的意见和建议,以期提高医学分子生物学的教学质量。     

甜菜对大鼠高同型半胱氨酸血症抑制作用

目的探讨富含甜菜碱(glycine betaine)的甜菜(beet)对胍基乙酸(GAA)诱导的高同型半胱氨酸血症的抑制效果。方法将48只健康Wistar大鼠随机分为6组:对照组、模型组(饲料添加0.5%GAA)、甜菜碱低、高剂量组(饲料分别含0.5%GAA+0.05%、0.10%Bet)、甜菜低、高剂量组(饲料分别含0.5%GAA+3.94%、7.88%beet),连续10 d,处死动物,采集血液、肝脏样品,测定血液生化指标及肝脏甲硫氨酸中间代谢物和酶学指标。结果与对照组比较,模型组大鼠血浆和肝脏同型半胱氨酸(Hcy)浓度[分别为(32.2±0.4)μmol/L、(8.93±0.5)nmol/g]明显升高(P<0.05);与模型组比较,高剂量甜菜碱组与甜菜组大鼠血浆和肝脏中Hcy浓度[分别为(21.5±0.7)、(21.1±0.6)μmol/L与(5.75±0.2)、(4.64±0.2)nmol/g]明显下降;与对照组比较,模型组大鼠肝脏中S-腺苷蛋氨酸(SAM)含量[(59.7(1.3)nmol/L]下降、S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosine homocysteine,SAH)含量[(31.8(0.9)nmol/L]升高(P<0.05);与模型组比较,高剂量甜菜碱组与甜菜组大鼠肝脏中SAM含量[(71.4(1.4)、(75.5(4.1)nmol/L]升高,SAH含量[(27.1(0.7)、(26.5(1.6)nmol/L]下降(P<0.05)。甜菜碱和甜菜对GAA诱导的Bet浓度下降、BHMT和CBS活性降低具有拮抗作用;与对照组比较,模型组大鼠肝脏同型半胱氨酸甜菜碱甲基转移酶(BHMT)活性[(1.08±0.07)nmol/mgprot]降低(P<0.05);与模型组比较,高剂量甜菜组大鼠肝脏BHMT活性[(2.05±0.11)nmol/mgprot]升高(P<0.05)。结论富含甜菜碱的甜菜可降低大鼠肝脏和血液中Hcy浓度,抑制由胍基乙酸诱导的高同型半胱氨酸血症,其机制可能与Hcy的再甲基化和胱硫醚的合成有关。     

鸡α-珠蛋白基因5′端MAR调控GFP基因在COS7细胞中表达的研究

目的研究鸡α-珠蛋白基因5′端核基质结合区(matrix association region,MAR)的基因表达调控作用。方法采用PCR方法扩增鸡α-珠蛋白基因5′端1 600 bp长度的MAR,并将该MAR连接在pCMV/GFP载体CMV启动子上游和GFP报告基因下游,构建含2个MAR的真核表达载体pGFP/2MAR。采用Lipofectimine脂质体介导法转染COS7细胞,用荧光显微镜和流式细胞术对荧光表达进行观察、定量。结果荧光显微镜观察pGFP/2MAR在转染48 h后荧光表达量明显高于pCMV/GFP的荧光表达量;流式细胞仪分析表明,在COS7细胞中pCMV/GFP和pGFP/2MAR的荧光表达量分别为17.9%和33.6%。结论该MAR确实能提高GFP在真核细胞中的表达量。     

人VEGF基因昆虫杆状病毒表达载体的构建

为了在昆虫杆状病毒表达系统表达人血管内皮细胞生长因子 (VEGF)基因 ,用HindⅢ对 pcDNA3 .1 /VEGF进行酶切 ,回收 5 75bp的VEGF片段 ,与 pFastBacI载体连接 ,得到含VEGF基因的转座载体 pFast/VEGF ,NcoI酶切鉴定方向 ;将其转化到含有穿梭载体杆粒 (Bacmid)的DH1 0Bac感受态细胞 ,得到重组杆状病毒穿梭载体Bacmid/VEGF ,采用琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增对重组转座载体、穿梭载体进行鉴定。将Bacmid/VEGF转染sf 9细胞 ,进行病毒重组及噬斑筛选。结果 :琼脂糖电泳得到杆粒 (Bacmid)DNA条带 ,PCR扩增得到 5 75bp的VEGF片段 ,病毒液在 1 0 - 7稀释度时出现噬斑 ,约 5 0个 /孔。说明已成功构建了重组杆状病毒穿梭载体并重组出杆状病毒。     

研究生医学分子生物学实验教学改革的探索

针对医学研究生在分子生物学实验教学中出现的问题,根据其知识背景和研究特点,从教师素质的提高、实验教学内容的安排、教学方式的选择及考核方式的改革等几方面对研究生医学分子生物学实验教学改革进行了探讨。     

基于Markov模型的肺结节低剂量螺旋CT筛查卫生经济学评价

目的 基于Markov模型评价肺结节低剂量螺旋CT(LDCT)筛查的卫生经济学。方法 利用2021年—2023年北京市某三甲医院的肺结节LDCT筛查数据和部分国外临床研究数据,采用成本效用分析方法,通过增量成本效用比（ICUR）确定优势筛查策略;使用R语言获得转移概率参数,利用TreeAge Pro 2011软件构建Markov模型。假设以我国10万名55岁及以上人群为肺结节筛查对象,模拟其疾病发展情况,并通过敏感性分析评价该模型的稳定性。结果 成本效用分析显示,该模型经20次循环后,LDCT筛查策略的总成本为3 543 088 618元,相较于不筛查策略的总成本增加了784 130 651元,额外获得了7 996个质量调整生命年（QALY）,每获得一个QALY需多花费98 059.77元。采用WHO卫生经济学评价标准,LDCT筛查策略的ICUR大于1倍人均国内生产总值（GDP）但小于3倍人均GDP,为优势策略。敏感性分析显示,各变量在其敏感性分析范围内无论如何变化,都不会对ICUR产生较大影响,表明该模型具有较好的稳定性。结论 在55岁及以上人群中开展每年一次肺结节LDCT筛查的IC...     

成人医学分子生物学教学改革与体会

针对成人医学分子生物学教学过程中出现的问题和特点,对成人医学分子生物学的教学进行了改革和探讨,提出了适合该群体的、有针对性的几点意见和建议,以期提高成人医学分子生物学的教学质量.     

金乌骨通胶囊联合依降钙素治疗骨质疏松症的临床研究

目的探讨金乌骨通胶囊联合依降钙素注射液治疗骨质疏松症的临床疗效。方法选取2017年2月—2017年8月在肥城矿业中心医院进行治疗的骨质疏松症患者78例,随机分为对照组(39例)和治疗组(39例)。对照组患者肌肉注射依降钙素注射液,1 m L/次,1次/周;治疗组在对照组基础上口服金乌骨通胶囊,1.5 g/次,3次/d。两组患者均治疗4周。观察两组患者临床疗效,比较治疗前后两组患者VAS和ODI评分及骨代谢指标情况。结果治疗后,对照组和治疗组临床总有效率分别为82.05%、97.44%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组视觉模拟评分法(VAS)和功能障碍指数(ODI)评分均显著降低,同组比较差异具有统计学意义(P0.05);且VAS和ODI评分明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组血清硬骨素(SOST)、骨钙素(BGP)水平均升高,β胶原特殊序列(β-CTX)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)和N端骨钙素(N-MID)水平均降低,同组比较差异具有统计学意义(P0.05);且治疗组上述骨代谢指标显著优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论金乌骨通胶囊联合依降钙素注射液治疗骨质疏松症可有效改善患者临床症状和血清骨代谢指标,具有一定的临床推广应用价值。     

硒化合物对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移及粘附功能影响的研究

目的探讨甲基硒酸(Me Se A)、硒代蛋氨酸(Se Met)和甲基硒代半胱氨酸(Me Se Cys)对宫颈癌He La细胞的增殖、迁移及粘附功能的影响。方法体外培养He La细胞,3μmol/L的Me Se A、Se Met和Me Se Cys处理He La细胞12~72 h,分别采用MTT法、划痕实验和体外基质粘附实验检测He La细胞的增殖、迁移及粘附功能。结果与对照细胞相比,Me Se A处理组He La细胞的增殖速度明显降低(P<0.01)。Me Se A处理组He La细胞在4 h和8 h的迁移抑制率分别为34%(P<0.05)和26%(P<0.05);Se Met处理组He La细胞在4 h和8 h的迁移抑制率分别为18%和13%;Me Se Cys处理组He La细胞在4 h和8 h的迁移抑制率分别为28%(P<0.05)和5%。Me Se A、Se Met和Me Se Cys对He La细胞粘附功能的抑制率分别为36%(P<0.01)、25%和49%(P<0.01)。结论 Me Se A可以更好地抑制He La细胞的增殖和迁移,而Me Se Cys对He La细胞的粘附功能的抑制作用更强。