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1.
目的 利用腺相关病毒(AAV)转导和CRISPR技术建立肝脏相关疾病小鼠模型.方法 AAV-绿色荧光蛋白(GFP)表达系统(AAV-GFP)和CRISPR靶向基因敲除质粒系统(px330-sgGFP-Cas9),三组FVB/NJ小鼠采用尾静脉高压水动力注射技术分别注射生理盐水(对照组)、AAV-GFP(AAV-GFP组)、AAV-GFP+px330-sgGFP-Cas9(sgGFP组),采用小动物活体成像仪检测小鼠肝脏GFP表达情况.结果 生理盐水对照组小鼠肝脏不表达GFP;AAV-GFP组小鼠肝脏72 h后开始表达GFP,2周后GFP表达稳定;sgGFP组在第9、12天均表达GFP蛋白,但2周后GFP蛋白明显减弱.结论 本研究所构建的AAV-GFP表达系统能够在小鼠肝脏中稳定表达GFP.所构建的CRISPR质粒系统可以特异性敲除小鼠肝脏所携带的目的基因,建立合适的肝脏疾病研究模型.  相似文献
2.
艾滋病是目前影响人类健康的严重传染病之一,由于HIV-1具有强大的免疫逃逸能力给临床治疗带来极大的困难.研究者们试图通过不同的治疗方案来控制HIV-1的复制,除了药物治疗外,近年来抗体治疗和生物工程技术治疗等进展迅速.此文对国内外艾滋病治疗方式的最新研究作一阐述.  相似文献
3.
目前抗病毒治疗主要靶向产毒阶段的病毒蛋白酶系统,而对于具有潜伏感染特征的病毒无效,因此能够靶向病毒基因组的抗病毒药物将是未来对抗病毒潜伏感染的研究策略.CRISPR/Cas9作为一种近年快速发展的基因编辑技术,在对抗病毒潜伏感染方面取得一定的成果,如HIV、人致病疱疹病毒、HBV等.此文对其应用进展进行综述,并总结了逃逸突变体的产生、脱靶效应、载体安全性等问题,以期为研制有效的抗潜伏感染病毒的治疗方法提供参考依据.  相似文献
4.
目的 分析无抗生素压力下连续传代90次的4株志贺菌耐药表型及成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白(Cas)基因变化。方法 对临床分离的4株耐药谱不同的志贺菌进行无抗生素压力连续传代90次,传代结束后用琼脂稀释法检测传代前、后志贺菌最小抑菌浓度;用PCR对CRISPR位点进行扩增并测序,CRISPR Finder和Clustal X 2.1分析CRISPR位点的变化。结果 经无抗生素压力传代90次后,4株志贺菌对某些抗生素的敏感性有不同程度的增加:mel-sf1998024/zz对氨苄西林、头孢氨苄、头孢噻肟、氯霉素的耐药性降低,mel-s2014026/sx对诺氟沙星、甲氧苄啶的耐药性降低,mel-sf2004004/sx对氨苄西林、头孢呋辛、头孢噻肟、氯霉素、甲氧苄啶的耐药性降低,mel-sf2013004/bj对氯霉素的耐药性降低;志贺菌mel-sf1998024/zz和mel-sf2013004/bj经无抗生素压力传代后,CRISPR3位点3''的重复-间隔序列丢失,其中间隔序列匹配基因的编码产物是Cas蛋白。结论 志贺菌在无抗生素压力下,可降低或丢失对某些抗生素的耐药性。部分志贺菌CRISPR3位点的结构发生了变化,CRISPR3位点与cas基因可能存在共进化。  相似文献
5.
近年来,CRISPR/Cas9基因编辑技术经过不断完善和改造,正逐步取代锌指核酸酶(ZFN)技术和转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)技术,成为具有广阔应用前景的第三代基因编辑技术。CRISPR/Cas9技术目前已广泛应用于细胞的基因编辑和基因调节、基因敲除动物模型的构建、人类疾病动物模型的治疗研究等领域。此外,已有相关实验证实该技术能够在人类胚胎中发挥基因编辑的作用,并且国内外已有2项CRISPR/Cas9临床试验正在开展,未来应用于临床靶向治疗前景广阔。现就CRISPR/Cas9系统的基本结构、作用原理及其应用的最新研究进展进行综述。  相似文献
6.
7.
Rates of colonization with livestock-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) sequence type 398 have been high for pigs and pig farmers in Canada, but prevalence rates for the general human population are unknown. In this study, 5 LA-MRSA isolates, 4 of which were obtained from skin and soft tissue infections, were identified from 3,687 tested MRSA isolates from persons in Manitoba and Saskatchewan, Canada. Further molecular characterization determined that these isolates all contained staphylococcal cassette chromosome (SCC) mecV, were negative for Panton-Valentine leukocidin, and were closely related by macrorestriction analysis with the restriction enzyme Cfr91. The complete DNA sequence of the SCCmec region from the isolate showed a novel subtype of SCCmecV harboring clustered regularly interspaced short palindromic repeats and associated genes. Although prevalence of livestock-associated MRSA seems to be low for the general population in Canada, recent emergence of infections resulting from this strain is of public health concern.  相似文献
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