液质联用技术评估汞接触污染蟾蜍泌酥中蟾蜍甾烯水平

目的:运用液质联用技术研究重金属汞皮肤接触中华大蟾蜍后生理状态及泌酥中蟾蜍甾烯水平变化,为中药蟾酥品质评价提供参考。方法:配制不同质量浓度的氯化汞溶液(0.5,0.75,1.0 g·L~(-1))对蟾蜍进行半静水式处理,观察其生理状态,且在30 d后收集蟾蜍耳后腺分泌液,进一步采用液相-质谱联用技术测定蟾蜍泌酥中游离型蟾蜍甾烯的水平,结合Hem I热图软件进行数据分析。结果:氯化汞接触明显影响蟾蜍泌酥中蟾蜍甾烯水平,和正常组比较,低质量浓度(0.5 g·L~(-1))汞污染组有20种蟾蜍甾烯水平明显上调,其中有12个物质发生1.5倍变化。而中质量浓度(0.75 g·L~(-1)),高质量浓度(1.0 g·L~(-1))污染组分别有15,13种物质发生下调,且大部分为中低脂溶性蟾蜍甾烯(异沙蟾毒精、去乙酰华蟾毒精等)。结论:重金属汞污染对蟾蜍甾烯水平有潜在影响,且随着浓度的升高呈现明显降低趋势。     

蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中对Bcl-2、Survivin、Smac/DIABLO表达的影响

目的 研究蟾蜍灵在诱导HL-60细胞凋亡过程中，对线粒体凋亡途径相关基因Bcl-2、Bax、Survivin及Smac／DIABLO表达的影响。方法 采用锥虫蓝拒染法检测细胞存活情况，细胞形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot分析Bcl-2、Bax、Smac／DIABLO、Survivin及caspase-3蛋白表达，RT-PCR检测SurvivinmRNA表达。结果 蟾蜍灵抑制HL-60细胞增殖，24，48及72h的，IC50值分别为25．8，8．0及2．1nmol/L。蟾蜍灵大于50．0nmol/L时可明显诱导HL-60细胞凋亡。50．0nmol／L蟾蜍灵作用6，12，24及48h，Bcl-2蛋白表达分别下调至作用前的88．6％，53．3％，19．2％及9．5％，而Bax蛋白表达无明显变化，Bcl-2／Bax比值由2．0分别降至1．7，1．1，0．4及0．2。Survivin蛋白表达分别下调至作用前的75．2％，54．8％，37．5％及20．3％；Survivin mRNA表达在作用6，12和24h后分别下调至作用前的85．7％，39．4％和12．5％，在作用48h后几乎检测不到。50．0nmol／L蟾蜍灵作用12，24及48h，线粒体部分的Smac／DIABLO蛋白表达分别下调至作用前的77．5％，21．2％及15．3％，而胞浆部分的Smac／DIABLO蛋白表达分别上调至作用前的1．4，2．0．及3．5倍。蟾蜍灵作用8～48h可检测到caspase-3的活化亚基。结论 蟾蜍灵诱导的HL-60细胞凋亡与Bcl-2及Survivin表达下调、线粒体释放Smac／DIABLO及caspase-3活化有关。     

一种直接破坏蟾蜍(蛙)脑和脊髓的新方法

破坏蟾蜍(蛙)脑和脊髓方法是机能实验学课程中常用的基本实验操作技能之一,其传统法是通过枕骨大孔先后破坏脑和脊髓组织达到处死蟾蜍(蛙)目的,此种方法很大程度上凭感觉和经验才能一次成功,对于初学者来说,往往一次成功率很低.本文介绍的直接法可一次性直接将脑和脊髓完全破坏,简单易行,成功率高,适于教学中推广应用.     

蟾蜍灵对小鼠足细胞阿霉素模型nephrin和p38表达的影响

目的:探讨蟾蜍灵(bufalin)对阿霉素损伤足细胞nephrin和p38表达的影响。方法:体外培养正常足细胞并进行分组:对照组、蟾蜍灵组、阿霉素诱导组和阿霉素诱导+蟾蜍灵组。制备阿霉素损伤足细胞模型,蟾蜍灵按一定梯度浓度范围干预足细胞,MTT法确定其作用于足细胞的安全、有效剂量。倒置显微镜观察足细胞形态,实时荧光定量PCR检测足细胞nephrin和p38基因相对表达水平。结果:MTT法提示蟾蜍灵浓度10-8mol/L,足细胞成活率在90%以上。阿霉素诱导组、阿霉素诱导+蟾蜍灵组、蟾蜍灵组,倒置显微镜下观察足细胞形态与对照组相比无明显改变。实时荧光定量PCR检测足细胞nephrin mRNA相对表达,蟾蜍灵组较对照组无明显变化,阿霉素诱导组nephrin mRNA表达与对照组相比显著下降(P<0.05),阿霉素+蟾蜍灵组nephrin mRNA表达仍下降,但与阿霉素组比较明显升高(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测p38 mRNA表达,各组较对照组表达均升高(P<0.05),阿霉素诱导组升高最显著,阿霉素诱导+蟾蜍灵组较阿霉素诱导组表达明显降低(P<0.05)。结论:蟾蜍灵可能通过调控足细胞nephrin的表达减缓阿霉素对足细胞的损害,此调节过程可能与足细胞p38的表达变化有关。     

蟾蜍治疗白血病成活31年1例

某男,31年前疑“感冒”发热,用青霉素80万U、链霉素1g/d肌注2周,未退热。WBC值128×109/L,腋窝、腹股沟、颈部多个淋巴结肿大,约蚕豆大小,肝于肋下8cm,脾于脐下3cm,质中,边钝。在江西医学院第二附属医院淋巴结穿刺,诊断为“淋巴肉瘤”。在江西省人民医院骨髓穿刺诊断为“慢性淋     

酸碱度对蟾蜍离体腓肠肌收缩能力的影响

目的 研究肌肉疲劳产生的生理学机制，寻找提高人体运动能力的方法和措施，观察了酸碱度对蟾蜍离体腓肠肌收缩能力的影响。方法 采用D951生理实验教学系统，记录分析了置于pH值为6.2,6.4,6.6,6.8,7.0,7.2,7.4,7.6,7.8林格液中的蟾蜍离体腓肠肌（n=94)的单收缩曲线。结果 （1）蟾蜍腓肠肌收缩能力最佳的pH值为6.8-7.2；（2）pH值在7.4-7.8时，肌肉在初期出现强直收缩，且pH值越高，强直收缩的持续时间越长。（3）随肌肉收缩的不断进行，舒张期时间逐渐延长，缩短期时间不变。结论 蟾蜍腓肠肌在pH6.8-7.2之间收缩能力最佳。pH值过高或过低都将导致肌肉的收缩能力下降。肌肉舒张能力的降低是肌肉疲劳的主要特征之一。为防止肌肉疲劳应提高人体对酸的缓冲能力，但碱性物质的过量补充也可导致肌肉收缩能力下降，且易导致运动初期肌肉的强直性收缩。     

酸碱度对蟾蜍离体腓肠肌收缩能力的影响

目的研究肌肉疲劳产生的生理学机制,寻找提高人体运动能力的方法和措施,观察了酸碱度对蟾蜍离体腓肠肌收缩能力的影响。方法采用D951生理实验教学系统,记录分析了置于pH值为6.2,6.4,6.6,6.8,7.0,7.2,7.4,7.6,7.8林格液中的蟾蜍离体腓肠肌(n=94)的单收缩曲线。结果(1)蟾蜍腓肠肌收缩能力最佳的pH值为6.8～7.2;(2)pH值在7.4～7.8时,肌肉在初期出现强直收缩,且pH值越高,强直收缩的持续时间越长。(3)随肌肉收缩的不断进行,舒张期时间逐渐延长,缩短期时间不变。结论蟾蜍腓肠肌在pH6.8～7.2之间收缩能力最佳。pH值过高或过低都将导致肌肉的收缩能力下降。肌肉舒张能力的降低是肌肉疲劳的主要特征之一。为防止肌肉疲劳应提高人体对酸的缓冲能力,但碱性物质的过量补充也可导致肌肉收缩能力下降,且易导致运动初期肌肉的强直性收缩。     

儿童服食蟾蜍导致心脏毒性临床救治体会

目的探讨儿童蟾蜍毒素导致心脏毒性临床表现及其救治方法。方法回顾性分析4例服食蟾蜍中毒患儿的临床诊治资料,观察入院时和住院后24 h、48 h、72 h患儿的心电图(ECG)、心肌损伤生物学指标的变化和主要救治手段。结果 4例患儿均出现过缓型心律失常和心肌损害,经过血液灌流(HP)结合药物治疗,3例患儿ECG和心肌损伤指标在48 h内恢复正常,最后痊愈出院,1例患儿由于服食蟾蜍量多、年龄幼小和病情危重,最终死亡。结论儿童蟾蜍中毒主要以心脏毒性为主,血液灌流结合药物治疗是救治蟾蜍中毒的有效措施。     

蟾蜍毒素对S180荷瘤小鼠肉瘤细胞Mg~(2+)-ATP酶、葡萄糖-6-磷酸酶活性的影响

目的探讨醇溶性蟾蜍毒素对S180荷瘤小鼠肉瘤细胞Mg2+-ATP酶(Mg2+-ATPase)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性的影响。方法乙醇溶解蟾蜍分泌物原浆,采用减压蒸馏等方法,进一步部分分离纯化,获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物(Ethanol extract of toad venom,简称EET),将其作用于S180荷瘤小鼠模型,计算肿瘤抑制率,应用酶化学染色法观察S180肉瘤细胞酶活性的变化。结果蟾蜍毒素组和氟脲嘧啶组的肿瘤抑制率分别为35.6%和36.9%(P<0.05),细胞质膜标志酶Mg2+-ATPase、内质网标志酶G-6-Pase反应颗粒变小,数量减少,密度变低,提示酶活性明显下降。结论蟾蜍毒素可降低S180荷瘤小鼠肉瘤细胞质膜标志酶Mg2+-AT-Pase及内质网标志酶G-6-Pase的活性,抑制肿瘤细胞的生长。     

华蟾素注射治疗老年三叉神经痛56例分析

目的探讨华蟾素外周神经分支注射治疗老年原发性三叉神经痛的疗效。方法对56例老年原发性三叉神经痛患者进行外周神经分支注射华蟾素治疗,1 a后观察疗效。结果 48例疼痛缓解,疼痛缓解率为89.29%。结论华蟾素三叉神经外周分支注射治疗老年原发性三叉神经痛创伤小、并发症少,效果可靠。