基于多重PCR技术检测蜡样芽胞杆菌3种毒素基因方法的建立及评价

目的 基于多重PCR技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM 3种毒素基因的方法,并评价其效能。 方法 煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM特异性毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物,优化反应体系。建立三重PCR检测体系,并检测其特异性、灵敏度和稳定性。 结果 煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,浓度为227 mg·L^－1,纯度为1.50~1.60。采用多重PCR体系同时检测蜡样芽胞杆菌3种毒素致病基因,于退火温度56 ℃时,蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499的扩增片段为499 bp,基因引物cytK191的扩增片段为191 bp,基因引物entFM363的扩增片段为363 bp。PCR体系扩增蜡样芽胞杆菌3种毒素基因后条带清晰明亮,且无非特异性条带,与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌均无扩增,表明蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499、cytK191和entFM363特异性强;3种引物在同一反应体系中互不干扰。灵敏度检测,多重PCR体系最低检测限可同时达到10^－1 mg·L^－1;稳定性检测,多重PCR体系自制备起每6个月检测稳定性一致。 结论 建立的多重PCR检测体系对于蜡样芽胞杆菌nhe499、cytK191和entFM363 3种毒素基因灵敏度高、特异性强,检测结果准确稳定,检测体系具有良好稳定性,适用于快速检出蜡样芽胞杆菌的3种不同致病毒素基因。     

核酸试纸条快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因方法的建立

目的 基于核酸试纸条技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因的方法。 方法 煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物并通过克隆转化鉴定PCR产物,建立并组装核酸试纸条,评价核酸试纸条的特异性、灵敏度和稳定性。 结果 蜡样芽胞杆菌DNA浓度为300 mg?L^－1,纯度约为1.60。PCR产物阳性条带经切胶回收、克隆转化和测序比对,与GenBank数据库中已登记的entFM相似性为100%。在pH值7.0条件下,每100 μL 胶体金溶液加入3.3 μg链霉亲和素浓度标记,质控线浓度为1.8 g?L^－1,检测线浓度为1 g?L^－1时,硝酸纤维素膜上质控线与检测线均可与PCR产物反应出现清晰的红色条带。按照最适条件组装成核酸试纸条,PCR产物6 μL,样品展开液100 μL,检测10 min后可观察结果。核酸试纸条特异性与电泳结果一致,仅蜡样芽胞杆菌为阳性结果,与金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、大肠埃希菌和沙门氏菌皆无交叉反应,为阴性结果;灵敏度检测,核酸试纸条DNA质量浓度同时降至10^－3 mg?L^－1仍可准确检测,普通PCR电泳结果显示DNA质量浓度同时降至10^－1 mg?L^－1出现目的条带,核酸试纸条比普通PCR灵敏度提高100倍;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测稳定性一致。 结论 建立的核酸试纸条检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因灵敏度高、特异性强且具有良好稳定性,适用于快速鉴别蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因。     

高血压患者的营养问题及对策

查阅相关文献资料归纳总结高血压患者现存的营养问题，针对其营养的需求提出应对措施，使人群认识并养成良好的饮食习惯，以期达到预防和辅助治疗高血压的目的。     

乳腺癌根治术后患者功能锻炼时机的系统评价

目的评价不同功能锻炼时机对乳腺癌根治术后患者肩关节活动度、皮下积液发生率、伤口引流量和持续时间、伤口愈合情况、淋巴水肿发生情况等方面的影响。方法检索Cochrane图书馆、JBI图书馆、PubMed、CBM、万方、VIP和CNKI等资源,收集乳腺癌患者不同功能锻炼时机的随机对照试验,检索时限均为建库至2016年9月。采用RevMan 5.2软件进行统计处理。结果共纳入文献13篇。Meta分析结果显示,早期功能锻炼可以改善乳腺癌患者术后6个月内肩关节前屈活动度和术后2年肩关节外展活动度,延期锻炼影响术后1周前屈受限度[MD=17.92°,95%CI(9.85,25.38)];早期锻炼增加了术后伤口引流量,且使引流持续时间增加1d,在术后4个月能改善淋巴水肿发生率[OR=0.03,95%CI(0.00,0.57)],但对术后1个月、6~8个月和2年淋巴水肿发生率的影响差异无统计学意义。结论早期功能锻炼可以改善乳腺癌患者术后6个月内肩关节前屈活动度和术后2年肩关节外展活动度,增加了术后伤口引流量,且延长引流持续时间,临床中应该综合患者个人、治疗等多种因素合理选择功能锻炼的时机。     

重组人乳头瘤病毒11型L1蛋白在昆虫细胞sf 9中的表达条件优化研究

目的 确定利用昆虫细胞一杆状病毒表达系统表达重组人乳头瘤病毒11型L1蛋白(HPV11 L1)的最适表达条件.方法 通过间接免疫荧光法鉴定目的蛋白表达情况;用蛋白印迹法(Western blot)确定在不同感染复数(MOI)、不同表达时间条件下目的蛋白的最适表达条件.结果 当sf9细胞密度为2.0×106/ml时,以MOI值为2.0的重组杆状病毒接种,悬浮表达96 h收获为最适表达条件.结论 确定了目的蛋白的最适表达条件,为进一步大量表达及纯化提供参考.     

亚硒酸钠对胃上皮肿瘤SGC-7901细胞抑制作用的研究

应用细胞培养技术、电子显微镜技术、流式细胞仪技术及DNA末端原位标记染色法（TUNEL技术），观察亚硒酸钠溶液对胃上皮肿瘤SGC-7901细胞的抑制作用。结果随着亚硒酸钠溶液浓度增高、作用时间延长对SGC-7901细胞的抑制率升高；可见较典型的细胞凋亡形态学变化；流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体的“凋亡峰”；TUNEL染色法细胞凋亡指数为8．4％～33．4％。证明亚硒酸钠溶液能抑制SGC-7901细胞生长，诱导其凋亡；抑制作用与亚硒酸钠溶液的浓度及作用时间呈正相关。     

优质护理用于肾移植术后隔离病房护理中的临床效果

目的 :探讨优质护理用于肾移植术后隔离病房护理中的临床效果.方法 :将我院于2015年2月-2016年8月接收的肾移植手术后患者80例,随机分为2组,观察组与对照组各40例.对照组进行常规护理,观察组在对照组基础上进行优质护理,对比2组的护理效果.结果 :观察组在对护理人员的满意度、知晓医务人员及药物知识知晓、功能锻炼知晓、情绪稳定方面与对照组比,差异明显(P<0.05).结论 :优质护理用于肾移植术后隔离病房护理中的临床效果显著,不仅建立了良好的护患关系,且促进了护理专业水平的提高,值得推广.     

呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条快速检测方法的建立和评价

目的 采用聚合酶链式反应（PCR）技术和胶体金技术建立一种呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条检测方法,并对其检测效果进行评价。 方法 根据GenBank数据库选择真菌内转录间隔区（ITS）基因片段作为靶基因,应用DNAMAN软件对真菌ITS基因片段进行分析,并分别在真菌通用引物5'端用生物素（Biotin）和异硫氰酸荧光素（FITC）进行修饰标记;建立PCR体系,进行体系的最佳条件优化;确定胶体金免疫层析试纸条标记链霉亲和素的最佳标记量和质控线及检测线最佳包被物浓度,组装核酸胶体金试纸条,对试纸条的特异度、灵敏度、重复性和稳定性进行验证。 结果 水煮法提取白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌DNA,浓度为180 μg·L^－1以上,纯度为1.60~2.10;在pH 7.0条件下,每100 μL胶体金溶液中制备胶体金标记链霉亲和素最佳标记量为 3.3 μg,质控线包被Biotin化牛血清白蛋白（BSA-Biotin）浓度为2.00 g·L^－1,检测线包被抗FITC抗体浓度为1.00 g·L^－1。核酸试纸条的特异度与电泳结果一致,仅白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌出现阳性结果,与金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和大肠埃希菌等常见呼吸道感染细菌无交叉反应。灵敏度检测,白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌的DNA浓度分别为10^－4、10^－2和10^－3 mg·L^－1时核酸试纸条仍可准确检出,而普通PCR电泳结果显示白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌最低检测浓度分别为0.01、1.00和0.10 mg·L^－1;重复性检测,在不同实验室不同操作人员对核酸试纸条进行验证,结果一致,重复性良好;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测,结果符合预期,稳定性良好。 结论 本研究建立的呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条可以检测白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌等真菌,特异度和灵敏度均较高,操作简便且快速。     

社区居民关节炎自我健康管理干预效果研究

[目的]评价关节炎自我管理教育干预实施后一个月的效果。[方法]按照自身前后对照试验设计,采用非参数检验,比较在干预前及干预1个月后患者在关节炎认知、自我管理行为、健康状况等方面的变化。[结果]干预后关节炎健康状况(疼痛、疲劳、健康担忧、精力、社会活动/角色受限)、关节炎认知、自我管理行为(认知性症状管理、与医生交流、运动行为)明显好于干预前,差别有统计学意义。[结论]关节炎自我管理教育干预实施后可改善关节炎患者的关节炎认知、自我管理行为及部分健康状况。     

含编码人乳头瘤病毒18型L1蛋白基因的杆状病毒扩增及相应蛋白表达的条件优化

目的 确定以昆虫细胞sf9扩增含编码人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18型L1蛋白(HPV18 L1)基因的杆状病毒以及相应蛋白表达的最佳条件.方法 以对数生长期的sf9细胞在不同感染复数(MOI)和不同时间条件下扩增病毒,以蚀斑试验检测病毒滴度,选择获得最高滴度病毒的最佳条件;再以sf9细胞在不同细胞密度、不同MOI值和不同时间条件下表达相应蛋白,以蛋白印迹法鉴定并比较不同条件下的蛋白表达量,选择获得最大量目的 蛋白的最佳条件.结果 对数生长期的sf9细胞在MOI值为0.50、扩增时问为48 h时,所扩增的病毒滴度最高,可达3×108 pfu/ml;在细胞密度为3×106/ml、MOI值为2.0、表达时间为72 h时,所表达的蛋白量最大,约5 mg/L.结论 确定了含编码HPV18 L1基因的杆状病毒扩增及相应蛋白表达的最佳条件.