Delayed neutrophil apoptosis in chronic periodontitis patients

BACKGROUND, AIMS: Neutrophil cells constitute the first defense barrier against the oral bacterial challenge in the periodontium. Reduction of neutrophils could impair this response against periopathogenic bacteria such as Porphyromonas gingivalis. Our previous work implicates the apoptosis of neutrophils in the pathogenesis of periodontitis. We now demonstrate that granulocyte monocyte-colony stimulating factor (GM-CSF) present in the gingival crevicular fluid (GCF) and secreted during the immune response reduces the apoptosis of neutrophils. METHOD: In this study, the presence of GM-CSF and tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) in GCF was determined in samples obtained from adult patients with periodontitis and from control subjects with clinically healthy gingiva. GCF was collected for 30 s using Periopaper(R) strips, and cytokines were quantified by ELISA. We used ex vivo culture of gingival tissue biopsies for 2 and 4 days in the presence of GM-CSF. Apoptosis was determined using the terminal TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) technique, and expression of Bax by immunohistochemistry. RESULTS: The presence of GM-CSF and TNF-alpha was detected in the majority of sites from periodontal patients (83.3% and 63.3%, respectively), presenting a total amount of 27.65 and 42.38 pg, respectively. GM-CSF reduces the neutrophil apoptosis determined by double staining with TUNEL and myeloperoxidase and by a reduction of Bax expression. CONCLUSIONS: These findings suggest a novel mechanism by which neutrophils specifically accumulate in adult patients with periodontitis.     

口腔白斑、扁平苔藓细胞凋亡相关蛋白Bax表达的研究

目的 :探讨口腔白斑、扁平苔藓的癌变机理及发病机制。方法 :采用免疫组化法检测 10例正常口腔黏膜上皮 ,18例扁平苔藓 ,2 3例白斑 ,2 2例口腔鳞癌上皮组织中凋亡相关蛋白Bax的表达水平。结果 :白斑中上皮单纯增生、轻度、中度不典型增生和低分化鳞癌及糜烂型扁平苔藓的Bax蛋白显过度表达 ,与正常口腔黏膜上皮相比有显著性差异。结论 :Bax参与了口腔白斑癌变的早期过程 ,Bax的表达水平可作为临床监测白斑癌变倾向的参考指标。扁平苔藓的发病机制可能与细胞免疫亢进刺激Bax过度表达诱导角朊细胞凋亡有关 ,扁平苔藓的癌变机理有待进一步研究     

bcl-2和bax在成釉细胞瘤中的表达

目的:通过检测凋亡相关基因bcl-2和bax在成釉细胞瘤(am elob lastom a,AB)中的表达,探讨AB发生发展中细胞凋亡的作用及其与AB临床生物学行为的关系。方法:采取免疫组化法对75例AB(原发31例,复发37例,恶变组7例)进行BCL-2和BAX蛋白检测,正常口腔黏膜(norm al oralmucosa,NOM)和牙源性角化囊肿(odontogen ic keratocyst,OKC)做对照。同时采用原位杂交法检测了20例AB、12例OKC中的bcl-2和baxmRNA表达。结果:BCL-2蛋白阳性表达率在AB中为88.0%(66/75),OKC中为74.3%(26/35),NOM中为44.4%(4/9)(P<0.001),主要在AB外周层细胞和少数星网状层细胞中表达。BAX蛋白阳性率AB为74.7%(56/75),OKC为65.7%(23/35),NOM为77.8%(7/9)(P<0.001),BAX在AB的外周层和星网状层细胞都有强度相似的表达。伴随着AB的复发恶变BCL-2蛋白表达增强,而BAX蛋白表达则不同:复发组阳性率较原发组高,但恶变组低。BCL-2与BAX蛋白表达呈中度负相关(rκ=-0.331,P<0.001)。结论:AB中凋亡抑制蛋白表达多于凋亡促进蛋白表达,凋亡抑制在AB的发生、发展中起着重要作用。bcl-2和bax在不同组织及良、恶性AB中的表达方式及强度有差异。     

maspin和bax联合检测对乳腺癌复发的研究

目的：研究乳腺癌组织中mas pin和bax的表达,探讨二者预测乳腺癌复发的价值。方法：采用SP免疫组织化学方法检测30例复发乳腺癌、24例无复发乳腺癌及14例乳腺纤维腺瘤组织中maspin和bax的表达情况。结果：复发乳腺癌（23.3%,20.0%）和无复发乳腺癌组织（54.2%,45.8%）maspin、bax阳性表达率均较乳腺纤维腺瘤组织（85.7%,78.6%）低（P均〈0.05）,复发乳腺癌maspin和bax阳性表达明显低于无复发乳腺癌（P〈0.01）。复发乳腺癌组织maspin表达与组织学分级呈负相关（r=-0.481,P〈0.05）,与激素受体呈正相关（r=0.497,P〈0.05）;bax表达与组织学分级呈负相关（r=-0.522,P〈0.05）;maspin表达与bax表达呈正相关﹙r=0.454,P〈0.05﹚。结论：maspin、bax的异常表达可能在乳腺癌的发生、发展过程中起重要作用,联合检测能更好地判断乳腺癌的复发。     

羊栖菜多糖对高脂培养的胰岛β细胞凋亡的影响

目的：研究羊栖菜多糖（ Sargassum fusiforme polysaccharide ,SFPS）对在高脂培养的胰岛β细胞凋亡的影响及其分子机制。方法采用MTT法检测SFPS对胰岛β细胞增殖的影响,Hoechst 33258检测胰岛β细胞凋亡情况,反转录RCR法检测bax、caspase－3基因表达量的变化。结果与模型组比较,5％SFPS组和10％SFPS组胰岛βTc3细胞的生长抑制明显减轻（ P ＜0.01）,胰岛βTc3细胞的凋亡率明显降低（ P ＜0.01）,bax和caspase－3基因表达亦降低（ P ＜0.01）。结论 SFPS能抑制高脂诱导的胰岛β细胞凋亡,其机制可能与调控bax和caspase－3基因表达有关。     

脑心通胶囊对苯巴比妥成瘾大鼠脑细胞损伤的保护作用

目的 探讨脑心通胶囊对苯巴比妥成瘾大鼠的脑细胞损伤的保护作用并初步探讨其机制.方法 用递增剂量的苯巴比妥诱导建立成瘾大鼠模型,并用脑心通胶囊进行干预,通过戒断症状评分、脑切片HE染色和免疫组化染色的方法探讨脑心通胶囊对苯巴比妥成瘾大鼠脑细胞损伤的保护作用及机制.结果 苯巴比妥成瘾大鼠戒断症状评分较高,脑细胞受损伤而形态改变,脑额叶凋亡细胞数增多;用脑心通胶囊干预可以降低大鼠戒断症状评分,保护脑细胞形态完整,减少脑细胞凋亡,且脑心通胶囊对凋亡相关因子Bcl-2和Bax表达调控呈现浓度相关性.结论 脑心通胶囊可以一定程度减轻苯巴比妥成瘾的戒断症状,保护脑细胞,其机制可能与凋亡调控因子Bcl-2和Bax有关.     

心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及Bax蛋白表达的探讨

为了探讨心肌细胞凋亡在心力衰竭中的地位和作用,用结扎冠状动脉方法建立大鼠心力衰竭模型.采用末端脱氧核糖酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色法对心肌组织进行原位细胞凋亡检测,发现心衰组心肌细胞核有黄褐颗粒状改变.用SP免疫组化染色,心衰组Bax蛋白在膜及胞浆有阳性表达;而血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)治疗组,心肌凋亡细胞数和Bax蛋白表达明显减少,表明心肌细胞凋亡是心力衰竭发生原因之一,在心衰的发生中起着一定的作用,而ACEI能减轻凋亡的发生.     

利用 RNAi阻抑 hTERT 和Bi-1双基因表达的RNAi作用效果的研究

目的：利用LipofectamineTM2000将针对靶向人类端粒酶末端逆转录酶（hTERT）和Bax inhibitor‐1（Bi‐1）基因设计并构建的质粒载体转染至CNE‐2Z鼻咽癌细胞内,诱导序列特异性的基因沉默,研究其产生的shRNA阻抑hTERT 和Bi‐1基因表达的效果。方法收集CNE‐2Z细胞,设未处理组、pEGFP‐N1组、pEGFP‐N1／Lip组,采用流式细胞术检测Lip对CNE‐2Z细胞的转染能力,RT‐PCR和Western blot法分析表达shRNA重组质粒载体对hTERT和Bi‐1基因mRNA表达的抑制效应。结果转染CNE‐2Z细胞的质粒和Lip最佳组合：质粒为2．5μg ,Lip为6．25μL。结论成功构建的针对人hTERT和Bi‐1基因的shRNA真核表达质粒能特异、有效地阻抑hTERT和Bi‐1基因的表达。