选择性剪接变异体的RT-PCR检测及结果分析

目的 利用RT-PCR方法检测并分析mRNA选择性剪接变异体.方法 针对糖原合成酶激酶(GSK)3β和B细胞转位基因( BTG)3基因变异体差别设计引物,利用RT-PCR扩增后进行电泳和克隆DNA测序.结果 GSK3β和BTG3的RT-PCR产物电泳均出现3条带,经过电泳和克隆DNA测序发现GSK-3β中上面2条带为同一产物.对BTG3上(位于319 bp)、下(位于70 bp)2条带进一步PCR扩增后测序,结果发现3个条带均为同一产物.结论 RT-PCR法检测选择性剪接产物操作方便,对Western蛋白印迹结果评价具有指导意义,但是产生的非特异条带可能是由于某种特殊原因造成,如选择性剪接部位的特异核酸序列,需DNA测序做进一步确定.     

胃癌组织及细胞株细胞骨架蛋白Fascin-1表达临床意义分析

目的：分析胃癌组织及细胞株中Fascin-1蛋白表达的临床病理及预后意义。方法：从日本理化研究所获得胃癌细胞株MKN28、AGS、MKN45和KATO—Ⅲ。收集日本富山大学医学部1993—02—01～2006—10—01胃癌组织455例。利用实时PCR、蛋白质印迹法杂交或免疫组化检测胃癌细胞株（MKN28、AGS、MKN45和KATO-Ⅲ）和胃癌组织中Fascin-1mRNA和蛋白的表达,分析胃癌组织中Fascin-1蛋白表达与临床病理特征和预后的关系。结果：Fascin-1蛋白主要定位在胃癌细胞株的细胞质中,在MKN28和MKN45细胞株中呈强表达,在ACTS和KATO-Ⅲ细胞中弱表达。胃癌组织中Fascin-1mR—NA表达水平显著高于癌旁正常黏膜组织,t=5．267,P〈0．001;Fascin-1蛋白表达与胃癌肿块大小（rs=0．116,P〈0．001）、侵袭深度（n=0．177,P〈0．001）、淋巴管侵袭（rs=0．190,P=0．005）、静脉侵袭（^=0．131,P=0．003）、淋巴结转移（rs=0．141,P=0．013）和TNM分期（rs=0．174,P〈0．001）呈正相关。Cox风险比率回归模型显示,年龄（P〈0．001）、侵袭深度（P〈0．001）、淋巴管侵袭（P〈0．001）、淋巴结转移（P〈0．001）、TNM分期（P〈0．001）和Lauren分型（P=0．003）为独立的预后因素。结论：Fascin-1蛋白表达在胃癌细胞株的侵袭转移过程中发挥重要作用,Fascin-1蛋白表达上调参与胃癌发生和演进过程,可以作为胃癌恶性程度和预后判断的有效分子标志。