萆苓祛痛方对糖尿病痛风大鼠骨骼肌组织SIRT3蛋白表达及URAT1 mRNA的影响

目的:探讨萆苓祛痛方对糖尿病痛风大鼠骨骼肌组织去乙酰化酶3(SIRT3)蛋白表达及尿酸盐转运体1(URAT1) mRNA的影响。方法:选择健康雄性大鼠40只,除正常组外,其余组予高脂饲料喂养并联合小剂量链脲佐菌素(STZ)溶液40 mg·kg-1腹腔注射1次,以血糖≥16. 7 mmol·L-1,为糖尿病模型。4 d后关节腔注射5%尿酸钠溶液1次,诱导痛风模型,模型成功后,分为萆苓祛痛方组(萆苓组,10 g·kg-1),吲哚美辛组(5 mg·kg-1),吡格列酮组(10 mg·kg-1),均连续给药21 d,正常组、模型组予等量生理盐水;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定骨骼肌组织SIRT3蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测骨骼肌组织URAT1 mRNA表达,并进行病理检查,取血测定血糖(GLU),血尿酸(UA)及C反应蛋白(CRP)含量。结果:与正常组比较,模型组GLU,UA及CRP明显升高(P 0. 01);与模型组比较,萆苓组、吡格列酮组血糖下降(P 0. 05);各药物组UA及CRP明显下降(P 0. 01)。与正常组比较,模型组骨骼肌SIRT3蛋白表达量显著降低(P 0. 01);与模型组比较,萆苓组骨骼肌SIRT3蛋白表达量显著提高(P 0. 01),与西药组比较无明显差异;条带图的结果同样显示,与正常组比较,模型组表达亮度明显减弱,药物组表达亮度明显增强;与正常组比较,模型组关节组织URAT1 mRNA相对表达量明显升高(P 0. 01);与模型组比较,各药物组URAT1 mRNA相对表达量显著下调(P 0. 01)。电泳图同样提示,正常组表达亮度减弱,模型组表达亮度显著增强,萆苓组、西药组表达亮度明显减弱。关节病理提示,与正常组比较,模型组大鼠关节病理损伤严重,可见大量炎细胞浸润及纤维增生,滑膜细胞变性、坏死。与模型组比较,萆苓祛痛方关节病变程度明显减低,见少量炎细胞浸润,滑膜上皮轻度增生。结论:具有泻浊解毒通络作用的萆苓祛痛方可显著提高糖尿病痛风大鼠骨骼肌组织SIRT3的蛋白表达量,下调URAT1 mRNA的表达量,减轻骨骼肌组织病理损伤,减低血清炎症因子CRP的含量,降低模型大鼠的血糖、血尿酸水平,有保护关节功能的作用。     

艳山姜挥发油通过调控巨噬细胞CD36和ABCA1表达抑制泡沫细胞的形成

目的:观察艳山姜挥发油对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞转化为泡沫细胞的抑制作用,并探索其机制。方法:使用佛波酯(PMA,100μg·L^-1)诱导人白血病单核细胞(THP-1)24 h后形成巨噬细胞,实验分为4组,分别为空白组(无血清RPMI 1640),模型组(80 mg·L^-1ox-LDL),艳山姜挥发油低剂量组(80 mg·L^-1ox-LDL+4μg·L^-1艳山姜挥发油),艳山姜挥发油高剂量组(80 g·L^-1ox-LDL+20μg·L^-1艳山姜挥发油)。噻唑蓝(MTT)比色法检测艳山姜挥发油对巨噬细胞的活性的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测巨噬细胞中白细胞分化抗原36(CD36)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测巨噬细胞内胆固醇酯含量,油红O染色法检测巨噬细胞中脂质小滴的含量。结果:艳山姜挥发油对巨噬细胞无毒性。与空白组比较,模型组的巨噬细胞内脂滴和胆固醇酯的含量显著增加(P<0.01),CD36蛋白表达显著上升(P<0.01),ABCA1蛋白表达无显著变化;与模型组比较,艳山姜挥发油显著抑制巨噬细胞中脂滴和胆固醇酯的含量(P<0.01),下调CD36的蛋白表达(P<0.01),上调ABCA1蛋白的表达(P<0.01),艳山姜挥发油可抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化。结论:艳山姜挥发油对ox-LDL诱导的巨噬细胞向泡沫细胞的形成具有抑制作用,该药理作用与艳山姜挥发油下调巨噬细胞CD36和上调ABCA1蛋白的表达有关。     

大量饮酒及乙醇戒断后对大鼠脑内维生素C 水平的影响

目的 研究大量饮酒4 d及乙醇戒断后大鼠脑脊液中及各重要脑区内维生素C（VC）水平 及钠依赖性VC 转运体2（SVCT2）蛋白水平的变化。方法 30 只健康Wistar 大鼠随机分为5 组，对照组 （A 组）、大量饮酒4 d（B 组）、大量饮酒4 d 后戒断1 d（C 组）、大量饮酒4 d 后戒断2 d（D组）、大量饮酒 4 d后戒断7 d（E组），每组6只。B、C、D、E组大鼠大量灌胃给予乙醇4 d，乙醇浓度为25% W/V，每8小时 灌胃1次，连续4 d；A组给予等体积蒸馏水。采用Y迷宫实验评价大鼠的空间工作记忆能力；以高效液相- 电化学法（HPLC-ECD）检测大鼠脑脊液及前额叶皮质、顶叶皮质、颞叶皮质、海马脑区内细胞内VC 含量， 免疫印迹法检测大鼠各脑区内SVCT2蛋白水平的变化。结果 （1）Y迷宫实验： C、D组大鼠自发交替反应 率分别为（24.64±15.11）% 和（41.48±13.01）%，均显著低于A 组［（75.47±8.61）%］； E 组大鼠的自发交替 反应率恢复接近正常［（61.64±11.51）%］，与A 组差异无统计学意义（P＞ 0.05）。（2）脑脊液内VC 含量：B 组大鼠脑脊液内VC 含量为（204.54±25.51）μmol/L，显著高于A 组［（145.57±18.98）μmol/L］， 而C、D 组 大鼠脑脊液内VC 水平［分别为（90.24±15.45）、（86.93±14.53）μmol/L］明显低于A、B 组，差异均有统计 学意义（均P＜ 0.001）；E 组大鼠脑脊液中VC 含量［（135.80±17.16） μmol/L］与A 组间差异无统计学意义 （P＞ 0.05）。（3）各脑区内VC 水平：B 组前额叶皮质、顶叶皮质、海马脑区脑组织匀浆（细胞内）VC 水 平变化趋势相同［分别为（1.18±0.13）、（1.14±0.12）、（1.20±0.20）μmol/g］，均显著低于A 组［分别为 （1.64±0.11）、（1.62±0.13）、（2.06±0.27）μmol/g］；C 组在乙醇戒断后，前额叶皮质、顶叶皮质、海马脑区 细胞内VC 水平［分别为（1.20±0.29）、（1.05±0.06）、（1.21±0.15）μmol/g］有所恢复，但仍明显低于A 组 （均P＜ 0.01）；C组大鼠颞叶皮质细胞内VC水平［（1.37±0.04）μmol/g］显著高于顶叶皮质（P＜0.05）；D组 各脑区细胞内VC水平均有回升趋势，前额叶皮质细胞内VC水平显著高于顶叶皮质［（1.63±0.24）μmol/g 比（1.26±0.16）μmol/g，P＜0.05］；E组前额叶皮质、顶叶皮质、颞叶皮质、海马区细胞内VC水平［分别为 （1.72±0.19）、（1.43±0.22）、（1.67±0.19）、（1.86±0.22）μmol/g］均较B组显著升高（均P＜0.01），逐渐恢复至正 常水平，海马区VC水平显著高于顶叶皮质（P＜0.05）。（4）Western blot结果显示，与A组比较，B、C、D组大 鼠前额叶皮质、顶叶皮质及C、D、E组大鼠海马区的SVCT2蛋白均显著升高（均P＜0.05）。结论 大量饮 酒4 d可致大鼠脑损伤，乙醇干预后大鼠脑脊液中及各脑区脑组织匀浆中VC水平呈现负相关的变化过程， 此过程中SVCT2蛋白表达上调，这将有助于脑脊液内的VC被转运至各脑区神经元内发挥抗氧化作用。     

奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞保护作用研究

目的探究奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞的保护作用及其机制。方法采用谷氨酸损伤PC12细胞建立模型,用MTS法考察奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞存活率的影响,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2和Bax的变化。结果谷氨酸造模浓度为12.5 mmol/L,奇壬醇组细胞的存活率高于模型组(P 0.01)。模型组细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01),奇壬醇组细胞的凋亡率显著低于模型组(P 0.01)。与对照组相比较,模型组caspase-3和Bax蛋白的表达显著升高,Bcl-2蛋白的表达显著降低,而与模型组相比较,奇壬醇组caspase-3和Bax蛋白的表达量显著降低,Bcl-2蛋白的表达显著升高,差异均有统计学意义(P 0.01)。结论谷氨酸能诱导PC12细胞凋亡,而奇壬醇通过抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,发挥其对PC12的保护作用。     

镇心省睡益智方及其精油对AD模型小鼠学习记忆的影响

目的:观察镇心省睡益智方水提液及其精油对β淀粉样前体蛋白基因/早老素基因(APP/PS1)双转基因小鼠学习记忆的影响并探讨其可能机制。方法:采用APP/PS1双转基因痴呆小鼠及同月龄相同遗传背景C57BL/6JNju小鼠2种小鼠。C57BL/6JNju小鼠作为正常组,APP/PS1双转基因痴呆小鼠随机分为模型组,镇心省睡益智方精油低、高质量浓度组(12.13,48.50 mg·L~(-1)),镇心省睡益智方水提液组(0.46 g·kg~(-1)),每组12只。每天给药1次,连续给药22 d。给药结束后采用跳台实验、Morris水迷宫实验对小鼠行为学能力进行检测,采用尼氏染色观察海马CA1区神经元变化,采用硫磺素(Th S)染色观察海马DG区老年斑(SP)沉积,采用免疫组化法检测小鼠脑组织中葡萄糖转运蛋白1(GLUT1),胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠海马组织中乙酰胆碱(ACH),γ-氨基丁酸(GABA),谷氨酸(GLU)含量的变化。结果:与正常组比较,模型组小鼠跳台实验潜伏期显著缩短,错误次数显著增加(P0.01),Morris水迷宫实验定位航行逃避潜伏期明显延长(P0.05,P0.01),海马CA1区神经元出现缺失,DG区出现明显的老年斑沉积(P0.05),ACH,GLUT1含量均显著下降(P0.01),GABA,GLU水平及IRS-1的表达均显著升高(P0.01);与模型组比较,各给药组均可显著延长小鼠跳台实验潜伏期、减少跳台错误次数(P0.01),明显降低定位航行小鼠逃避潜伏期(P0.05,P0.01),可一定程度保护小鼠海马CA1区神经元,减少DG区老年斑沉积(P0.05,P0.01),明显增加小鼠脑组织中ACH,GLUT1表达(P0.05,P0.01),显著降低GABA,GLU水平及IRS-1的表达(P0.01)。结论:镇心省睡益智方水提液及其精油能够改善APP/PS1小鼠的学习记忆行为,保护神经元,增加脑组织GLUT1的表达,减少脑组织IRS-1的表达,减少老年斑沉积,升高ACH含量,降低GABA,GLU含量,可能是其防治阿尔茨海默症的机制。     

治疗冠心病常用中药对CYP450酶系及转运体影响的研究进展

冠心病患病率及死亡率逐年上升,已成为威胁人民健康的主要病因之一。目前中西药物联用是治疗冠心病的主要形式,药物间代谢性相互作用引起的安全性及有效性问题也日益受到关注。本文针对临床上常用的治疗冠心病中成药,按照辨证分型从CYP450酶系和转运体的角度探讨与西药可能发生的潜在代谢性药物相互作用。     

酸枣仁汤加味对抑郁大鼠海马谷氨酸受体表达的影响

目的:观察酸枣仁汤加味对慢性束缚应激抑郁大鼠海马谷氨酸受体表达的影响,探讨其基于谷氨酸受体的抗抑郁机制。方法:将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、酸枣仁汤加味低、中、高剂量组、氯胺酮组,每组10只。除正常组外,其余各组采用慢性束缚应激(CRS)制备大鼠抑郁模型,酸枣仁汤加味低、中、高剂量组分别灌胃酸枣仁汤加味6,12,24 g·kg~(-1),氯胺酮组腹腔注射氯胺酮15 mg·kg~(-1),正常组和模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,给药干预21 d。采用Morris水迷宫和新奇摄食实验评价大鼠的抑郁行为;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织NMDAR1,NMDAR2A,NMDAR2B,GluR1,mGluR1,CaMKⅡα和CaMKⅡβ蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组新奇摄食时间及逃避潜伏期显著延长(P0.01),空间探索时间显著缩短(P0.01);模型组大鼠海马组织NMDAR1,NMDAR2A,NMDAR2B,mGluR1和CaMKⅡβ表达水平均显著升高(P0.01);而GluR1,CaMKⅡα水平均显著降低(P0.01)。与模型组比较,酸枣仁汤加味中、高剂量组新奇摄食时间、逃避潜伏期显著缩短(P0.01),空间探索时间显著延长(P0.01);酸枣仁汤加味中、高剂量组NMDAR1,NMDAR2A,NMDAR2B,mGluR1和CaMKⅡβ蛋白表达水平均显著降低(P0.01);而GluR1,CaMKⅡα蛋白表达显著增高(P0.01)。结论:酸枣仁汤加味可显著改善慢性抑郁大鼠行为学,其机制可能与下调NMDAR2A,NMDAR2B,mGluR1和CaMKⅡβ表达水平,上调GluR1和CaMKⅡα表达有关。     

谷氨酸受体在左旋多巴诱导的异动症中的相关研究进展

在帕金森病(PD)患者中,长期使用左旋多巴而诱导的异动症(LID)显著影响着左旋多巴的疗效及患者的生活质量,现有的应对方案效果也均不甚理想,其原因与LID的机制目前尚未完全阐明密切相关。近年来越来越多的研究证实,谷氨酸能系统与多巴胺能系统紧密关联,谷氨酸受体在LID中的作用也日益凸显,特别是代谢型谷氨酸受体(mGluR)4、mGluR5以及部分离子型谷氨酸受体(iGluRs)在LID的机制研究和临床药物研究中更是关注热点。笔者现对各类谷氨酸受体在LID中的变化、作用以及相关的临床研究进展进行综述,以期为PD患者中LID的诊治和机制阐明提供新思路。