地黄中松果菊苷对皮质酮诱导PC-12细胞凋亡的抑制作用及机制研究北大核心CSCD

目的观察松果菊苷对于皮质酮诱导的PC-12细胞损伤的保护作用及机制。方法将PC-12细胞分为6组:正常组,模型组(皮质酮500μmol·L^(-1)),阳性对照组(氟西汀0.3μmol·L^(-1))和低、中、高3个剂量实验组(松果菊苷:5,10,20μmol·L^(-1))。24 h后,用噻唑蓝法检测细胞存活率,用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位水平,用蛋白质印迹法检测细胞内胱天蛋白酶3(Caspase-3)、剪切的胱天蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和B细胞淋巴瘤-2蛋白相关X蛋白(Bax)的蛋白表达水平。结果正常组、模型组、阳性对照组和低、中、高3个剂量实验组的细胞存活率分别为(100.0±3.1)%,(88.7±1.9)%,(94.3±3.4)%,(101.3±3.1)%,(102.1±1.9)%和(104.3±1.6)%。选择松果菊苷中剂量进行后续实验研究。正常组、模型组、阳性对照组和中剂量实验组的凋亡水平分别为(10.7±0.9)%,(25.5±1.3)%,(17.7±1.7)%和(19.7±0.8)%;这4组的JC-1单体比例分别为(18.7±0.6)%,(52.1±1.4)%,(25.6±0.9)%和(22.6±1.0)%;这4组的Cleaved caspase 3/Caspase 3比值分别为1.01±0.17,1.98±0.29,1.43±0.29和1.34±0.12;这4组的Bax/Bcl-2比值分别为1.23±0.21,3.01±0.81,1.64±0.39和0.91±0.29。上述指标:模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);阳性对照组和中剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论松果菊苷可能是通过抑制线粒体凋亡信号通路降低凋亡水平来改善皮质酮诱导的PC-12细胞损伤。松果菊苷可能是地黄发挥抗抑郁作用的物质基础之一。     

怀菊花提取物对皮质酮诱导的抑郁模型的保护作用及机制研究

目的 通过皮质酮诱导的小鼠抑郁症模型和肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12细胞损伤模型,研究怀菊花提取物的抗抑郁作用。方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、氟西汀（5 mg/kg）组和怀菊花提取物低、中、高剂量（1.67、3.33、6.67 g/kg）组,模型组和各给药组连续21 d sc皮质酮（20 mg/kg）,造模同时ig相应药物,给药结束后进行糖水偏好实验、悬尾实验和旷场实验;采用ELISA法检测小鼠血清中皮质酮及神经递质水平;采用Western blotting检测海马组织中环磷腺苷效应元件结合蛋白（cyclic adenosine monophosphate-response element binding protein,CREB）通路关键蛋白表达。皮质酮诱导PC-12细胞建立细胞损伤模型,采用流式细胞术检测怀菊花提取物对细胞凋亡及活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平的影响;采用In-Cell Western法检测凋亡相关蛋白及CREB通路关键蛋白表达。结果 怀菊花提取物能够显著改善小鼠的糖水偏好率（P＜0.05、0.01）,增加小鼠的站立次数（P＜0.05、0.01）,减少小鼠悬尾实验的不动时间（P＜0.01）,显著降低血清中皮质酮水平（P＜0.01）,升高血清中5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）、去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）、多巴胺（dopamine,DA）、乙酰胆碱（acetylcholine,Ach）水平（P＜0.05、0.01）,上调海马组织中CREB、磷酸化CREB（phosphorylated CREB,p-CREB）、环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）蛋白表达水平（P＜0.05、0.01）。怀菊花提取物显著抑制皮质酮诱导的PC-12细胞凋亡率及细胞内ROS水平（P＜0.01）,抑制凋亡相关蛋白表达（P＜0.01）,上调CREB通路关键蛋白表达（P＜0.01）。结论 怀菊花提取物可能通过调节CREB通路、抑制神经细胞凋亡,从而改善抑郁。     

地黄苷D对皮质酮诱导的PC-12细胞损伤的保护作用及机制研究

目的 研究从地黄Rehmannia glutinosa中分离得到的地黄苷D对皮质酮诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC-12细胞）的保护作用及机制。方法 以500μmol/L皮质酮处理PC-12细胞24 h建立损伤模型，同时给予氟西汀和地黄苷D进行干预，采用MTT法检测细胞存活率；采用流式细胞术检测细胞凋亡、活性氧（reactive oxygen species,ROS）以及线粒体膜电位水平；采用In-Cell Western法检测细胞内凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)、剪切型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达；采用高内涵细胞成像系统检测细胞内脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）蛋白表达。结果 地黄苷D明显提高皮质酮诱导的PC-12细胞存活率（P<0.05、0.01...     

桃叶珊瑚苷对谷氨酸诱导的兴奋性神经毒性的抑制作用研究

目的：研究桃叶珊瑚苷对谷氨酸诱导的兴奋性神经毒性的抑制作用。方法 采用20 mmol·L–1谷氨酸诱导PC-12细胞损伤建立神经毒性模型，加入1，5，10，20，40 μmol·L–1的桃叶珊瑚苷处理24 h后，通过MTT法检测细胞活力，用流式细胞术检测细胞内Ca2+和活性氧(reactive oxygen species，ROS)水平，采用In Cell Western检测谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor，NMDA)亚基NMDAR1的水平，采用Elisa试剂盒检测细胞上清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)水平。结果 20 mmol·L–1谷氨酸作用24 h可使体外培养的PC-12细胞活力明显下降(P<0.01)，细胞内Ca2+，NMDAR1蛋白水平和氧化应激水平明显增加(P<0.01)。10 μmol·L–1的桃叶珊瑚苷可以明显提高谷氨酸诱导后PC-12细胞的细胞活力(P<0.01)，降低细胞内Ca2+、NMDAR1蛋白水平和ROS水平(P<0.01)，改善细胞内SOD、LDH、MDA水平(P<0.01)。结论 桃叶珊瑚苷可能通过抑制NMDAR1的表达，从而降低细胞内Ca2+的堆积，并抑制氧化应激水平来改善谷氨酸诱导的PC-12细胞损伤，抑制谷氨酸诱导的兴奋性神经毒性。     

桃叶珊瑚苷通过调节小胶质细胞M1/M2极化抑制神经炎症

目的:探究桃叶珊瑚苷(aucubin)对脂多糖(LPS)诱导建立的体外神经炎症模型的影响。方法:用LPS诱导N9细胞激活建立体外神经炎症模型，加入桃叶珊瑚苷处理细胞24 h,对细胞上清一氧化氮(NO)含量和细胞活力进行检测，显微镜拍摄细胞形态，免疫荧光法检测小胶质细胞特异标志物Iba-1水平，Flowsight检测CD11b水平和CD86/CD206比值，并用试剂盒检测IL-4,IL-10,TGF-β,IL-1β,IL-6,TNF-α水平。结果:与模型对照组比较，桃叶珊瑚苷组可有效改善细胞形态，降低细胞上清NO含量，降低细胞标志物CD11b水平和CD86/CD206比值，并调节炎症因子的释放。结论:桃叶珊瑚苷可能是通过调控炎症因子的释放，促进小胶质细胞由M1型向M2型转化，从而抑制N9小胶质细胞的激活，最终抑制LPS诱导的神经炎症。