弓形虫虎源分离株ROPIO基因的克隆、序列分析及其表达研究

采用RT-PCR技术从弓形虫虎源分离株中扩增出ROP10基因，将其克隆入pMD18．T载体中进行测序和生物信息学分析，并将目的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中进行诱导表达。该基因全长1761bp，编码586个氨基酸，其中前28个氨基酸残基构成信号肽序列。与GenBank中报道的RH株相比，16个核苷酸存在变异，导致7个氨基酸发生改变，但两者N-联糖基化位点的数量和位置没有差异，两虫株核苷酸和推导氨基酸序列的同源性分别为99．2％和98．8％。转化重组质粒pETROP10的大肠杆菌B121（DE，）在IPTG的诱导下，可表达出分子量为67．6kDa的重组蛋白，表达量占菌体蛋白的13．8％。     

新型冠状病毒RBD区重组流感病毒的拯救及初步鉴定北大核心CSCD

目的利用流感反向遗传技术,以B型流感病毒B/Yamagata/16/88株作为骨架,表达新型冠状病毒(SARSCoV-2)S蛋白的受体结合域(RBD),构建以B型流感病毒为载体的新型冠状病毒疫苗候选株。方法基因合成新冠病毒参考株S蛋白上的RBD基因片段(318-541aa),对B型流感病毒B/Yamagata/16/88/的NS1片段进行设计改造并插入RBD序列,构建重组质粒NS110-RBD。将NS110-RBD与其余7个骨架株重组质粒共转染293T细胞和MDCK细胞,拯救表达新型冠状病毒RBD区重组流感病毒,对拯救出的毒株进行形态学、分子生物学鉴定及病毒滴度和Western blot检测。结果成功拯救出重组流感病毒株并命名为rIBV-NS110-RBD。PCR鉴定RBD目的基因大小正确,测序表明拯救病毒株的序列正确,在透射电镜下观察到拯救病毒株的病毒粒子具有流感病毒粒子的典型特征。经测定,拯救株rIBV-NS110-RBD在MDCK细胞上的病毒滴度为10^(5.5) TCID_(50)/ml,在鸡胚上的病毒滴度为10^(6.5) EID_(50)/ml,血凝效价最高达2_(5);Western Blot检测到RBD的表达,其分子质量为35ku。结论成功拯救出高表达新型冠状病毒RBD蛋白的高血凝效价的重组流感病毒株,该病毒具有流感病毒粒子的典型特征,为以B型流感病毒为载体作为新型冠状病毒疫苗的研发提供了新思路。     

老年甲状腺功能减退误诊为肝硬化1例

1病例资料 患者，男，90岁，病案号24993。因纳差、双下肢水肿半年，加重伴气短，腹胀1周于2001年12月21日入院。既往有慢性支气管炎、多囊肾、慢性肝炎病史。平素少量饮酒。查体：T36．5℃，P80次／min，BP130／70mmHg。皮肤、巩膜无黄染。双下肢皮肤可见针尖大小的出血点散在。双手可见肝掌。甲状腺不月肿大无结节。左下肺呼吸音减弱，可闻及少量小水泡音。心尖搏动位于第5肋间左锁骨中线外1cm，心音减弱，心率80次／min，律齐，各瓣膜听诊区未闻及病理性杂音。腹部饱满，腹围96cm，无腹壁静脉曲张。可叩出移动性浊音。双下肢轻度凹陷性水肿。     

课程思政在循环生理课堂中的挖掘和应用

如何在医学专业课上立德树人于无形,在课程中设计“课程思政”内容为医学专业课教学打开了一扇光明之门,不仅可以活跃课堂,增加师生互动,加深学员对专业知识的理解,而且还可以培养学员医学人文精神、高尚的医德医风和军事素养,牢固树立正确的世界观、人生观和价值观。本文就“课程思政”在《大学生理学》循环生理教学中的挖掘和应用进行探讨。     

青岛市市南区小学教师对学龄儿童外伤全脱出牙应急处理的认知水平调查

目的了解青岛市市南区小学教师对学龄儿童外伤全脱出牙应急处理的认知水平现状。 方法2019年3—4月,利用青岛市第一次口腔流行病学调查的机会,采用分层随机抽样的方法,抽取青岛市市南区12所小学597名小学教师,对其进行问卷调查,应用卡方检验对结果进行统计分析。 结果本调查共回收有效问卷540份,85.9%教师为女性,15.2%的教师接受过牙外伤相关教育,89.6%的教师没有见过外伤全脱出牙。15.2%的教师知道全脱出牙齿的正确紧急处理方式;对全脱出牙采用良好保存介质的教师,58.7%选择0.9%氯化钠溶液,8.3%选择牛奶,6.3%选择含在孩子口中;关于全脱出牙的就诊时间,认为应该即刻就诊的教师人数比例为56.5%。86.9%的教师问卷得分低于4。不同教龄教师间问卷得分差异有统计学意义（χ² = 9.445,P = 0.002）,是否接受过牙外伤教育的教师间问卷得分差异也有统计学意义（χ² = 13.148,P<0.001）。 结论青岛市市南区小学教师对学龄儿童外伤全脱出牙应急处理认知水平不高,应加强小学教师牙外伤知识的宣教。     

思维导图辅助PBL教学法在《心衰进行曲》授课中的应用

目的 探讨思维导图在本科生《器官系统基础》PBL教学中的应用效果。 方法 临床五年制同一轨道的4个PBL班次,人数分别为30人,随机分为试验组和对照组。试验组以思维导图为基础,指导学生进行PBL教学,对照组为常规PBL教学。同时对4个班次的学生进行问卷调查,并对期末《器官系统基础—病理生理学》考试成绩进行评价。 结果 试验组学生的学习兴趣、小组之间的互评、综合运用知识解决问题的能力、文献检索能力、团队协作能力以及期末的考试成绩等显著优于对照组。 结论 应用思维导图在《器官系统基础》PBL学习中能够帮助学生增强对知识的把握,进一步对整体理论课的学习也有促进作用。     

狂犬病病毒弱毒疫苗株反向遗传操作系统的建立

目的构建狂犬病病毒弱毒疫苗株SRV9全长cDNA感染性克隆,并建立其反向遗传操作系统。方法通过DNAStar对狂犬病病毒SRV9株全长基因组序列进行分析,利用单一的酶切位点,将SRV9全长cDNA分为4段,根据每段重叠区域的酶切位点拼接全长,分别连入pCI和pCDNA3.1(+)载体,并通过PCR方法分别在全长序列的3′端和5′端引入核酶HamRZ和HdvRZ序列,构建全长真核表达质粒pCI-SRV9和pD-SRV9。同时构建能表达狂犬病病毒核蛋白(N)、磷蛋白(P)、糖蛋白(G)和聚合酶蛋白(L)的4个辅助质粒。分别将pCI-SRV9或pD-SRV9与辅助质粒通过脂质体共转染BSR细胞,拯救重组病毒。结果两种质粒表达系统均可拯救到有感染活性的病毒粒子,但pD-SRV9表达质粒的拯救效率(8/8)较pCI-SRV9表达质粒拯救效率3/30高;重组病毒与母本野生病毒的体外生长动力学曲线相一致,相同培养时间的病毒滴度差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了狂犬病病毒弱毒疫苗株的反向遗传操作系统,为进一步研究狂犬病病毒致病机理、筛选新型狂犬病疫苗或开发基于狂犬病病毒载体的其他疾病疫苗奠定了基础。     

SARS-CoV-2细菌样颗粒对小鼠的免疫原性及攻毒保护效果评价

目的 本研究以C57BL/6N小鼠为模型,评价SARS-CoV-2细菌样颗粒(Bacterium-Like Particles, BLPs)的免疫原性和攻毒保护效果,为新型冠状病毒感染(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)疫苗研发提供新思路。方法 使用SARS-CoV-2细菌样颗粒Trim-RBD-GEM分别在第0、21 d滴鼻免疫C57BL/6N小鼠,在第7、14、21、28、35 d采小鼠血,分离血清,采用ELISA检测特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体水平。在免疫后第35 d使用50 LD₅₀的C57MA14毒株对C57BL/6N小鼠进行攻毒,记录攻毒后14 d内小鼠体重变化及存活情况;在攻毒后第3 d取小鼠的鼻甲骨和肺脏组织,测定鼻甲骨和肺脏组织中的病毒滴度和病毒载量。另取肺脏组织,使用4%多聚甲醛固定后制作病理切片并染色,观察肺脏组织病理变化,免疫组化法检测病毒蛋白的表达。结果 Trim-RBD-GEM滴鼻免疫小鼠后诱导产生特异性抗体,IgG、IgG1和IgG2a抗体水平均显著升高。从攻毒后第1 d开始Trim-RB...     

车前子多糖对大鼠肝线粒体自由基防御功能的影响

目的探讨车前子多糖(PSP)对大鼠肝线粒体自由基防御功能的影响。方法差速离心法提取雄性SD大鼠肝线粒体,采用硫酸亚铁-维生素C(Fe2+-Vit C)激发剂,建立大鼠肝线粒体脂质过氧化(LPO)模型,比色法测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和抗氧化物酶(T-AOC)活性,观察PSP对各生化指标的影响。结果 PSP浓度在25、50和100 mg/L范围时,MDA含量分别为3.94±0.15,3.65±0.18和2.88±0.20,均显著低于模型组6.47±0.48(P<0.01),表明PSP对肝线粒体脂质过氧化有抑制作用,而对抗氧化物酶类活性均有激活作用,与模型组比较,均明显升高(P<0.01)。结论 PSP对大鼠肝线粒体自由基的防御功能可产生一定的影响,对治未病起到一定的防治作用。